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12例海外华人SARS-CoV-2感染者病毒基因组测序及变异分析
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作者 曾永 陈建威 +6 位作者 崔恩海 胡国海 王晓光 季巧英 丛迎 杨阳 杨伟斌 《激光生物学报》 2021年第4期305-315,共11页
为了进一步准确筛查、鉴定新型冠状病毒SARS-CoV-2,寻找可能与传播能力和症状强弱相关的变异位点,对12例意大利和西班牙国外输入浙江省的病例和7例国内病例引起的新冠肺炎临床标本进行了高通量宏转录组(metatranscriptomic)测序和基于... 为了进一步准确筛查、鉴定新型冠状病毒SARS-CoV-2,寻找可能与传播能力和症状强弱相关的变异位点,对12例意大利和西班牙国外输入浙江省的病例和7例国内病例引起的新冠肺炎临床标本进行了高通量宏转录组(metatranscriptomic)测序和基于杂交捕获的病毒基因组测序。结果表明,与宏转录组测序相比,捕获测序样本具有一致的准确突变检测结果,且所需数据量仅为宏转录组测序的1/10或更少,是一种更适合于低病毒载量样本的检测方法。SARS-CoV-2参考基因组(EPI_ISL_402119)突变分析表明,国内样本大部分都是ORF8:L84S突变株,国外样本主要是S:D614G突变株,其余样本在病毒基因ORF1a发现2种突变型,分别是ORF1a:C409S和ORF1a:P1207H。变异分析表明,在中国及意大利的新型冠状病毒肺炎患者中检测到的SARS-CoV-2病毒基因组均存在不一样的变异类群。同时,样本间检测具有差异的单核苷酸变异(SNVs),表明了SARS-CoV-2病毒变异的多态性。对同一宿主体内的全部病毒测序数据进行宿主内单核苷酸变异(iSNVs)分析表明,F06和F11体内病毒基因区的单核苷酸变异与来自同一家意大利餐厅的其他5个病例样本的SNVs突变结果意外一致,表明同一患者中可能存在重复感染。 展开更多
关键词 SARS-CoV-2 基因组 变异 捕获测序
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舟山近海环境DNA保存方法的建立及优化 被引量:8
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作者 陈治 陈建威 +2 位作者 王晓艳 高天翔 刘岩 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1098-1107,共10页
近年来,环境DNA(environmental DNA,eDNA)技术开始被广泛应用于水生生物多样性研究。本文通过绝对定量和高通量测序技术对舟山近海高浊度水样eDNA的保存方法进行了建立和优化。研究结果如下:(1)“酒精+低温”保存法的eDNA获得量是“酒精... 近年来,环境DNA(environmental DNA,eDNA)技术开始被广泛应用于水生生物多样性研究。本文通过绝对定量和高通量测序技术对舟山近海高浊度水样eDNA的保存方法进行了建立和优化。研究结果如下:(1)“酒精+低温”保存法的eDNA获得量是“酒精+常温”保存法的0.78 1.06(7d)、0.89 1.80(15d)、1.05 2.75(30d)和2.69(60d)倍;(2)酒精保存法(低温、常温)存在eDNA富集物渗漏及滤膜黏附现象;(3)短期内冷冻保存样品的eDNA获得量是酒精保存样品获得量的1.25 1.59倍(7d)和1.07 1.20倍(15d);(4)酒精保存法的eDNA降解速率慢于冷冻保存法,长期内酒精保存样品的eDNA获得量是冷冻保存样品获得量的1.99 2.10倍(30d)和2.84 7.64倍(60d);(5)二次富集(过滤)能显著提高eDNA获得量,富集组eDNA浓度是未富集组浓度的1.60 4.95倍(“酒精+低温”)和1.21 2.04倍(“酒精+常温”);(6)“酒精+低温”保存的样品在高通量测序总丰度、各鱼种分丰度、物种多样性指数等多个方面优于冷冻保存样品;(7)微生物(micro-organism)的eDNA降解速率慢于大生物(macro-organism),不同界(Kingdom)的eDNA最优保存方法可能并不相同。本研究首次建立了舟山近海高浊度水样eDNA最适保存方法,为相似水域的eDNA保存提供了借鉴参考。 展开更多
关键词 舟山近海 eDNA保存 “酒精+低温” 二次过滤
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基于高通量测序技术的海洋鱼类定性和定量分析 被引量:2
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作者 张浩博 陈建威 +2 位作者 徐大有 高天翔 王晓艳 《浙江海洋大学学报(自然科学版)》 CAS 2022年第1期45-55,共11页
近年来,高通量测序技术以其对生物物种鉴别具有高效、简便、客观等特点,在水生生物多样性评估等相关领域中得到广泛应用。虽然大量证据表明高通量测序与传统水生生物调查结果在生物多样性和相对数量上均具有相关性,但采用高通量测序技... 近年来,高通量测序技术以其对生物物种鉴别具有高效、简便、客观等特点,在水生生物多样性评估等相关领域中得到广泛应用。虽然大量证据表明高通量测序与传统水生生物调查结果在生物多样性和相对数量上均具有相关性,但采用高通量测序技术进行生物量评估的准确性尚不明确。本研究以5种常见海水鱼类——大黄鱼、花鲈、黑鲷、褐菖鲉和眼斑拟石首鱼为研究对象,将5种鱼类的肌肉组织和DNA分别按不同比例混合,液氮速冻后干冰寄送至青岛华大基因研究院,以12S MiFish-U-F/R为通用引物,进行高通量测序和检测分析,初步探讨高通量测序技术的定量分析可行性。研究结果显示5种海水鱼类均被检出,且未检出其它鱼种;从相关系数和拟合趋势来看,鱼类的丰度变化与其DNA或肌肉比例的变化一致。结果表明高通量测序技术适用于海水鱼类生物量评估研究。 展开更多
关键词 高通量测序 海水鱼类 高通量条形码 物种鉴定
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微小杆菌属(Exiguobacterium)细菌的能量代谢途径分析 被引量:2
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作者 赵芮 李登辉 +3 位作者 李学恭 张维佳 赵苑 吴龙飞 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2078-2093,共16页
【目的】微小杆菌属(Exiguobacterium)细菌广泛分布于海洋及非海洋环境中,具有多种代谢途径以适应复杂多样的生境。本研究从能量代谢途径角度出发,探究该属菌株对不同生境的适应能力。【方法】从美国国家生物科技数据中心(National Cent... 【目的】微小杆菌属(Exiguobacterium)细菌广泛分布于海洋及非海洋环境中,具有多种代谢途径以适应复杂多样的生境。本研究从能量代谢途径角度出发,探究该属菌株对不同生境的适应能力。【方法】从美国国家生物科技数据中心(National Center for Biotechnology Information, NCBI)数据库中获取146个Exiguobacterium属菌株的基因组,查找并统计光营养、厌氧呼吸和底物代谢等多种能量代谢途径的关键蛋白或关键酶基因在各菌株基因组中的分布,包括光营养型的视紫红质基因、厌氧呼吸营养型的钼辅因子合成蛋白基因,以及底物代谢营养型中乙醛酸分流途径的异柠檬酸裂解酶及苹果酸合酶基因等。根据对应的氨基酸序列构建视紫红质、MoaC和异柠檬酸裂解酶的系统发育树,分析不同能量代谢途径在该属菌株进化过程中的保守性,推测其对于该属菌株的重要性。【结果】Exiguobacterium属中50%的种具有视紫红质基因,其中分离自非海洋生境的菌株更趋向于含有视紫红质基因。本研究所统计的全部非海洋生境菌株中,含有视紫红质基因的菌株占比约为70%,而在海洋生境菌株中该比例仅为19%。Exiguobacterium属约27%的种存在钼辅因子合成蛋白基因,分离自海洋环境的菌株有该类蛋白的可能性更高(32%:21%),具有完整钼辅因子合成途径的菌株集中于进化树同一分支上的少数种。该属约61%的种存在乙醛酸分流途径相关酶基因,这些种隶属进化树的同一分支,且种内所有菌株都具备相关基因,表明乙醛酸分流途径在Exiguobacterium属的分布具有种特异性。【结论】Exiguobacterium属细菌具有多种能量代谢途径相关基因,包括基于视紫红质的光营养型能量代谢途径、基于钼酶的厌氧呼吸型能量代谢途径和底物代谢营养型能量代谢途径中的乙醛酸分流途径。能量代谢途径多样性可能是Exiguobacterium属细菌适应复杂多样生境的机制之一。此外,本研究发现Exiguobacterium属中不同种、同种不同菌株间存在能量代谢途径差异,且能量代谢途径在该属内的分布多不具备种特异性,表明仅通过16S rRNA基因种属鉴定来预测目标菌株的代谢类型可能有较大偏差和局限性。 展开更多
关键词 微小杆菌属 能量代谢 视紫红质 钼酶 钼辅因子 乙醛酸分流
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