青岛地区产ESBLs菌株Ⅰ类整合子的分布与耐药性分析

目的研究临床分离的多重耐药产ESBLs菌株中I类整合子的分布及其与ESBLs菌株耐药性之间的关系。方法收集青岛市立医疗集团临床分离鉴定的非重复大肠埃希菌89株及肺炎克雷伯菌86株，应用双纸片增效法进行ESBLs菌株鉴定，K—B纸片扩散法测定其对16种常用抗菌药物的敏感性，PCR法检测I类整合子的整合酶基因，分析I类整合子与细菌耐药性的关系。结果105株细菌鉴定为ESBLs阳性，产ESBLs菌对16种常用抗菌药物的耐药率为1．9％～93.3％，I类整合予的检出率为66．7％，I类整合子阳性和阴性产ESBLs菌株对16种抗菌药物的耐药率差异无统计学意义（P〉0．051。结论青岛地区产ESBLs菌中I类整合子流行广泛，但仍需进一一步研究其在ESBLs菌株多重耐药性中的作用机制。

伊曲康唑对白色念珠菌生物膜形成不同时期抑制作用分析

目的观察白色念珠菌生物膜生长动力学特征,分析伊曲康唑对其生物膜形成不同时期的抑制作用。方法用微孔板法建立白色念珠菌生物膜模型,采用CCK-8法检测生物膜不同时期的细胞活性;分别测定伊曲康唑对白色念珠菌临床株游离态和生物膜态的半数抑制浓度（MIC50、SMIC50）,比较生物膜形成不同时期对伊曲康唑的敏感性。结果白色念珠菌生物膜态在4～8h内,细胞代谢活性逐渐升高,18h时代谢水平趋于稳定;不同浓度的伊曲康唑对白色念珠菌有抑制作用,随着伊曲康唑浓度的增加,A值逐渐减小;白色念珠菌生物膜态对不同浓度伊曲康唑产生明显的耐药性;伊曲康唑对生物膜形成有抑制作用,随着生物膜形成,耐药性逐渐增强。结论形成生物膜的白色念珠菌对伊曲康唑的抵抗力比游离菌强。伊曲康唑对早期生物膜抑制率较高,到了中晚期生物膜则产生明显的耐药性。

血管内皮生长因子小干扰RNA诱导胃癌细胞凋亡机制的研究

目的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是重要的血管生成因子之一,目前在许多肿瘤组织中均发现VEGF有较高水平的表达,靶向VEGF的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)可明显抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。文中进一步探讨VEGF siRNA诱导人胃癌细胞SGC7901凋亡的机制。方法将培养的人胃癌细胞SGC7901分成空白对照组、慢病毒NC-Lv阴性对照组及慢病毒VEGF-siRNA-Lv干扰组,病毒感染96 h后,分别提取各组细胞总RNA及蛋白,RT-PCR法检测各组细胞bcl-2及P21 mRNA的表达水平,Western blot检测各组细胞SIRT1及P53蛋白的表达水平。结果与空白对照组及阴性对照组相比,RT-PCR显示VEGF-siRNA-Lv组细胞bcl-2的mRNA表达明显下调(P<0.05),P21 mRNA表达则明显上调(P<0.05),Western blot显示VEGF-siRNA-Lv组细胞SIRT1蛋白表达下调(P<0.05),P53蛋白表达则明显上调。结论 VEGF siRNA可通过下调SIRT1蛋白的表达,导致P53蛋白表达上调,并调控其下游P21、bcl-2靶基因的转录,从而诱导胃癌细胞SGC7901的凋亡。

大剂量维生素E、C联用对细胞功能的影响

目的研究大剂量维生素E(VE)、维生素C(VC)联用对大鼠外周血淋巴细胞的增殖、抗DNA氧化损伤以及红细胞膜流动性的影响。方法将Wistar大鼠随机分为6组,即对照组、VC组〔每天1 000 mg/(kg.bw)〕、2个VE组〔每天33,500 mg/(kg.bw)〕及2个VE、VC联合补充组,实验期为8周。分别采用DPH荧光标记、四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、单细胞凝胶电脉法(SCGE)分析红细胞膜流动性、淋巴细胞转化率及DNA氧化损伤。结果33mg/(kg.bw)VE可降低血浆丙二醛(MDA)水平,提高红细胞膜谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力(P<0.05);该组红细胞膜P、η值低于其它组,即膜流动性显著改善;淋巴细胞转化率较对照提高了146.54%;DNA氧化损伤为150.42 AU,显著低于其它组(P均<0.05)。联合补充(VE1+VC)组的细胞转化、抗DNA损伤等细胞功能指标均较单独补充(VE1)组下降(P<0.05)。结论较大剂量VE能提高淋巴细胞增殖活性及抗DNA氧化损伤能力、改善红细胞膜流动性,但大剂量VC可能对其影响产生拮抗作用;过大剂量VE、VC补充时均未观察到有利作用,甚至显示细胞活性下降。

下呼吸道感染病原菌的分布及耐药性分析

目的:了解青岛市立医疗集团下呼吸道感染病原菌的分布及耐药特点,为临床医生合理使用抗菌药物提供理论依据。方法:对2012年1月-2013年12月下呼吸道感染患者各类标本分离出的病原菌进行培养,采用VITEK-2全自动细菌鉴定仪进行菌种鉴定及药敏试验,双纸片扩散法进行ESBLs的确证试验。结果:分离鉴定的1 252株病原菌主要来源于呼吸内科(57.8%)、ICU(15.3%)、神经内科(13.5%)及神经外科(12.1%)。革兰阴性杆菌783株占62.5%,革兰阳性球菌418株占33.4%;真菌51株占4.1%。产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出率分别为56.4%和38.7%。革兰阴性杆菌对青霉素类及一代、二代头孢菌素耐药性较高,对亚胺培南等高度敏感,且产酶菌株的耐药率明显高于非产酶菌株。金黄色葡萄球菌除对万古霉素和替考拉宁高度敏感,对其他抗生素耐药率较高。结论:下呼吸道感染分离的病原菌以革兰阴性杆菌为主,且存在多重耐药现象,应引起临床医生的高度重视。

肺炎克雷伯菌感染的临床分布与耐药性分析

目的分析肺炎克雷伯菌感染的临床分布与耐药情况,为临床医生合理使用抗菌药物提供理论依据。方法回顾分析各类标本肺炎克雷伯菌的分离情况及耐药性。结果分离的798株肺炎克雷伯菌主要来源于痰液489株(61.28%)及咽拭子137株(17.17%);产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的检出率为37.47%;肺炎克雷伯菌对氨苄西林耐药率>90%,对磺胺二甲异恶唑耐药率>50%,对头孢哌酮/舒巴坦、头孢曲松、头孢吡肟等的耐药性有明显增加趋势。结论肺炎克雷伯菌的耐药率逐年增高,临床应加强对病原菌的分布及耐药性检测,以降低细菌的耐药性及医院的感染率。

siRNA沉默SIRT1基因对宫颈癌细胞HeLa增殖和凋亡的影响

化学合成靶向SIRT1基因的小干扰RNA,脂质体法转染人宫颈癌细胞株HeLa,观察小干扰RNA沉默SIRT1基因对HeLa增殖及细胞凋亡的影响。在优化siRNA SIRT1转染条件的基础上,应用RT-PCR和Western blot分别检测各组SIRT1 mRNA、SIRT1蛋白及凋亡相关蛋白的表达;CCK-8法检测细胞增殖抑制率;Hoechst荧光染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果表明,siRNA SIRT1转染细胞组SIRT1 mRNA水平和蛋白表达量明显低于对照组;siRNA SIRT1转染组细胞增殖受抑制,细胞凋亡率明显增加;凋亡相关蛋白P53、P21表达上调,Survivin表达下调。上述结果表明:siRNA SIRT1诱导的HeLa细胞凋亡与P53、P21、Survivin通路关系密切,但siRNA SIRT1诱导HeLa细胞凋亡的详尽机制有待进一步研究。

靶向VEGF小干扰RNA协同5-FU诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡机制的研究

探讨慢病毒介导的靶向VEGF小干扰RNA联合应用化疗药物5-FU诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的机制。以携带VEGF siRNA的慢病毒载体感染MCF-7细胞,应用RT-PCR和Western blot分别检测各组VEGF mRNA、VEGF蛋白及凋亡相关蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果表明,慢病毒VEGF siRNA干扰组细胞VEGF mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组,凋亡相关蛋白P53及P21表达上调,而SIRT1、Bcl-2及Survivin表达下调。流式细胞术检测显示慢病毒干扰组及5-FU组细胞凋亡率显著升高,联合治疗组的协同作用更为明显。上述结果表明:慢病毒介导的RNA干扰能明显抑制MCF-7细胞VEGF的表达,通过下调SIRTI蛋白的表达,导致P53蛋白表达上调,并调控其下游P21、bcl-2和Survivin的表达,从而诱导MCF-7细胞的凋亡,并且提高了MCF-7对5-FU的敏感性。

青岛地区大肠埃希菌中I类整合子与耐药性的分析

目的检测青岛地区临床分离的大肠埃希菌株中I类整合子的分布,分析I类整合子在细菌耐药性中的作用。方法收集青岛市立医疗集团分离鉴定的非重复大肠埃希菌78株,采用K-B纸片法检测其对16种常用抗菌药物的敏感性,PCR检测I类整合子整合酶基因,分析I类整合子与细菌耐药表型的关系。结果 78株大肠埃希菌中,整合酶基因阳性菌株占53.89%,尤其在急诊科及泌尿科最为常见;I类整合子阳性菌株对复方新诺明的耐药率明显高于I类整合子阴性菌株(P<0.05)。结论青岛地区I类整合子在大肠埃希菌中分布广泛,可影响细菌的耐药性,但需进一步研究其在大肠埃希菌多重耐药性中的作用。

重症监护病房常见病原菌的分布及耐药性分析

目的了解滨州市人民医院重症监护病房(ICU)常见病原菌种类及分布,并分析其耐药性的变迁,为临床合理应用抗菌药物提供依据。方法对2011年1月1日至2013年12月31日我院ICU住院患者各类标本分离的病原菌进行培养,应用BD PhoenixTM-100全自动微生物鉴定仪鉴定细菌菌种,K-B法进行药敏试验检测,WHONET 5.6软件进行统计分析。结果 3年共收集3 449份标本,检出非重复病原菌1 802株,阳性分离率为52.25%,其中革兰阴性菌1 399株占77.64%,以鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌为主;革兰阳性菌275株占15.26%,以葡萄球菌和肠球菌为主;真菌128株占7.10%,以白色假丝酵母菌为主。主要致病革兰阴性杆菌对亚胺培南和美罗培南敏感,而对替卡西林、头孢他啶及哌拉西林均耐药;革兰阳性菌对万古霉素、替考拉宁、呋喃妥因、利奈唑胺及氯霉素敏感,而对青霉素耐药率高达100.00%。鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的ESBLs检出率分别为81.47%、74.19%和56.26%。结论我院ICU病原菌以革兰阴性杆菌为主,对大多数常用抗生素的耐药率较高,应加强病原菌耐药性的监测,为临床医生合理应用抗菌药物提供依据。

无精子及少精子症患者染色体及生殖激素水平分析

目的分析214例无精子及少精子症患者的染色体核型和生殖激素水平,探讨男性不育患者的遗传学因素。方法采用外周血培养及G带染色分析214例无精子及少精子症患者的染色体核型,电化学发光法测定其血清生殖激素水平。结果染色体分析显示,染色体正常核型150例,占样本总量的70.09%;性染色体异核常型39例,占18.22%;染色体多态性变异21例,占9.81%;染色体平衡易位携带者4例,占1.87%。与染色体正常组相比,染色体异常组的卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和血清泌乳素(PRL)水平显著升高(P<0.05),T值呈降低趋势(P<0.05),E_2无显著性差异(P>0.05)。结论少精子及无精子症与染色体畸变及血清生殖激素异常密切相关,染色体核型及生殖激素的分析和检测,对临床不育症的诊治有指导意义。

产超广谱β-内酰胺酶细菌中I类整合子的研究进展

产超广谱β-内酰胺酶(Extended-spectrum beta-lactamase,ESBLs)细菌的多重耐药性是临床用药的一大难题,近年研究发现其耐药性的产生与整合子密切相关,其中临床最常见、研究最深入的是I类整合子。整合子是一种可移动基因元件,在整合酶的作用下捕捉外源基因盒并使之表达,是具有基因整合和切除功能的天然克隆和表达系统。研究表明I类整合子可连续捕捉和整合多种耐药基因,以质粒或转座子为载体在细菌之间传播耐药性,使ESBLs细菌多重耐药趋势十分严峻。本文就I类整合子的结构特征、I类整合子对耐药基因盒的整合作用及其与ESBLs细菌耐药性的关系等方面进行综述。

顺铂联合原花青素对宫颈癌Hela细胞生长抑制作用

目的探讨顺铂联合葡萄籽原花青素对宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用。方法 2015年10月—2016年1月体外培养宫颈癌Hela细胞,分为对照组、顺铂组、原花青素组及顺铂联合原花青素组,48、72 h后,倒置显微镜下观察细胞形态学变化,CCK8法检测细胞增殖抑制率。三组及以上计量资料比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法;计数资料比较采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果顺铂及原花青素对Hela细胞的增殖抑制呈现剂量和时间相关性,随着药物浓度的升高和作用时间的延长,Hela细胞的增殖抑制率升高。联合用药组9、18、37μmol/ml的顺铂联合340μmol/ml的原花青素分别作用48 h后Hela细胞的增殖抑制率分别为75.7%、76.1%、76.2%,72 h后Hela细胞的增殖抑制率分别为77.0%、78.0%、78.9%。两者联合用药组细胞增殖抑制率高于单独用药组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论不同浓度顺铂、原花青素对Hela细胞增殖均有抑制作用,原花青素对Hela抑制作用显著,顺铂联合原花青素对宫颈癌细胞Hela有协同抑制作用。