降温速率对低温保存动脉粘弹性的影响

使用DMA测定了3种降温速率低温保存的家兔颈总动脉的蠕变曲线。结果表明:1.5℃/min降温速率低温保存后,血管的粘弹性最接近新鲜对照组;而对应降温速率1.5,5,10℃/min,血管粘弹性依次降低。动脉的粘弹性极有可能是评估其低温保存效果的潜在评价指标。

不同复温方法对深低温保存兔颈总动脉力学性能的影响

①目的研究4种不同的复温方法对深低温保存兔颈总动脉力学性能的影响.②方法深低温保存后的兔颈总动脉,随机分成4组,分别采用4种不同的复温方法复温:37 ℃水浴、空气复温、-20 ℃冰和液氮冰复温,以新鲜血管为对照.并分别测定4种方法复温后动脉的力学性能,包括轴向和周向弹性模数和断裂应力.③结果所有冷冻复温后的血管轴向和周向参数及断裂应力均小于新鲜血管(F=2.89～13.38,q=2.45～9.15,P<0.05).随着降温速率的降低,血管轴向弹性模数和断裂应力等参数基本是增加的.液氮冰中复温的血管,其上述参数最接近新鲜血管.④结论逐步慢速复温可以改善深低温保存复温后血管的力学性能,液氮冰复温可能是最好的复温方法.

深低温保存兔颈总动脉体外灌注后的结构和力学性能研究

目的 探讨深低温保存对动脉血管组织学和力学性能的影响.方法 取20只新西兰兔的颈总动脉,用含1.5 mol/L 1,2-丙二醇的低温保护剂深低温(-196℃)保存10～15 d,并在预冷的冰袋内缓慢复温;以新鲜血管作为对照.对新鲜和冷冻-复温血管的平滑肌细胞(SMC)进行体外培养,观察和分析新鲜、冷冻-复温和冷冻复温后体外灌注6、12和24 h血管的内皮细胞、SMC、血管壁组织构和力学性能(轴向、周向弹性模量和断裂应力)的变化.结果 冷冻-复温后血管的SMC在体外培养中开始生长时间与新鲜血管基本相同(24～36 h),生长速度接近.深低温保存后,血管内皮细胞数量减少,电镜观察SMC数量和形态无明显变化,但血管的轴向弹性模量(5.82±0.55)、轴向断裂应力(58.78±6.96)和周向弹性模量(1.44±0.22)、周向断裂应力(3.45±0.40)均明显低于新鲜血管(分别为6.45±0.80、146.96±23.60和1.83±0.17、5.33±0.50,P＜0.05或P＜0.01).体外灌注后,冷冻-复温血管的内皮细胞脱落,SMC变性、坏死,内弹力纤维和胶原出现不同程度崩裂,力学性能指标中除了轴向弹性模量外,均进一步降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 兔颈总动脉SMC深低温保存效果满意,但体外灌注对经深低温保存血管的内皮细胞、SMC和血管壁结构具有明显损伤作用,导致血管力学性能显著降低.

用深低温保存的角膜材料行板层角膜移植术治疗边缘性角膜变性

目的:探讨用深低温保存的角膜材料行板层角膜移植术治疗边缘性角膜变性的效果。方法:对角膜边缘已经很薄,接近穿孔或已经穿孔的27例边缘性角膜变性患者,用深低温保存的角膜材料行板层角膜移植术治疗,观察术后视力,眼压,植片愈合及并发症等情况,随访时间为2a。结果:术后角膜边缘病变均未发展,术后1wk视力基本与术前相同,1.0者11例,0.6～0.8者6例,0.3～0.5者8例,0.05～0.25者2例。原穿孔的病例有术后一过性高眼压、前房反应、瞳孔欠圆等并发症。2a内只有3例发生了术后排斥反应。结论:用深低温保存的角膜材料完全可以用来进行板层角膜移植治疗边缘性角膜变性,弥补了新鲜角膜的来源限制与时效限制,是治疗边缘性角膜变性的理想材料。

体外培养后深低温保存兔颈总动脉结构和力学性能

①目的观察深低温保存后兔颈总动脉内皮细胞存在状态、平滑肌细胞存活与再生能力;观察并分析深低温保存后、体外培养后动脉血管壁的结构变化、血管力学性能变化.②方法获取兔子的颈总动脉并用含有1.5 mol/L 1,2-丙二醇(PROH)的低温保护剂深低温保存,复温时采用液氮中预冷的冰袋缓慢复温.以新鲜动脉作为对照.体外培养新鲜和冷冻复温后的动脉的平滑肌细胞(SMCs);同时将冷冻复温后的血管组织在体外培养6、12和24 h,以观察血管内皮细胞和SMCs的变化,以及血管壁的完整性(弹力膜或纤维的完整性)和这些血管的力学特性(弹性模量和断裂压力)的变化.③结果冷冻复温后血管SMCs在体外培养开始生长增殖所需的时间(24～36 h)几乎与新鲜血管相似,生长的速度也相似.冷冻复温后,血管内壁存留有少量的内皮细胞,平滑肌和血管壁结构没有明显变化.但是,血管力学性能显著降低(F=5.325～97.458,q=2.32～12.38,P<0.05、0.01).冷冻复温后的血管作为完整的组织体外培养后,所有的内皮细胞脱落,部分SMCs出现变性和坏死;弹力纤维和胶原出现不同程度的断裂,力学性能进一步降低(q=2.12～8.76,P<0.05、0.01).④结论本研究中应用的方法对于保护血管的SMCs是有效的,但是对于血管内皮细胞效果不好;冷冻复温过程和复温后体外培养损伤了血管壁的结构,降低了血管的力学性能.

二甲亚砜与第二信使效应剂对深低温保存血小板聚集功能的影响

①目的观察体积分数0.02二甲亚砜(DMSO)联合第二信使效应剂(ThromboSol)对深低温保存浓缩血小板聚集功能影响.②方法分别用体积分数0.02 DMSO、体积分数0.06 DMSO、体积分数0.02 DMSO+ThromboSol作为保存液,在-196 ℃冷冻保存浓缩血小板,并在冻存后1、3及6个月时分别取出复温,检测各组的血小板计数、二磷酸腺苷(ADP)和花生四烯酸(AA)诱导的聚集反应.③结果冷冻1、3及6个月体积分数0.02 DMSO+ThromboSol组血小板计数、ADP及AA诱导的聚集反应结果与体积分数0.06 DMSO组相比差异无显著意义(F=3.67～5.22,q=0.87～1.89,P>0.05),均高于体积分数0.02 DMSO组,差异有显著意义(q=3.43～4.26,P<0.05).但与新鲜组相比,3组冷冻后各指标结果均有所下降,差异有显著性(q=3.16～4.34,P<0.05).④结论在深低温保存浓缩血小板过程中第二信使效应剂的应用降低了DMSO的使用浓度.

深低温保存同种活性带瓣主动脉临床应用长期效果

目的观察改良法深低温保存的同种带瓣主动脉临床使用的长期效果并对该保存方法进行评价。方法30例法洛四联症病人分为两组，A组病人肺动脉功能发育良好，B组病人肺动脉发育不良。使用1989～1997年采用改良两步法深低温保存的同种活性带瓣主动脉标本（平均保存时间289d），行右室流出道重建术，临床使用6～12年后，应用心脏超声观察其反流、狭窄和钙化的情况。结果A组15例病人中肺动脉反流1例，肺动脉狭窄1例；B组15例病人中肺动脉反流3例，肺动脉狭窄1例，三尖瓣反流1例。30例病人超声检查显示同种血管及瓣膜均无钙化，活动良好。结论改良两步法保存的带瓣主动脉临床应用具有良好的远期效果。

二甲基亚砜和1,2-丙二醇对深低温保存兔颈总动脉平滑肌细胞的影响

①目的用二甲基亚砜(Me2SO)和1,2-丙二醇(PROH)深低温保存兔颈总动脉,评价两种保护剂对深低温保存复温后血管平滑肌细胞再生能力和超微结构的影响.②方法将兔颈总动脉用含有1.5 mol/L的Me2SO或1.5 mol/L PROH的低温保护剂深低温保存,并在冰袋中缓慢复温,新鲜血管作为对照.复温后和新鲜血管的平滑肌细胞进行体外培养,观察平滑肌细胞的再生能力;同时在透射电镜下观察平滑肌细胞的超微结构.③结果体外培养结果显示,新鲜血管的平滑肌细胞体外培养24 h后开始生长,PROH保存血管的平滑肌细胞在培养24～36 h后开始生长;Me2SO保存血管的平滑肌细胞体外培养36～48 h开始生长,而且再生细胞的数目显著少于前者,生长速度慢.透射电镜下,与新鲜血管的平滑肌细胞相比,PROH或Me2SO冷冻保存后血管的平滑肌细胞的线粒体等细胞器均无显著变化.但是Me2SO保存血管的平滑肌细胞核染色质的电子密度发生显著变化,异染色质的电子密度明显降低,与新鲜或PROH深低温保存血管平滑肌细胞核常染色质的低电子密度和异染色质的高电子密度明显不同.④结论 1.5 mol/L PROH能够有效地保持平滑肌细胞的活性,并且对细胞的再生能力没有明显的损伤作用.Me2SO损伤平滑肌细胞的再生能力,同时引起平滑肌细胞核染色质超微结构的变化.

小鼠卵巢组织的深低温保存和移植研究

①目的 采用深低温保存方法冷冻保存小鼠的卵巢组织,观察移植后卵巢功能和组织学的恢复情况。②方法 36只昆明种小鼠随机分为3组:假手术组、对照组(新鲜移植组)和深低温保存组。假手术组不切除卵巢,对照组切除卵巢后即行自体原位移植,深低温保存组则将双侧卵巢完全摘除后,行二期手术自体原位移植深低温保存的卵巢。观察所有小鼠的动情周期的变化,并对卵巢的卵泡发育情况进行组织学检查。③结果 假手术组小鼠的动情周期没有任何变化,对照组小鼠的动情周期也在手术后的不同时间内恢复正常,深低温保存组小鼠在完全切除卵巢后,完全失去了动情周期的变化;冷冻复温卵巢自体移植后,多数小鼠的动情周期恢复正常。组织学分析显示,深低温保存卵巢在自体移植后,卵巢可以存活,并有各级卵泡发育。④结论 采用深低温保存方法保存后的小鼠卵巢复温后保持组织活性,自体移植后小鼠的动情周期恢复,卵巢中有正常卵泡发育。

二甲亚砜与第二信使效应剂对深低温冻存血小板膜CD42b、CD62p表达的影响

①目的观察体积分数0.02二甲亚砜(DMSO)联合第二信使效应剂(ThromboSol,TS)在-196 ℃时对浓缩血小板膜CD42b、CD62p表达的影响,并了解体积分数0.02 DMSO+TS对浓缩血小板的长期(6个月)保存效果.②方法分别应用体积分数0.02 DMSO、体积分数0.06 DMSO、体积分数0.02 DMSO+TS作为冻存液-196 ℃冷冻保存浓缩血小板,并在冻存后1、3及6个月时分别取出复温,流式细胞仪检查血小板膜CD42b、CD62p表达水平.③结果冻存后1、3及6个月,体积分数0.02 DMSO+TS组与体积分数0.06 DMSO组血小板CD42b的表达水平差异无显著性(F=3.13～5.01,q=1.12～1.76,P＞0.05),两者均高于体积分数0.02 DMSO组(q=3.17～4.06,P＜0.05);但与新鲜组相比,3组冷冻保存血小板CD42b表达水平均有所下降(q=3.09～4.15,P＜0.05).体积分数0.02 DMSO+TS组CD62p的表达水平低于体积分数0.06 DMSO组和体积分数0.02 DMSO组,差异有显著性(F=5.75～9.77,q=3.20～4.34,P＜0.05),后两组差异无统计学意义(q=1.55～2.02,P＞0.05);与新鲜组相比,3组均明显升高,差异有显著性(q=4.85～7.35,P＜0.01).④结论第二信使效应剂的应用降低了DMSO的使用浓度,在抑制血小板的体外激活方面,体积分数0.02 DMSO+TS的效果优于体积分数0.06 DMSO,且长期(6个月)保存效果稳定.

低温冻除子宫内膜治疗子宫异常出血的动物实验和初步临床应用

①目的探讨低温冻除子宫内膜的适宜参数和临床应用的安全范围。②方法２５只家兔随机分为３组，分别进行活体肌肉冻结实验、肌肉破坏实验和冻后免疫指标检测实验。另选择５例子宫肌瘤合并出血病人，于冷冻后７ｄ手术切除子宫，行组织病理学检查。③结果－４０～－８０℃的温度即足以破坏适宜深度的动物肌肉层，并可调整机体的免疫机能；使连体子宫内膜深达浅肌层凝固坏死。④结论－４０～－８０℃为临床进行冻除子宫内膜的适宜温度。

深低温保存人体同种主动脉的组织学评价

1目的 评价深低温保存人体同种主动脉的效果。 2方法 取 5段新鲜和 8段低温保存复温后的人体主动脉标本 (保存时间平均 5 31d)在光、电镜下进行观察。 3结果 深低温保存的人主动脉弹性膜及纤维结构保存良好 ,细胞超微结构的改变与保存时间无明显关系。 4结论 深低温保存的人主动脉组织学检查无明显变化 ,保存效果良好。

低温保存动脉应力松弛实验研究

探讨低温保存对动脉管壁黏弹性的影响。使用美国TA公司的动态热机械分析仪(DMTAMarKIV)测定了低温保存家兔颈总动脉和新鲜对照组的松弛曲线,得到了低温保存动脉和新鲜对照组的归一化应力松弛函数。结果表明,控制应变水平为50%,低温保存动脉应力衰减明显快于新鲜对照组。经过约5min衰减后,新鲜对照组动脉尚可保持初始应力的40%到70%,而低温保存动脉只能保持初始应力的0～20%。

二甲亚砜与第二信使效应剂对深低温保存血小板超微结构的影响

①目的 观察体积分数0.02二甲亚砜(DMSO)联合第二信使效应剂(ThromboSol)对深低温保存浓缩血小板超微结构的影响。②方法 分别应用3种不同的保存液(体积分数0.02 DMSO、体积分数0.06 DMSO、体积分数0.02 DMSO+ThromboSol)-196 ℃冷冻保存浓缩血小板,并在冻存后1、6个月时分别取出复温,采用扫描和透射电镜观察血小板超微结构变化。③结果 体积分数0.02 DMSO+ThromboSol组血小板能保持完整结构,部分血小板出现激活迹象,冷冻保存1个月和6个月的血小板超微结构无明显差异。④结论 体积分数0.02DMSO+ThromboSol能够有效地保护血小板超微结构,其6个月内的保存效果稳定。

青岛地区有家族史非综合征性唇腭裂与TGF-α基因多态性相关性

目的了解青岛地区有家族史的非综合征性唇腭裂与转化生长因子α(TGF-α)基因多态性的相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性核苷酸分型结合TaqⅠ限制性内切酶酶切技术,对青岛地区53例有家族史的非综合征性唇腭裂病人、106例正常人(对照组)的TGF-α等位基因进行分析。结果有家族史的非综合征性唇腭裂病人的C2等位基因频率较对照组明显增高,差异有显著性(χ2=22.603,P<0.01);不同类型唇腭裂间比较C2等位基因频率差异无显著性(P>0.05);病人母亲孕期有、无感染史组间C2等位基因频率差异无显著性(P>0.05)。结论青岛地区有家族史的非综合征性唇腭裂TGF-α基因中存在TaqⅠ多态位点,其发生与TGF-α基因多态性有密切关系。

某高校2409名男大学新生男科查体结果分析

目的了解新入校男大学生性器官发育和病变情况,为高校学生性健康教育及生殖健康教育提供参考。方法对某高校2005级2409名新入校男生进行男科查体。结果2409名男生检出包皮过长1421名,检出率为58.99%;包茎324名,检出率为13.45%;精索静脉曲张228名,检出率为9.46%。其中农村学生包皮过长、包茎、精索静脉曲张检出率依次为65.69%,17.06%和10.77%,城市学生检出率依次为48.03%,7.55%和7.33%。结论男大学新生外生殖器的卫生状况令人担忧,包皮疾患较多。应加强青少年生殖健康知识教育,同时有必要对青少年外生殖器疾患进行定期普查。

不同温度下体外大鼠睾丸支持细胞胶质细胞源性神经生长因子的表达

目的:通过观察不同温度下体外大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC)胶质细胞源性神经生长因子(GDNF)表达特点,探讨高温致不育的机制。方法:采用组合酶消化法和选择性贴壁法分离雄性Wistar大鼠睾丸SC,将分离的SC分别置于不同温度进行体外培养,观察其贴壁、形态学变化,FasL免疫组化鉴定。实验分为对照组(35℃)、实验组(36℃、37℃、38℃、39℃)。CCK-8法检测SC增殖情况,HE染色观察细胞形态及结构,RTPCR、免疫荧光及Western印迹检测细胞GDNF的表达。结果:本实验条件下,体外分离培养SC纯度=(95.30±2.15)%(n=10),CCK-8实验结果显示,36℃时细胞增殖率最高(P<0.01),>36℃时,随着温度的提高,增殖率逐渐降低,39℃对细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.01);免疫荧光结果显示,GDNF表达于SC胞质,36℃时荧光最强,RT-PCR及Western印迹检测结果显示,高于36℃时,GDNF mRNA及蛋白的表达随着温度的增加而降低,36℃、37℃、38℃、39℃4组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:不同温度下,体外培养SC的增殖能力和GDNF表达明显不同。>36℃时,随着温度的提高,增殖能力受到抑制,GDNF表达水平显著降低。本研究结果证实,高温下大鼠睾丸SC正常功能受到抑制,从而影响生精功能。

低氧对原代支持细胞增殖能力和occludin蛋白表达的影响

目的:观察低氧对原代大鼠睾丸支持细胞生长活性、occludin蛋白表达的影响。方法:18～22日龄Wistar大鼠,通过两步酶消化法,建立原代支持细胞培养体系,经油红O、免疫荧光法鉴定。传代后随机分为以下氧浓度组进行培养:20%、15%、10%、5%和1%。分别培养至6、12、24、48、72 h,CCK-8测定细胞增殖活性,West-ern印迹测定occludin蛋白表达量,并进行差异性分析。结果:油红O染色见胞质内脂滴染成红色,免疫荧光见FasL蛋白表达阳性,细胞纯度>95%。与20%氧浓度相比,细胞在15%和10%氧浓度下增殖率逐渐降低,5%和1%氧浓度下,细胞增殖率明显下降(P<0.01);从12 h开始,随着氧浓度降低和时间延长,occludin表达量明显下降(P<0.01)。结论:低氧会抑制支持细胞生长,并减少occludin蛋白表达。推测低氧环境损伤支持细胞参与的血睾屏障完整性,影响睾丸的生精过程。