RNA干扰技术抑制人肺腺癌细胞系A549血管内皮生长因子-165蛋白的表达

目的观察RNA干扰技术能否有效抑制人肺腺癌细胞系A549血管内皮生长因子（VEGF）-165蛋白的表达。方法体外合成3条VEGF-165序列特异性双链小RNA（shRNA）及1条阴性对照RNA，应用RNAiFect^TMTransfection试剂盒转染细胞。Westernblot法检测VEGF-165蛋白的表达，MTT及细胞计数法检测siRNA转染对细胞活性的影响。结果随时间延长，目的siRNA对VEGF165蛋白表达有不同程度的影响，干扰时间越长，效果越明显。白干扰后24h起，各组VEGF165蛋白的表达差异有统计学意义（对照组相对灰度为0．96±0．27；干扰组24h相对灰度为0．81±0．10；48h：0．52±0．12；72h：0．36±0．10，P〈0．05）。噻唑蓝（MTT）比色法检测表明不同浓度siRNA及RNAiFectReagent对细胞生长均无明显的抑制作用，与对照组之间差异无统计学意义（对照组：0．329±0．013；干扰组为0．329±0．017—0．357±0．042，P〉0．05）。细胞计数法检测表明不同浓度siRNA及RNAiFeetReagent对细胞生长增殖无明显影响。细胞与对照组之间差异无统计学意义（24h：对照组1．56±0．11；干扰组1．47±0．12。72h：对照组4．38±0．38；干扰组4．61±0．41，P〉0．05）。结论siRNA可以有效抑制人肺腺癌细胞系A549VEGF165蛋白的表达。