脂质体包被鸡IL-18可增强新城疫活疫苗的免疫效果

首次将重组鸡白细胞介素18(mChIL-18)用脂质体包被,将不同浓度的mChIL-18脂质体联合新城疫疫苗对鸡群进行免疫,观察其对新城疫疫苗的免疫增强作用。1日龄SPF鸡分为6组,分别为空白对照组、单纯疫苗组、新城疫疫苗+0.2mL mChIL-18组、新城疫疫苗+0.1mL mChIL-18组、新城疫疫苗+0.3mL mChIL-18组和新城疫疫苗+空载体对照组。所有免疫组鸡于7日龄免疫,免疫后每周抽取外周血及外周抗凝血,应用血凝抑制试验和流式细胞仪来检测免疫鸡的HI抗体水平及CD4+和CD8+T淋巴细胞的变化情况。并于最后一次采血后,对各组试验鸡应用F48E9标准强毒进行攻击(100ELD50.只-1)。结果表明mChIL-18脂质体的最佳剂量为0.2mL.只-1,其不仅能够显著增强机体的细胞免疫和体液免疫,而且还可以明显提高新城疫疫苗的保护率。

鸡源肠球菌体内外铅吸附作用研究

利用已分离鉴定的鸡源肠球菌进行体内外除铅作用试验。体外试验结果显示,菌株JT1清除率最高,为66.95%,可耐受Pb^(2+)质量浓度400 mg/L以上。选用小鼠为实验动物模型,研究该菌株的体内除铅作用。通过自由饮水建立铅中毒模型,在造模过程中测定全血铅的含量;造模成功后通过投给JT1菌液进行除铅试验。结果显示,该菌株对亚慢性铅中毒小鼠具有明显的除铅作用,血液中铅清除率高达79.4%,为利用该菌进一步开发研究,预防和缓解人体铅中毒提供科学依据。

食源性致病菌快速检测试剂盒的研制与应用

目的:研制1种快速检测沙门氏菌、大肠杆菌O157∶H7和金黄色葡萄球菌的三重PCR检测试剂盒,并加以应用。方法:设计3种待检目的菌特异性引物,优化PCR反应条件,建立多重PCR检测试剂盒,并对其特异性、灵敏度、抗干扰性、准确性等方面进行评估。结果:该试剂盒特异性好,灵敏度高,3种待检目的菌在不同食品介质中的检出限均达到101CFU/mL,抗干扰性强。在6个月保存期内,其稳定性和准确性均未发生改变。结论:本研究建立的试剂盒可同时检测上述3种病原菌,且具有稳定性好、准确性高等特点,可用于禽肉及其制品的日常微生物安全监测。

食源性致病菌多重PCR检测方法的建立与应用

目的:在多重PCR体系中引入扩增内标,以期快速检测肠炎沙门氏菌和大肠杆菌O157∶H7,提高检测的准确率。方法:优化多重PCR反应条件,同时引入竞争性IAC,建立一种多重IAC-PCR法,并对该方法进行特异性、灵敏度和抗干扰评估。结果:所建立的多重IAC-PCR法检测特异性强,灵敏度高。当引入IAC质量浓度为4×10-4ng/μL时,不会影响原多重PCR检测灵敏度,抑制物对IAC的影响大于对两目的 DNA的影响。结论:本IAC-PCR法可有效指示假阴性结果,具有快速、准确检测肠炎沙门氏菌和大肠杆菌O157∶H7的优点。

食源性致病菌快速检测试剂盒的研制

目的:研制一种快速检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生李斯特菌的三重PCR试剂盒,并在山东泰安地区禽肉市场采样检测。方法:以沙门氏菌的invA基因、单增李斯特菌溶血素hlyA基因和金黄色葡萄球菌耐热核酸酶Nuc基因序列作为目的基因片段金黄色葡萄球菌、沙门菌和单核细胞增生李斯特菌的特异性抗原基因序列,分别设计1对引物,优化各种工作条件,建立一种多重PCR诊断试剂盒。结果:该试剂盒特异性好,敏感性高,沙门氏菌检出极限为4.7cfu/mL,单核细胞增生李斯特菌检出极限17cfu/mL,金黄色葡萄球菌检出极限4.5cfu/mL,可在5h之内得到检测结果。在山东泰安地区取样58份,其中25份样品中检出沙门氏菌阳性,带染率43.1%;6份样品中检出单增李斯特菌阳性,带染率为10.3%;3份样品中检出金黄色葡萄球菌阳性,带染率为5.2%。结论:建立的试剂盒能同时检测上述3种病原菌,可用于食品及其原料的生物安全监测,也可用于兽医临床诊断。

大肠埃希O157:H7等致病菌多重PCR法快速检测试剂盒的研制

目的:研制一种能够同时快速检测大肠埃希O157:H7、志贺氏菌和致病性蜡样芽孢杆菌的三重PCR试剂盒。方法:以大肠埃希O157:H7的hlyAB基因、痢疾志贺氏菌的IpaH基因和致病性蜡样芽孢杆菌的hblA基因作为目的基因片段O157:H7、痢疾志贺氏菌和致病性蜡样芽孢杆菌的特异性抗原基因序列,分别设计1对引物,并对其反应条件进行优化,建立1种多重PCR检测试剂盒。结果:本试剂盒可准确检测出生肉和即食肉制品中的上述3种致病菌,O157:H7检出极限为19.8cfu/mL,志贺氏菌检出极限为17cfu/mL,蜡样芽孢杆菌检出极限为17.7cfu/mL。可在5h内完成全部反应过程,得出检测结果。结论:本试剂盒在理论和实际应用方面均具有优越性,能够同时检测上述3种病原菌,可用于食品及其原料的生物安全检测,也可用于兽医临床诊断。

铅离子印迹乳糖化壳聚糖的制备及其铅吸附作用

目的:合成铅离子印迹乳糖化壳聚糖,探讨其在体内外对铅离子的吸附性能。方法:以铅离子为模板分子,乳糖化壳聚糖为功能单体,加入交联剂环氧氯丙烷,用离子印迹技术合成铅离子印迹的乳糖化壳聚糖。通过扫描电镜对其形态结构进行表征。采用电感耦合等离子质谱法(ICP)对影响铅离子印迹乳糖化壳聚糖吸附铅离子的p H值、吸附时间、离子选择性进行研究。以铅离子印迹乳糖化壳聚糖灌喂铅中毒实验模型小鼠,并设空白对照组和铅中毒模型组,用ICP测定其铅、钙、铁、锌含量。结果:合成的铅离子印迹乳糖化壳聚糖对铅的最大吸附容量为43.98 mg/g;其吸附最适pH 5,最佳时间4 h,对铅离子具有选择吸附性。铅离子印迹乳糖化壳聚糖组与对照组相比,血铅、肝铅含量明显降低(P<0.01),血液和肝脏中钙、铁和锌的含量基本不变。结论:合成的铅离子印迹乳糖化壳聚糖,对体外和实验动物体内的铅离子都具有选择性吸附作用。