一个X连锁少汗性外胚层发育不良家系EDA基因突变分析

目的检测一个X连锁少汗性外胚层发育不良(XLHED)家系EDA基因突变,为XLHED的基因诊断提供依据。方法应用DNA二代测序技术(NGS),对收集的XLHED病人家系4位家庭成员(病人及其两个姐姐、母亲)进行EDA基因检测,PCR结合Sanger测序技术验证突变位点。同时收集50例健康查体者进行Sanger测序作为对照。结果二代测序结果显示,XLHED病人EDA基因发生致病错义突变c.466C>T(p.Arg156Cys)(TY),病人母亲和一个姐姐c.466位点为杂合突变(CT),另一姐姐该位点基因型为野生型(CC),三者表型均正常。Sanger测序结果显示,病人及家属基因型与二代测序结果一致,50例对照者基因型均为野生型(CC)。结论 EDA基因c.466C>T突变会造成氨基酸序列改变,影响外胚层发育从而导致XLHED的发病。

GeXP多重分析技术检测肝癌组织长链非编码RNA表达的实验研究

目的运用多重基因表达遗传分析系统(genomelab gene expression profiler,Ge XP),创建一种能同时检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织长链非编码RNA(long non-coding RNA,Lnc RNA)表达的一种多重逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR)检测方法,为HCC的诊断及预后提供一定的方法学基础。方法检索并筛选Pubmed数据库中近10年发表的与HCC有关报道的8种Lnc RNAs,并分别设计特异性引物。首先验证引物及多重反应体系的特异性及灵敏性,经过系统优化后建立一种多重RT-PCR检测方法。另检测23对HCC肿瘤组织和癌旁非肿瘤组织标本,并用实时定量PCR技术(quantitative real-time PCR,q PCR)来验证检测体系并进行结果统计。结果优化后的Ge XP多重检测体系,特异性及灵敏性良好。另在23对HCC肿瘤组织及癌旁组织中检测到了这8种Lnc RNAs的差异表达:与癌旁组织相比,HCC组织中Lnc RNA NEAT1、H19、MALAT1、HOTAIR、DANCR、UCA1、BCAR4的表达显著下降(P均<0.05);肝癌组织中Lnc RNA GAS5的表达显著上升(P<0.05)。q PCR方法验证与Ge XP方法结果一致。结论应用Ge XP多重分析技术成功建立了一种于单管中同时检测HCC组织8种Lnc RNAs表达的检测方法,该方法有效、快捷、灵敏、特异,对HCC的诊断及预后具有启示作用并奠定了一定的方法学基础。