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应用抑制性消减杂交技术克隆HCV NS3蛋白反式激活基因2的上调基因
被引量:
2
1
作者
党晓燕
成军
+5 位作者
邓红
王建军
杨倩
刘妍
纪冬
王春花
《世界华人消化杂志》
CAS
2004年第4期847-850,共4页
目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA消文库,克隆HCV NS3蛋白反式激活相关基因. 方法:以HCV NS3表达质粒pcDNA3.1(-)-NS3转染HepG2 细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染...
目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA消文库,克隆HCV NS3蛋白反式激活相关基因. 方法:以HCV NS3表达质粒pcDNA3.1(-)-NS3转染HepG2 细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并合成cDNA,经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析. 结果:成功构建人HCV NS3蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA消减文库.文库扩增后得到61个白色克隆,进行菌落PCR分析,均得到100-1000 bp插入片段.挑取30 个插入片段测序分析,得到30个已知功能基因序列. 结论:筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、物质代谢、免疫及细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因,推测了NS3TP2可能存在的调控机制的线索.
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关键词
抑制性消减杂交技术
克隆
HCV
NS3蛋白
反式激活基因2
上调基因
细胞凋亡
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职称材料
题名
应用抑制性消减杂交技术克隆HCV NS3蛋白反式激活基因2的上调基因
被引量:
2
1
作者
党晓燕
成军
邓红
王建军
杨倩
刘妍
纪冬
王春花
机构
陕西西安交通大学第二医院感染科
中国人民解放军第
出处
《世界华人消化杂志》
CAS
2004年第4期847-850,共4页
基金
国家自然科学基金攻关项目
No.C03011402
+7 种基金
No.C30070689军队"九
五"科技攻关项目
No.98D063军队回国留学人员启动基金项目
No.98H038军队"十
五"科技攻关青年基金项目
No.01Q138军队"十
五"科技攻关面上项目
No.01MB135~~
文摘
目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA消文库,克隆HCV NS3蛋白反式激活相关基因. 方法:以HCV NS3表达质粒pcDNA3.1(-)-NS3转染HepG2 细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并合成cDNA,经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析. 结果:成功构建人HCV NS3蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA消减文库.文库扩增后得到61个白色克隆,进行菌落PCR分析,均得到100-1000 bp插入片段.挑取30 个插入片段测序分析,得到30个已知功能基因序列. 结论:筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、物质代谢、免疫及细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因,推测了NS3TP2可能存在的调控机制的线索.
关键词
抑制性消减杂交技术
克隆
HCV
NS3蛋白
反式激活基因2
上调基因
细胞凋亡
分类号
R373.21 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
应用抑制性消减杂交技术克隆HCV NS3蛋白反式激活基因2的上调基因
党晓燕
成军
邓红
王建军
杨倩
刘妍
纪冬
王春花
《世界华人消化杂志》
CAS
2004
2
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引证文献
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