肝移植术后感染病原菌分布及耐药性分析

目的 分析肝移植术后感染病原菌分布及耐药性,为临床合理应用抗菌药物提供科学依据。方法 对2014年3月—2021年12月青岛大学附属医院904例肝移植术后感染患者送检的各类标本分离出的病原菌分布及耐药性进行分析。采用WHONET 5.6软件对菌株列表及细菌耐药率进行统计;采用Excel对标本来源、构成比及病原菌分布情况等进行统计分析。结果 共分离出非重复性病原菌2 208株,主要分离自呼吸道(31.25%)、胆汁(22.28%)、腹水(13.18%)、血液(8.38%)和引流液(4.62%),前10位病原菌为肺炎克雷伯菌肺炎亚种(10.69%)、屎肠球菌(10.42%)、大肠埃希菌(8.24%)、铜绿假单胞菌(8.24%)、表皮葡萄球菌(8.06%)、鲍曼不动杆菌(7.93%)、嗜麦芽窄食单胞菌(6.61%)、阴沟肠杆菌(3.22%)、溶血葡萄球菌(3.08%)和金黄色葡萄球菌(2.94%),共占比69.43%。呼吸道标本的主要致病菌为铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、肺炎克雷伯菌肺炎亚种和鲍曼不动杆菌,胆汁、腹水和引流液标本的主要致病菌为屎肠球菌,血液标本的主要致病菌为大肠埃希菌、表皮葡萄球菌和肺炎克雷伯菌肺炎亚种。药敏数据显示:肠杆菌目细菌对头孢菌素类和氟喹诺酮类均有较高的耐药率,对氨基糖苷类中阿米卡星的耐药率<10%,未检出对替加环素耐药菌株,其中肺炎克雷伯菌肺炎亚种对美罗培南、亚胺培南的耐药率分别为14.71%、11.35%,均高于大肠埃希菌(5.66%、6.29%);非发酵菌对碳青霉烯类药物均有较高的耐药率,但对替加环素和黏菌素耐药率均<10%。革兰阳性球菌中,屎肠球菌对万古霉素和奎奴普丁/达福普汀的耐药率分别为6.17%和2.44%,未发现对替加环素和利奈唑胺耐药的屎肠球菌;表皮葡萄球菌对大环内酯类、氟喹诺酮类、磺胺类和林可霉素类抗菌药物的耐药率均>50%,少部分菌株对利奈唑胺和奎奴普丁/达福普汀耐药(<3%),未检出对替加环素和万古霉素耐药的表皮葡萄球菌。重点监测耐药菌287株,占比13%,分别为耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌128株、耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌88株、耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌肺炎亚种26株、耐碳青霉烯类大肠埃希菌11株、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌23株和耐万古霉素肠球菌11株,其中,耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌肺炎亚种主要产丝氨酸碳青霉烯酶,耐碳青霉烯类大肠埃希菌主要产金属β-内酰胺酶。结论 肝移植术后感染的病原菌以革兰阴性菌为主,不同标本类型病原菌的种类分布不同,部分菌株耐药率呈增长趋势,需要加强医院感染和抗菌药物的管理。

同时携带blaNDM-1和blaKPC-2基因肺炎克雷伯菌的研究

目的探讨某医院儿科分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类耐药的机制和菌株的同源性。方法2021年6月~2021年12月在某医院儿科住院患儿中分离出8株对碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌。细菌的鉴定和药敏采用VITEK 2系统。基于Illumina和Nanopore测序平台获得菌株的基因组和质粒序列,然后用软件分析菌株的生物学信息。Xba I酶切脉冲场凝胶电泳(PFGE)、S1核酸酶切脉冲场凝胶电泳(S1-PFGE)和质粒的液相接合试验分别检测菌株的同源性和携带的质粒。结果这8株肺炎克雷伯菌都携带blaNDM-1和blaKPC-2及其他的耐药基因,与呈现的多重耐药表型相符合。依据Tenover规则,这8株菌的PFGE属于相同的克隆群,且多位点序列都属于ST11型。S1-PFGE和测序结果都显示QD1株携带三个质粒,分别命名为P1(携带blaNDM-1)、P2和P3(携带blaKPC-2)。另外,液相接合显示QD1株携带的P1质粒(携带blaNDM-1)可水平传递到大肠埃希菌J53Azi^(R)。结论研究表明这些菌株对碳青霉烯类的耐药是因为携带了blaNDM-1和blaKPC-2基因。经检索,同时携带blaNDM-1和blaKPC-2基因的ST11型肺炎克雷伯菌在儿科患者中的暴发流行为国内外首次报道。

厦门希瓦氏菌临床株对碳青霉烯类耐药的分子机制

目的 探讨希瓦氏菌临床株HDC555对碳青霉烯类耐药的分子机制。方法 希瓦氏菌临床株的鉴定和药敏使用VITEK 2Compact自动仪;碳青霉烯酶的筛选通过免疫金标法;S1核酸酶切脉冲场凝胶电泳(S1-PFGE)检测菌株携带的质粒。基于二代Illumina和三代Nanopore技术获取菌株的全基因组序列,并用一系列软件分析菌株的生物学信息。结果 免疫金标法显示希瓦氏菌HDC555产OXA-48样和NDM酶。高通量测序数据经分析(ANI)表明希瓦氏菌HDC555株是厦门希瓦氏菌,且该株菌携带位于染色体上的blaOXA-199基因和位于质粒上的blaNDM-1基因。结论 厦门希瓦氏菌临床株HDC555对碳青酶烯类耐药的分子机制是因为该菌携带了blaOXA-199和blaNDM-1碳青霉烯酶基因。

cfr基因介导的耐利奈唑胺头状葡萄球菌及其同源性研究

目的 调查利奈唑胺耐药头状葡萄球菌临床株携带的cfr基因及其同源性。方法 收集2018年6月-2019年10月分离自ICU患者血液标本的9株利奈唑胺耐药头状葡萄球菌。菌株的鉴定和药敏使用VITEK 2Compact仪器;cfr和optrA基因通过PCR扩增和测序确认;基于高通量测序平台获得头状葡萄球菌QD40株的染色质和携带的质粒序列,并用软件分析菌株的生物学信息;脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测菌株之间的同源性。结果 9株头状葡萄球菌呈现多重耐药表型,且都携带cfr基因,但未检测到optrA基因。高通量测序显示头状葡萄球菌QD40株携带三个质粒(分别命名为pQD40-1,pQD40-2和pQD40-3)。其中,质粒pQD40-3大小为39 504bp,携带cfr基因。PFGE显示这9株菌的电泳条带图谱完全一致。结论 头状葡萄球菌临床株对利奈唑胺耐药的分子机制是与其携带cfr基因有关。另外,ICU病房中存在cfr基因介导的耐利奈唑胺头状葡萄球菌感染的暴发流行,应引起临床重视。

胶东某医院西弗射盾子囊霉近10年检出与药敏分析

目的总结青岛大学附属医院近10年西弗射盾子囊霉的检出情况,明确西弗射盾子囊霉的分离培养、鉴定及药敏特征,为临床诊断及治疗提供用药依据。方法收集整理青岛大学附属医院近10年检出西弗射盾子囊霉的临床病例资料。采用常规方法接种、培养送检标本,观察分离菌的革兰染色及菌落生长特点。用VITEK 2 Compact细菌鉴定药敏仪及酵母鉴定卡和VITEK MS质谱对分离出的可疑病原真菌进行鉴定;用ATB Fungus 3进行酵母菌药敏试验。结果青岛大学附属医院2011—2021年间自临床标本中共检出8株西弗射盾子囊霉,该菌革兰染色阳性,在科玛嘉显色培养基上呈圆形、中心蓝色、边缘白色的菌落。VITEK 2 Compact和VITEK MS质谱鉴定系统均鉴定为西弗射盾子囊霉。药敏结果显示,伏立康唑敏感率100%,两性霉素B敏感率86%,氟康唑敏感率38%,5-氟胞嘧啶敏感率43%,伊曲康唑敏感率12%。结论西弗射盾子囊霉近年检出增加,其革兰染色具有念珠菌特征,在一般培养基上均可生长,在科玛嘉显色培养基上菌落生长最具特征。检出菌株对伏立康唑敏感率最高,其次是两性霉素B,对伊曲康唑敏感率最低。

H2O2诱导H9c2细胞凋亡中circNFIX表达及作用

目的探讨环状RNA NFIX(circNFIX)在H9c2细胞凋亡中的表达趋势和功能。方法将H9c2细胞应用200μmol/L的H2O2孵育0、1、3、6、12 h,应用荧光定量PCR方法检测H2O2诱导的H9c2细胞凋亡中circNFIX的表达趋势。将H9c2细胞分为空白对照组(未转染)、siRNA阴性对照组(转染siRNA阴性对照组)和siRNA组(转染siRNA),应用荧光定量PCR方法检测siRNA对circNFIX抑制效果。将H9c2细胞分为对照组(未转染)、H2O2组(应用200μmol/L H2O2孵育12 h)、H2O2+NC组(先转染siRNA阴性对照,余处理同H2O2组)和H2O2+siRNA组(先转染siRNA,余处理同H2O2组),用TUNEL和Western blot方法检测敲低circNFIX对H9c2细胞凋亡的影响。结果circNFIX表达趋势检测显示,随着H2O2孵育时间的延长,circNFIX的表达水平逐渐下降(F=23.677,P<0.01);转染siRNA可显著降低circNFIX的表达水平(F=424.70,t=24.44~25.97,P<0.01)。TUNEL和Western blot检测结果表明,转染siRNA使TUNEL阳性细胞率和Bax/Bcl-2表达水平显著降低(t=3.27~17.22,P<0.01)。结论在H2O2诱导的H9c2细胞凋亡中circNFIX的表达水平减低,沉默circNFIX的表达抑制H9c2细胞凋亡。

MiR-153-3p调控异丙肾上腺素诱导的心肌肥大机制研究

目的本研究旨在利用异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导心肌细胞肥大,研究miR-153-3p调控心肌肥大的作用机制。方法体外分离培养大鼠乳鼠心肌细胞,通过ISO不同时间(0、8、12、18、24、48h)梯度培养检测细胞肥大情况以及miR-153-3p的表达情况;转染miR-153-3p的拮抗剂(antagomir)于ISO诱导的大鼠原代心肌细胞中使miR-153-3p低表达,根据转染情况分为空白组,ISO组(药物诱导组),ISO+NC组(阴性对照组)和ISO+miR-153-3p antagomir组(实验处理组);用FITC Phalloidin FITC标记鬼笔环肽染色观察细胞表面积的变化,荧光定量PCR(real-time quantitativePCR,RT-qPCR)法检测心房利钠肽,β-肌球蛋白重链和miR-153-3p基因的表达。结果在一定时间内随着ISO诱导时间的延长心肌细胞肥大效果逐步升高,到18h和24h呈显著差异(P<0.05),48h后细胞肥大效果降低;miR-153-3p的表达量与肥大效果呈一致趋势,表面积结果与RT-qPCR结果一致。结论MiR-153-3p在大鼠心肌细胞中响应ISO诱导上调,并且敲低miR-153-3p显著降低心肌细胞的肥大效果。表明miR-153-3p是心肌肥大的重要调节因子,敲低miR-153-3p有抑制心肌肥大的作用,揭示了miRNA在控制心肌肥大发展中的新信号机制。