一种用于PCR的番茄DNA快速粗提方法

在对植物进行分子生物学研究时需要提取植物基因组DNA并对其进行PCR克隆,目前实验室常用CTAB法提取植物DNA,但其步骤相对繁琐,需要用有机溶剂反复抽提,在样本较多时,耗时较长。NaOH可以提取多种物种DNA,本研究优化了实验室条件下更加快速、经济、安全、高效的提取植物DNA的方式,主要包括以下步骤:利用液氮快速粉碎植物样品;采用碱裂解(0.5 mol/L NaOH)的方式一步提取DNA;提取的DNA利用TE缓冲液进行中和;以中和的粗提DNA作为模板进行PCR反应。本研究利用简单的DNA提取流程并结合PCR检测方式,完成了番茄转化子的快速初步鉴定。同时还证明了该NaOH法可用于番茄不同组织的DNA提取。本研究中整个操作过程步骤简单,耗时短,可在短时间内完成大量植物样品的DNA提取,无需使用氯仿、异丙醇等有毒物质,完成提取时间约为CTAB提取法的1/5,而且提取的不同组织DNA完整性较好,质量可观,满足常规的PCR检测,可用于基因克隆及转化子筛选鉴定,具有一定的利用价值和应用前景。

一种用于PCR的丝状真菌DNA快速粗提方法

为了在实验室条件下更加快速、经济、安全、高效地提取丝状真菌DNA,研究出了一种利用NaOH碱裂解快速提取DNA的方法,主要包括以下步骤:利用液氮快速粉碎样品;采用碱裂解(NaOH)的方式一步提取DNA;以TE缓冲液中和;以中和后的DNA作为模板进行基因克隆及PCR分析。通过比较不同的NaOH浓度提取尖孢镰刀菌DNA质量,确定最适NaOH浓度为0.5 mol/L。试验用此方法提取了丝状真菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、链格孢(Alternaria alternata)及核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)的基因组并用于基因克隆。同时,利用该方法提取的DNA质量可满足尖孢镰刀菌转化子的快速PCR鉴定需求。综上所述,与利用CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)提取DNA相比,利用NaOH碱裂解法,可以更加快速提取丝状真菌的DNA,操作步骤简单,节约时间,无须使用氯仿、异丙醇等有毒物质,而且提取的丝状真菌DNA完整性较好,质量可观,可用于基因克隆及转化子筛选鉴定,具有一定的利用价值和推广前景。