3种方法诱导猪去分化脂肪细胞成肌分化效果的比较

目的采用3种方法比较诱导猪去分化脂肪细胞(DA)成肌分化的效果,旨在筛选诱导猪DA成肌分化的较优方法。方法采用糖皮质激素、半乳糖凝集素-1(galectin-1)法、5-氮胞苷(5-aza)分别诱导猪DA成肌分化,于培养6 d、15 d和21 d后,并分别用倒置显微镜观察分化的细胞形态;诱导21 d后用间接免疫荧光法检测成肌特异蛋白结蛋白(desmin)和肌球蛋白重链(MyHC)的表达,用Real-time PCR检测肌细胞生成素(MyoG)mRNA的表达,每种方法诱导3组,每组重复检测3次。结果诱导细胞的形态学观察显示,galectin-1法诱导的肌管形态最佳,多核细胞数量也最多;5-aza法次之,但诱导过程中细胞死亡率较高;糖皮质激素法诱导的细胞形态不规则,多形成放射状突起,而且出现较多成脂分化细胞。间接免疫荧光分析显示,galectin-1法和糖皮质激素法诱导的细胞Desmin、MyHC和MyoG mRNA都呈强阳性表达,而在5-aza法诱导的细胞这两种蛋白和基因都呈弱表达。结论从诱导细胞的肌管形态,分化的纯度,生存能力,特异蛋白和基因的表达量等综合判断,诱导猪DA成肌分化,galectin-1法优于糖皮质激素法和5-aza法。