腺病毒携带IL-12治疗肝癌细胞株HepG2的体外实验

目的:探讨腺病毒介导的白介素12(interleukin-12,IL-12)基因(AdvIL-12)转染能否在体外诱导出更强的抗(hepatocellular carcinoma,HCC)免疫效应.方法:在体外,用AdvIL-12转染HepG2作为实验组,以Adv-绿色荧光蛋自(green fluorescent protein,GFP)转染的HepG2和未转染的HepG2作为对照组进行培养.用划痕试验检测载有IL-12的腺病毒对HepG2细胞的迁移能力的影响;结晶紫法检测对HepG2的生长能力的抑制和杀伤作用;MTT检测对HepG2细胞增殖能力的抑制作用的影响;TUNEL法检测对HepG2细胞的凋亡效应的影响.结果:正常生长的HepG2单层贴壁生长,生长旺盛,镜下观察为梭形,胞浆均质透明,折光性好,胞间紧密连接,核质均匀,核仁清晰可见.实验组AdvIL-12作用24 h后HepG2细胞迁移距离明显受到抑制,且随浓度增大,HepG2细胞向划痕区移动的距离越来越小,细胞数量越少,划痕越宽.实验组AdvIL-12结晶紫染色深度随浓度梯度减少而逐渐加深.取10 L AdvIL-12时对HepG2细胞杀伤效果最为明显.酶标仪检测AdvIL-12组、Adv-GFP组和HepG2空白对照组分别培养24、48、72 h后的A值(F1=95.7,F2=103.6,F3=165.8,P<0.01)与对照组相比有统计学意义.光镜下可见凋亡细胞明显固缩,体积变小,胞质致密,核浓缩甚至消失,形成凋亡小体.实验组AdvIL-12组凋亡细胞数量明显多于对照组Adv-GFP组.结论:转染AdvIL-12的HepG2细胞能有效抑制HepG2细胞的生长,增殖和迁移能力,效果随浓度增大而增强,并能够促进HepG2细胞的凋亡效应,从而在体外达到明显的肿瘤抑制作用.

IL-6、LPS激活巨噬细胞所得上清液对神经母细胞瘤细胞株Neuro2a增殖、凋亡及突起生长和Sez6基因表达的影响

目的探讨IL-6、细菌脂多糖(LPS)激活巨噬细胞所得上清液(CM)对神经母细胞瘤细胞株Neuro2a细胞增殖、凋亡及细胞突起生长与Sez 6基因表达的影响。方法以IL-6和CM分别作用于Neuro2a细胞,采用MTT法、流式细胞术分别检测细胞的增殖、凋亡能力;培养24 h后观察统计细胞突起生长变化,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测Sez 6基因的表达。结果与对照组比较,IL-6、CM刺激对Neuro2a细胞增殖、凋亡未见明显影响,但可增加细胞突起总长度、最长突起长度、突起数目,并且可促进Sez 6基因的表达(F=6.00~22.52,P<0.05)。结论IL-6、CM对Neuro2a细胞增殖、凋亡作用不明显,但可能通过上调Sez 6基因的表达促进细胞突起的生长。

慢病毒介导胰岛素生长因子1促进人骨髓间充质干细胞的成骨分化

背景：目前慢病毒介导胰岛素生长因子1基因作用于人骨髓间充质干细胞的研究还处在初级阶段。目的：构建携带胰岛素生长因子1基因的慢病毒载体，观察其在人骨髓间充质干细胞中的表达以及其对成骨分化的影响。方法：应用重组慢病毒技术将胰岛素生长因子1基因和绿色荧光蛋白转染至体外培养第3代人骨髓间充质干细胞（实验组），以空白的慢病毒转染的人骨髓间充质干细胞和未做处理的人骨髓间充质干细胞分别作为对照组和空白组进行对比。结果与结论：慢病毒转染3d后，对照组和实验组的转染效率分别可达95％和90％以上。Westernblot检测结果和激光共聚焦显微镜下观察显示，胰岛素生长因子1在人骨髓间充质干细胞中成功表达。说明胰岛素生长因子1基因转染对人骨髓间充质干细胞成骨能力具有促进作用。

改善电力变压器端部电场的试验研究

通过对电力变压器端部绝缘结构中“油隙”区放电特性的分析提出了改善油隙区电场分布的方法，降低静电环绝缘层的介电常数，模拟试验表明。

卡介苗对大鼠膀胱肿瘤细胞及正常移行上皮细胞的早期影响

目的通过卡介苗（BCG）单独刺激膀胱肿瘤细胞和正常膀胱移行上皮细胞及代谢产物作用上述细胞，探讨BCG治疗膀胱肿瘤的机制。方法建立大鼠膀胱肿瘤模型，将大鼠膀胱肿瘤细胞和正常移行上皮细胞原代培养。设普通培养液培养肿瘤细胞（A组），含BCG的培养液培养肿瘤细胞（B组），普通培养液培养正常移行细胞后的上清液培养肿瘤细胞（C组），含BCG培养液培养正常移行细胞后的上清液培养肿瘤细胞（D组）和含BCG培养液培养肿瘤细胞后的上清液培养肿瘤细胞（E组）。酶联免疫吸附剂测定（ELISA）法检测各组细胞上清液中干扰素-y（IFN-1）、肿瘤坏死因子-A（TNF-a）、白细胞介素-10（IL-10）的浓度。流式细胞术（FCM）和末端脱氧核苷酸转移酶介导缺口末端标记法（TUNEL）检测凋亡。结果ELISA检测各组细胞上清液中IFN一叮的浓度无显著改变，波动于（6．5—8．5）ng／L。IL-10在B组[（17．165±3．434）ng／L]，E组[（20．420±2．678）ng／L]水平明显高于其他3组；TNF一0[在B组[（159．887±5．854）ng／L]，D组[（126．227±4．812）ng／L]的浓度较其他3组差异有统计学意义（P〈0．05）。各组细胞均未检测到凋亡的发生。结论BCG作用于肿瘤细胞有抑制生长的作用，但不引发凋亡，肿瘤细胞自身能通过分泌IL-10、TNF—OL参与调节，逃避免疫细胞对其的打击。

内皮细胞微粒和血小板微粒在抗中性粒细胞胞质抗体相关性小血管炎患者中的表达

本研究共纳入35例抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)相关性血管炎(ANCA⁃associated vasculitis,AAV)患者,其中6例合并栓塞,同时纳入膜性肾病、慢性肾炎及健康对照组各25例,应用流式细胞术检测血浆内皮细胞微粒(endothelial microparticle,EMP)和血小板微粒(platelet microparticle,PMP)水平。结果发现AAV栓塞组EMP、PMP水平显著高于未栓塞组(均P<0.01),活动期AAV组EMP、PMP水平显著高于缓解期组、膜性肾病组、慢性肾炎组及健康对照组(均P<0.05),且缓解期AAV组EMP、PMP水平亦高于慢性肾炎组及健康对照组(均P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,EMP和PMP与伯明翰血管炎活动性评分、红细胞沉降率、C反应蛋白、D⁃二聚体均呈正相关(均P<0.05)。研究结果提示,EMP、PMP反映了免疫炎症介导的血管内皮损伤和血小板活化程度,可能与AAV疾病炎性反应和血栓形成有关。

MiRNA-221/222对肝癌的影响研究进展

MicroRNAs(mi RNAs)在人类肿瘤致瘤生长机制的作用在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中已经通过基因增殖和功能性研究所证实。肝癌中异常表达的miRNAs与其他类型的肿瘤有密切关系,其中较为独特的是上调的miR-221/222。MiR-221/222是高度同源基因,在HCC中明显上调,被认为是致瘤基因。本文对miR-221/222的分子及生物机制进行综述,并对其作为新的HCC诊断及治疗工具的可能性做出探讨。

腺病毒携带IL-12增强抗原致敏树突细胞在肝癌基因治疗中的研究

目的:近年来通过应用白介素-12治疗肿瘤取得良好效果,因此对国内外应用腺病毒携带IL-12增强抗原致敏树突细胞在肝癌基因治疗中的研究进展进行总结,以探索更为可行治疗方法。方法:运用Pubmed、Elsevier Sciencedirect、CNKI及万方全文数据库检索系统,以腺病毒,IL-12,肝癌,树突细胞为关键词,检索2008-01至2012-11月发表的文献。纳入标准:1)IL-12的生物学特性,在抗肿瘤过程中的免疫作用,2)应用腺病毒携带IL-12对抗肝癌治疗研究,3)肿瘤抗原致敏树突细胞对肿瘤的影响。根据纳入标准分析文献26篇。结果:通过腺病毒携带IL-12可以增强肿瘤抗原致敏树突细胞的免疫应答。并通过诱导肿瘤细胞的凋亡,减少新生血管的生成而对肿瘤产生直接抑制,有效抑制肝癌的生长和转移。结论:本文通过对IL-12的生物学特征、抗肿瘤通路、作用机制及在腺病毒介导下肿瘤抗原致敏树突细胞研究进展的概述,为腺病毒携带IL-12作为肝癌的基因治疗进一步提供理论依据和探索,期待在将来应用IL-12为基础的基因治疗一定会为包括肝癌在内的肿瘤治疗提供新的途径。