蝎子毒素多肽WaTx的高效化学合成及氧化折叠研究

相比于1-羟基-7-氮杂苯并三氮唑(HOAt)、1-羟基苯并三唑(HOBt)等传统偶联试剂,新型多肽偶联试剂2-肟氰乙酸乙酯(Oxyma)具有安全、偶联效率高、消旋率低等优势,在多肽合成特别是微波固相合成中得到广泛应用.但是,不同反应温度(例如28、50和75℃)对N,N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)/Oxyma的偶联效率以及对甲硫氨酸(Met)等易氧化氨基酸的影响尚有待研究.瞬时受体电位锚蛋白1(TRPA1)通道在感受温度、听觉和炎症痛中发挥重要作用.蝎子毒素多肽芥末受体毒素(WaTx)是一种新型、非共价结合的TRPA1特异性激动剂.本研究利用6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)/N,N’-二异丙基乙胺(DIEA)和DIC/Oxyma缩合体系,首次探索了不同温度下线性WaTx的合成效率以及Met残基的氧化情况.通过一次氧化折叠和两次氧化折叠策略,实现了WaTx的体外快速复性折叠,利用圆二色谱和钙荧光检测等技术评价WaTx的结构和活性.本研究建立了WaTx的温和、高效合成以及复性折叠方法,为固相多肽合成特别是手动固相合成WaTx等含有易氧化基团的二硫键构象锁定多肽提供了重要参考.

基于DIC/Oxyma的蜘蛛毒素多肽GsMTx4的高效合成及活性评价

偶联试剂介导酰胺键形成,在固相多肽合成中发挥关键作用.新型DIC(N,N-二异丙基碳二亚胺)/Oxyma(2-肟氰乙酸乙酯)缩合体系具有廉价、操作安全、缩合效率高和抑制消旋等优势,在手动和自动多肽合成中得到广泛应用.但是,DIC/Oxyma缩合体系的理想反应比例和温和反应温度尚有待探索.Piezo通道是一种多功能的机械敏感阳离子通道,与多种遗传性疾病相关,蜘蛛毒素多肽GsMTx4是目前唯一的特异性靶向Piezo通道的抑制剂.本研究探索了DIC/Oxyma缩合体系在温和条件下的最佳反应比例,实现了线性Gs MTx4的高效手动固相合成.通过一次氧化折叠策略构建三对二硫键,得到活性的GsMTx4.利用圆二色谱和膜片钳技术等评价GsMTx4的结构和活性.本工作建立了基于DIC/Oxyma缩合体系的快速、稳健和安全的合成方法,为固相多肽合成特别是手动固相多肽合成提供了重要方法参考.