简化一步深低温保存法保存羊膜的实验研究

目的 观察简化一步深低温保存法保存不同的时间对羊膜活性的影响。方法 取健康剖宫产产妇胎盘 ,剥离其羊膜 ,分成 2 .5cm× 2 .5cm小块 ,用简化一步深低温保存法保存 1、3个月后取羊膜行光镜、电镜、酶组织化学 [乳酸脱氢酶 (LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH) ]及免疫组织化学 [碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF) ]观察 ,并与新鲜羊膜对比。结果 (1 )光镜下 ,简化一步深低温保存法保存 1、3个月时羊膜上皮形态完好 ;(2 )电镜下 ,简化一步深低温保存法保存 1、3个月部分线粒体肿胀 ,细胞核变化不明显 ;(3 )简化一步深低温保存法保存 1、3个月时 2种酶活性与对照组相比差异无显著性 (P>0 .0 5) ;(4)b FGF分布于羊膜上皮和基质层。简化一步深低温保存法保存 1、3个月 b FGF表达与在新鲜羊膜中的表达差异无显著性 (P>0 .0 5)。

简易法深低温保存角膜的实验和临床评价

自1986年3月以来,用自制的“QL生物降温仪”对简易法深低温保存角膜进行了系统研究,应用光镜、电镜、酶组织化学、动物实验和临床穿透性角膜移植及非接触式角膜内皮显微镜检测结果证明,深低温保存角膜组织结构完整、功能良好、临床移植效果满意。

活性生物瓣膜和血管冻贮技术的初步研究

用改良的方法建立了活性同种瓣膜和血管库,观察了用三抗培养液37℃消毒24h和低温保护剂(CPM)在室温条件下对组织的影响。结果表明,冻存复温的组织培养24h后,糖利用率和谷-草转氨酶(AST)明显降低,72h后乳酸脱氢酶(LDH)则明显升高,此后与新鲜组织趋于一致;三抗培养液消毒和CPM对组织均无明显影响;组织学观察发现冻存复温组织生长较新鲜组织稍晚。用该技术低温保存的活性同种瓣膜和血管进行10例临床移植,获得满意的效果。提示改良法低温冻贮活性生物瓣膜和血管技术已初步成功。

深低温长期保存巩膜的动物实验和临床应用

①目的异体巩膜已广泛地应用于眼科临床，以往异体巩膜采用无活性的酒精保存法。为探索活性巩膜的保存方法，本文对深低温长期保存活巩膜进行了动物实验和临床应用研究。②方法用深低温保存５３ｄ，３６２ｄ，１１２３ｄ的兔巩膜，分别做琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）、葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ－６－ＰＤ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、葡萄糖－６－磷酸酶Ｇ－６－Ｐ）、腺苷三磷酸酶（ＡＴＰ）活性测定；用深低温保存的兔巩膜行巩膜外垫压术和巩膜加固术实验，观察了术后兔脾脏和巩膜植片的组织病理学改变；用深低温保存４８～７１２ｄ的人尸巩膜行巩膜外垫压术和巩膜加固术进行了临床观察。③结果深低温保存兔巩膜的各种酶活性与对照组新鲜巩膜无明显差异；在术后８～９５ｄ，兔脾小结增生活跃，说明深低温保存巩膜仍具有抗原性，但植入之深低温保存巩膜逐渐与兔健康巩膜由疏松贴附至紧密愈合，炎性细胞也逐渐消退；用深低温保存人尸眼巩膜行临床应用获得满意效果。④结论深低温巩膜保存法是一种活性巩膜保存法，可为临床应用随时提供材料。

不同条件下低温保护剂对新鲜精子存活力的影响

对生育能力正常的男性精液标本,分别在二氧化碳培养箱内、恒温组织培养箱内和室温下(12～15℃)进行观察,比较在有低温保护剂(CPM)和无CPM的情况下,经6种不同方法处理的精子活动率和存活时间。分别于实验开始后3h,6h,12h和24h观察精子活动率。结果表明,二氧化碳培养箱内孵育的精子活动率,在6h内与其他条件下的活动率相比差异无显著性(P>0.05);室温下加CPM的12h精子活动率明显优于其他条件下的精子活动率,差异有显著性(P<0.01)。提示CPM室温条件下对精子也具有保护作用。

深低温保存大月龄胎儿血管和瓣膜组织的形态学评价

①目的 用形态学方法评价深低温保存大月龄胎儿血管和瓣膜组织的效果。②方法 同种材料取自大月龄脑死亡胎儿。在冷冻保护液浸泡后置于 4℃冰箱冷平衡 ,特制无菌冷冻袋包装。用液氮蒸气梯度降温方法完成降温 ,- 1 96℃长期保存。复温后光镜、电镜观察血管组织形态并与复温前比较。③结果 修剪后和解冻后的血管及瓣膜细菌培养结果均为阴性。光镜、电镜观察显示解冻后的主动脉基本结构完整 ,胶原纤维和弹力纤维形态结构正常 ,排列规则 ,局部可见黏液样变性以及部分内皮细胞脱落。④结论 本法同种材料的取材、冷冻保存效果可靠。初步建立了综合采集、长期冻存大月龄胎儿血管和瓣膜组织的方法和技术标准 。

冷冻复温后低温保护剂和精子激活剂对精子功能影响的研究

本文对冷冻复温后精子的功能进行了研究观察，发现精液保护剂（甘油－卵黄－枸橼酸钠）对冷冻复温后精子的存活有明显的保护作用，而单纯应用卵黄或甘油溶液却对精子功能存在不利的影响。体外处理精子时应用ＡＴＰ、肌苷对精子的功能无任何的改善。

晶体和胶体溶液对冷冻复温后精子功能的影响

①目的观察不同溶液对冷冻复温后精子功能的影响。②方法用４种胶体和４种晶体溶液分别孵育冷冻复温后的精子，检测孵育后精子对人宫颈粘液穿透力和不同时间的精子活动率。③结果胶体溶液孵育后１ｈ精子活动率好于晶体溶液（Ｆ＝８．７６３４，ｑ＝２．９５～５．１０，Ｐ＜０．０５），而晶体溶液中精子穿透力好于胶体溶液（Ｆ＝１１．６９０２，ｑ＝３．２３～４．６２，Ｐ＜０．０１），孵育１２ｈ后果糖和葡萄糖溶液组的精子活动率均明显高于对照组（ｑ＝７．１０，３．３４，Ｐ＜０．０１）。④结论选择使用胶、晶体溶液和果糖复合液对复温后精子进行适宜的处理，可以保持或改善精子功能状态，提高人工授精成功率。

影响助生殖技术的因素分析

目的 了解影响助生殖因素。②方法 用助生殖技术对 10 6例不孕妇女进行助孕 ,观察助生殖过程中激素水平对卵泡发育及排卵影响 ,不同获能方法对精子受精率影响 ,同时分析控制性超排卵 (COH)异常反应 卵巢过度刺激综合征 (OHSS)发生、发展相关因素。③结果 COH中 ,高雌二醇、低孕激素水平可促进卵泡发育 (t=1.99～ 6 2 5 .75 ,P <0 .0 0 1,0 .0 5 ) ;体外分离法获能精子活率明显高于上游法 (t=11.40～ 32 .41,P <0 .0 0 1) ;中、重度OHSS组胚胎移植日血清及卵泡液血管内皮生长因子 (VEGF)水平显著高于正常组 (t=4.2 6 ,11.5 1,P <0 .0 1)。④结论 激素水平、精子获能方法及VEGF水平对助生殖可能有影响作用。

液氮冷冻保存对大月龄人胎儿带瓣血管细胞活性的影响

目的探讨液氮冷冻保存对大月龄人胎儿带瓣血管细胞活性的影响。方法以脑死亡大月龄人胎儿带瓣主动脉为研究对象,胎龄24周以上,热缺血时间小于6h。每份标本一分为二,设新鲜对照组(对照组)和冷冻实验组(实验组),实验组在液氮内保存1周后取出。通过形态学观察、细胞培养和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色,评价液氮冷冻后的大月龄人胎儿带瓣血管细胞的活性。结果共采集12个大月龄人胎儿带瓣主动脉,冷冻保存的主动脉壁成纤维细胞及平滑肌细胞形态正常,胶原纤维排列整齐,但内皮细胞层部分脱落。冷冻前后血管组织块均有大量细胞生长,但实验组细胞增殖速度稍慢。对照组细胞在490nm波长的OD值为0.442±0.046,实验组细胞在490nm波长的OD值为0.424±0.041,二者比较差异无统计学意义(t=1.617,P=0.328)。结论液氮冷冻保存的大月龄人胎儿带瓣血管具有细胞活性。

正常男性附睾中精子功能的初步研究

目的 检测正常成年男性附睾中不同部位的精子指标 ,为男性附睾精子功能的研究提供实验资料。方法 将附睾切断分成附睾头、附睾尾和附睾体 ,分别纵向剖开 ,置于含有 10 %小牛血清的F10 溶液中 ,37℃孵育 30min ,孵育液作精子常规分析、低渗肿胀试验 (HOS)、精子 -宫颈粘液穿透试验。结果 附睾不同部位精子的形态和功能存在明显差异 ,尾部和体部精子的活率、活动力、HOS试验和CM穿透试验结果明显高于头部精子 ,差异有显著性 (P <0 .0 5或 0 .0 1) ,以尾部精子的各项指标最高 ,与正常排出体外的精子无显著差异 (P >0 .0 5 )。头部附睾未成熟精子、畸形精子比例明显高于尾部和体部附睾的精子 (P <0 .0 1和 0 .0 5 )。结论 附睾精子可应用于辅助生育技术 ,作为治疗梗阻性无精子症的最好选择。

冷冻复温后处理对精子功能影响的研究Ⅰ．不同介质处理的影响

本文对冷冻复温后精子在不同介质中进行了离心孵育处理，结果显示∶精子营养液可使低温冷冻保存后复温的精子在较长时间内保持良好的活动率；细胞培养液１６４０能显著提高复温后精子的人宫颈粘液的穿透力（Ｐ＜０．０５）。细胞培养液Ｍ１９９、Ｈａｍ＇ｓＦ１０和正常精浆对复温后精子功能无明显改善作用。离心处理（２０００ｒ／ｍｉｎ）对复温后精子功能无损害作用。