木糖代谢基因表达水平对酿酒酵母重组菌株产物形成的影响

以Ｅ．ｃｏｌｉＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ穿梭质粒ＹＥｐ２４为骨架，将树干毕赤酵母（ＰｉｃｈｉａｓｔｉｐｉｔｉｓＣＢＳ６０５４）的木糖还原酶（ＸｙｌｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅＸＲ）基因ＸＹＬ１及木糖醇脱氢酶（ＸｙｌｏｌｉｔｏｌｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅＸＤＨ）基因ＸＹＬ２分别以不同的相对表达方向置于酿酒酵母的乙醇脱氢酶Ｉ（ＡＤＨ１）启动子和磷酸甘油激酶（ＰＧＫ）启动子下，构建不同ＸＹＬ１及ＸＹＬ２的重组质粒。这些重组质粒分别转化酿酒酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＨ１５８）受体菌。得到的重组菌株表现出不同的基因表达水平，ＸＲ与ＸＤＨ的酶比活力比值即ＸＲ／ＸＤＨ的变化范围在００６～１７５之间。当ＸＹＬ１或ＸＹＬ２受ＰＧＫ１启动子控制同时位于ＡＤＨ１启动子下游时，检测到最高的酶比活力。为了加强对木糖的利用，在ＸＹＬ１、ＸＹＬ２基因的酵母重组菌株中又引入磷酸戊糖途径中的转醛酶（Ｔｒａｎｓａｌｄｏｌａｓｅ）基因ＴＡＬ１及转酮酶（Ｔｒａｎｓｋｅｔｏｌａｓｅ）基因ＴＫＬ１，使酵母菌在原有水平的基础上超表达合成转酮酶及转醛酶。同时具有ＸＹＬ１和ＸＹＬ２以及超表达基因ＴＡＬ１、ＴＫＬ１的酵母重组菌株可以在木糖为唯一碳源平板?