两种体外分离成人骨髓间充质干细胞方法的比较

目的:目前尚缺乏标准的骨髓间充质干细胞分离方法,虽然Percoll密度梯度离心法被认为是较经典的方法,但该方法操作较复杂。比较全骨髓培养法与常用的Percoll密度梯度离心法分离成人骨髓间充质干细胞的差异,以寻找一种简便、经济、实用的人骨髓间充质干细胞体外分离方法。方法:实验于2006-09/2007-06在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。实验材料:行自体干细胞移植治疗的糖尿病患者骨髓由青岛大学医学院附属医院内分泌科提供,患者对实验知情同意,并经医院伦理委员会批准。实验方法:采用全骨髓培养法与Percoll密度梯度离心法从成人骨髓中分离骨髓间充质干细胞,比较两种方法所获得的贴壁细胞克隆数、细胞形态、细胞表面标志及向脂肪细胞的分化情况。结果:①全骨髓培养法获得的贴壁细胞克隆数明显多于Percoll密度梯度离心法(P<0.05)。两种方法获得的人骨髓间充质干细胞形态无明显差异,均为长梭形,克隆样生长。②免疫荧光显示,全骨髓培养法分离培养的第3代骨髓间充质干细胞CD44阳性表达率和CD34阴性表达率均略低于Percoll密度梯度离心法,但两者之间的差异无统计学意义(t=2.639,P<0.01)。③两种方法获得的第3代骨髓间充质干细胞经地塞米松、胰岛素诱导后均可分化脂肪细胞。结论:与传统的Percoll密度梯度离心法比较,全骨髓培养法获得的骨髓间充质干细胞贴壁较快,传代时间略早,细胞数量多。

CTLA-4基因外显子1A/G^(49)多态性与1型糖尿病的相关性研究

目的 探讨细胞毒性 T淋巴细胞相关抗原 4 (CTL A- 4 )基因外显子 1的 4 9位点 A/ G多态性与中国汉族人 1型糖尿病 (DM)的关系。方法 采用多聚酶链式反应限制性片段长度多态性 (PCR- RFL P)技术对 33例典型 1型 DM患者、5 7例成人晚发自身免疫性糖尿病患者 (L ADA)和 84例健康对照者分析 CTL A- 4基因外显子 1的 4 9位点基因型。结果 1型DM患者的 CTL A- 4 / G4 9等位基因频率显著高于对照组 (P=0 .0 0 0 5 ) ,而典型 1型 DM和 L ADA两组间无显著性差异 (P=0 .0 97) ;ICA和 GADAb阳性率与 G4 9无明显相关性 (分别为 P=0 .0 6 5 ,P=0 .0 6 6 )。结论 CTL A- 4基因外显子 1多态性与中国汉族人 1型 DM有关 ,G4 9等位基因是 1型

中国家族性肾性糖尿SGLT2基因突变分析及表型和基因型相关性研究

目的总结中国7个家系的家族性肾性糖尿（FRG）患者的临床特点，验证和分析FRG患者及其亲属Na＋-葡萄糖协同转运蛋白2（SGLT2）基因突变位点，探讨FRG患者的基因型和表型的相关关系。方法检测7个家系FRG先证者及其一级亲属共23名家庭成员（其中14例患者）24h尿糖及血尿生化指标。PCR法扩增SGLT2全部编码区及其侧翼序列，用直接测序法分析SGLT2基因突变位点。结果SGLT2基因测序结果发现5个新的基因突变。包括4个错义突变：8号外显子第335位丝氨酸突变为甘氨酸（p．S335G，c．1003A〉G）；11号外显子第448位谷氨酰胺突变为精氨酸（p．Q448R，c．1343A〉G）；474位的丙氨酸突变为脯氨酸（p．A474P，c．1420G〉C）；13号外显子第580位甘氨酸突变为天冬氨酸（p-G580D，c．1739G〉A）；1个7号内含子缺失突变c．886（-10_-31）del，该突变经迷你基因（pSPL3外显子捕获质粒）验证为剪切突变。14例患者c．886（-10_-31）del的突变等位基因频率为43％（12／28）。纯合或复合杂合突变的患者表现为中重度肾性糖尿，杂合突变的患者表现为轻中度肾性糖尿，符合共显性遗传特点。结论我们发现5种新的突变基因型与中国人群家族性肾性糖尿相关，c．886（一10_一31）del可能为中国人群的高频突变基因。