人体寄生虫学教学改革探索

为适应21世纪医学发展的新形势,笔者在人体寄生虫的教学中,对教学观念、教学内容及教学方法,进行了初步改革探索,结果提高了教学质量,受到了学生的好评获得了学院的嘉奖。

肠道寄生虫标本的采集与保存

①目的 探讨动物肠道寄生虫感染情况及收集、保存寄生虫卵标本的方法。②方法 分别采用生理盐水直接涂片法、碘液染色法、金胺 酚改良抗酸染色法检测不同动物肠道寄生虫成虫及虫卵感染情况 ,并用沉淀法浓缩收集标本 ,于 4 0g/L甲醛溶液内保存。③结果 动物肠道寄生虫感染率较高 ,不同动物感染的肠道寄生虫种类及感染率不同。沉淀浓缩法收集并保存于 4 0 g/L甲醛溶液的寄生虫卵形态完整 ,无溶解、肿胀或破裂现象。④结论 沉淀浓缩法收集肠道寄生虫卵简单易行、费用低 。

卡氏肺孢子虫包囊形态学数据和参数的建立和分析

目的建立并分析卡氏肺孢子虫包囊的形态学数据和参数。方法使用计算机图像分析系统测量卡氏肺孢子虫包囊的长径、短径、周长及等效直径,计算其面积、体积、圆球度及成熟包囊数量等数据。结果包囊长径最大值为8.31μm,最小值为2.31μm;包囊短径最大值为6.30μm,最小值为1.69μm;包囊周长最大值为25.43μm,最小值为6.83μm;包囊面积最大值为38.53μm2,最小值为3.36μm2;包囊体积最大值为164.73μm3,最小值为4.64μm3。结论卡氏肺孢子虫包囊形态学数据和参数的建立为量化及评价虫体的形态奠定了基础。

人源隐孢子虫卵囊形态学参数的测定和分析

目的建立并分析人源隐孢子虫卵囊的形态学数据和参数。方法取阳性粪便涂片,金胺酚-改良抗酸染色法检测隐孢子虫卵囊。应用显微摄像系统采集1 138个人源隐孢子虫卵囊图像,使用计算机图像处理系统测量卵囊的长径、短径、等效直径、面积、体积及卵形指数。应用Excel数据处理软件对采集到的数据进行统计学分析。结果1 138个人源隐孢子虫卵囊长径均值为5.25μm,95%可信区间为3.79～6.72μm;卵囊短径均值为4.00μm,95%可信区间为2.72～5.28μm;卵囊面积均值为15.44μm^2;卵囊体积均值为46.55μm^3;卵囊等效直径均值为4.39μm;卵囊卵形指数1.33。结论建立了人源隐孢子虫卵囊形态学数据和参数,为量化及评价虫体的形态奠定了基础。

日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗抗生殖免疫的研究

目的 探讨日本血吸虫组织蛋白酶ＢＤＮＡ疫苗的保护。方法 分别用Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫昆明鼠和ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠，攻击感染后６ｗ 计数成虫负荷及粪便和组织内虫卵数。结果 用构建的Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫小鼠可影响成虫发育，肝组织减卵率为５９－３％～６５－０％ ，肠组织减卵率为５７－６％ ～６２－１％ ，粪便减卵率为８６－５％ 。结论 Ｓｊ３１ＢＩＮ 可诱导小鼠产生抑制雌虫生殖的免疫力。

RNA原位杂交法检测组织内弓形虫的实验研究

目的 探讨RNA原位杂交法在弓形虫病理检测中的应用。方法 设计并合成弓形虫SAG2基因来源的寡核苷酸探针。弓形虫RH株感染昆明株小鼠 ,分别于感染后第 2、3、4、5、6、7天处死 ,取肝组织制备石蜡标本进行RNA原位杂交 ,结果同HE染色及免疫组化相比较。结果 RNA原位杂交法于感染后第 2天检到阳性结果 ,组织内弓形虫的检出率 (2 8/ 2 8)高于免疫组化 (2 1/ 2 8)及HE染色法 (16 / 2 8)。结论 RNA原位杂交法是一种简便准确的弓形虫病理检测方法。

日本血吸虫组织蛋白酶B核酸疫苗血清抗体与抗生殖免疫关系的初步研究

目的 探讨日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗 (Sj31B1N)抗生殖免疫的可能机理。 方法 用Sj31B1N免疫小鼠 ,每 2周 1次 ,每次免疫前均尾静脉采血 1次 ,作血清抗体动态变化分析 ,免疫 4次后尾蚴攻击感染。感染后 4 5天 ,计数成虫负荷和肝、肠组织内虫卵数。结果 用Sj31B1N免疫小鼠后第 2周部分小鼠血清中出现了抗体 ,随时间延长 ,出现抗体阳性组小鼠数量增多 ,抗体滴度增加。抗体阳性组小鼠与阴性组小鼠对比 ,成虫减少率为 4 0 .6% ,肝组织减卵率为 4 8.0 % ,肠组织减卵率为 4 5.4 %。结论 核酸疫苗Sj31B1N可有效地诱导小鼠产生抗体 ,并且具有免疫保护作用。核酸疫苗Sj31B1N所诱导的体液免疫可能是抗日本血吸虫生殖免疫的机理之一。

恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)基因在毕赤酵母系统中的高效表达

目的 利用毕赤酵母高效表达系统表达用于下游实验的恶性疟原虫AMA - 1(Ⅲ )重组蛋白。方法 将测序正确的AMA - 1(Ⅲ )基因插入毕赤酵母分泌型表达载体 pPIC9k中 ,用高压电穿孔转化法将目的基因转化入酵母感受态细胞GS115 ,筛选高拷贝转化子 ,利用甲醇进行诱导表达。表达产物用SDS -PAGE和免疫印迹进行检测。结果 AMA - 1(Ⅲ )蛋白表达于培养上清 ,蛋白的相对分子质量分别为 16 .3ku ,免疫印迹结果表明AMA - 1(Ⅲ )基因表达蛋白能被抗AMA - 1(Ⅲ )的单抗所识别 ,出现特异条带 ,推算AMA - 1(Ⅲ )蛋白的表达量为 0 .8g/L。 结论 酵母细胞表达系统可高效表达在构象方面接近天然蛋白的AMA - 1(Ⅲ )

卡氏肺孢子虫标本染色方法的改进

①目的 改进卡氏肺孢子虫标本的染色方法 ,以便准确诊断卡氏肺孢子虫肺炎和制作教学标本。②方法 采用吉姆萨 瑞特染色法。③结果 染色后卡氏肺孢子虫包囊囊内小体细胞核呈紫红色 ,细胞质呈蓝色 ,囊壁呈淡蓝色 ,各部分结构清晰可辨。滋养体包核为紫红色 ,胞质为蓝色。④结论 吉姆萨 瑞特染色法操作简便、快速 ,卡氏肺孢子虫标本着色清晰 ,是临床诊断和教学中值得推广和应用的染色方法。

卡氏肺孢子虫超微结构观察

目的观察Wistar大鼠肺组织中卡氏肺孢子虫生长发育的超微结构。方法45只雌性Wistar大鼠随机分为2组,实验组(35只)每周2次经皮下注射地塞米松(1mg/次),对照组(10只)不作处理同步饲养。分别于首次注射地塞米松后第1～10周内,每周取两组鼠肺组织,电镜下观察卡氏肺孢子虫的感染情况及其生长发育的超微结构。结果电镜下观察,卡氏肺孢子虫虫体主要寄生于Wistar大鼠肺泡腔内,也见于肺泡膈、肺巨噬细胞和中性粒细胞,虫体表面有管状突起,内含细胞核、线粒体、空泡、粗面内质网和丰富的核糖体。许多卡氏肺孢子虫滋养体附着于肺Ⅰ型上皮细胞,偶见附着于肺Ⅱ型上皮细胞,有的伸出1或多个较宽大的伪足,部分细胞质内发现核相关细胞器和纺锤微管。囊前期有早、中、晚3种类型,在其内发现代表减数分裂的联会复合体。包囊壁上有一增厚处,内有一孔隙。结论卡氏肺孢子虫生活史由滋养体、囊前期和包囊等构成,包囊壁增厚处孔隙的存在提示为囊内小体逸出的一种模式。

恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白1C末端片段在毕赤酵母表达系统的高效表达与纯化(英文)

目的利用毕赤酵母表达系统高效表达并获得纯度较为理想的恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白1 C末端片段(MSP-119)重组蛋白。方法将带有6-his基因的MSP-119基因序列插入毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9k中,用高压电穿孔转化法将目的基因转化入酵母感受态细胞GS115,筛选出高拷贝转化子,优化表达条件,利用甲醇进行诱导表达。表达产物用SDS-PAGE和免疫印迹进行检测。结果毕赤酵母分泌表达MSP-119蛋白,免疫印迹结果表明MSP-119基因表达蛋白能被抗MSP-119的单抗所识别,出现特异条带,将培养上清利用Ni-NTA柱纯化后,推算MSP-119蛋白的表达量为1.0g/L。结论酵母细胞表达系统可高效表达可免疫识别的MSP-119重组蛋白。

卡氏肺孢子虫扫描电镜观察

目的观察卡氏肺孢子虫表面结构。方法通过皮下注射地塞米松建立大鼠卡氏肺孢子虫肺炎动物模型。处死卡氏肺孢子虫阳性大鼠,取肺脏磨成匀浆,通过Percoll密度梯度离心分离提取虫体,使用扫描电子显微镜观察。结果在扫描电镜下观察到表面光滑和粗糙两种状态的卡氏肺孢子虫。表面粗糙型虫体可见微绒毛,粗细不等的管状结构及大小不等的颗粒,并观察到体壁凹陷、伪足及脱囊虫体。结论扫描电镜观察卡氏肺孢子虫呈多态性,可见虫体脱囊、伪足及体壁孔。

PCR技术对大鼠卡氏肺孢子虫DNA的检测

目的 探讨诊断卡氏肺孢子虫感染的最佳方法。方法 建立大鼠动物模型，肺涂片用吉氏染色法查肺孢子虫包囊，支气管灌洗液、肺组织和血液标本，用ＰＣＲ技术进行卡氏肺孢子虫ＤＮＡ的检测，共计实验组大鼠１２ 只及对照组８ 只。结果 实验组大鼠，吉氏染色法卡氏肺孢子虫包囊检出率为６６－７％ ，ＰＣＲ技术支气管灌洗液、肺组织和血液标本，卡氏肺孢子虫ＤＮＡ检出率分别为８１－８ ％ 、５０％ 和５０％ 。比肺印片提前２ 周检出。对照组大鼠，吉氏染色法未检出卡氏肺孢子虫包囊，在支气管灌洗液和血液标本中，ＰＣＲ技术测出了卡氏肺孢子虫ＤＮＡ。结论 在血液标本中ＰＣＲ的成功应用，为卡氏肺孢子虫感染的流行病学调查及人类卡氏肺孢子虫肺炎的诊断，提供了一种有用的、非创伤性的方法。

卡氏肺孢子虫感染动物模型建立与电镜观察

①目的 观察卡氏肺孢子虫及病变肺组织超微结构 ,探讨卡氏肺孢子虫的可能致病机制。②方法肌注地塞米松诱发大鼠卡氏肺孢子虫肺炎 ,取其肺组织 ,按常规方法进行透射电镜观察。③结果 电镜下第2 2～ 2 8天即可观察到卡氏肺孢子虫的感染 ,以包囊为主 ;第 43～ 5 6天达重度感染 ,以滋养体为主 ,肺泡腔内多见 ,肺间质中少见 ,中性粒细胞、肺泡巨噬细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞内也可见到。④结论 大滋养体伸出丝状伪足与Ⅰ ,Ⅱ型肺泡上皮细胞粘连 ,使上皮细胞发生变性 ,Ⅱ型上皮细胞发生凋亡。

卡氏肺孢子虫感染的实验研究

为探索卡氏肺孢子虫肺炎的发病机制，将大鼠分为实验组和对照组。给予实验组大鼠肌注地塞米松以诱发肺孢子虫肺炎。每周剖杀，光镜及电镜下对其两组大鼠肺组织进行病原学和病理学观察。对照组大鼠健康，第８ｗｋ后体重增加４５％，肺组织未见病理改变，亦未观察到卡氏肺孢子虫。实验组大鼠慢性发病，第８ｗｋ后体重比原来减少约２６％。电镜下第４ｗｋ、光镜下第５ｗｋ开始查见卡氏肺孢子虫，第７～８ｗｋ达重度感染，阳性率为６６．７％。该虫在肺泡腔内多见，肺间质中少见，在中性粒细胞、肺泡巨噬细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞内也见到。肺组织在实验前４ｗｋ几乎没有什么改变，第５～６ｗｋ有少量虫体附着于肺泡壁，第７～８ｗｋ表现为卡氏肺孢子虫肺炎的典型组织病理学改变。大滋养体伸出丝状伪足与Ⅰ型上皮细胞粘连，该处上皮细胞发生变性改变，Ⅱ型上皮细胞发生凋亡。

口服含pMG36E-P30重组质粒的乳酸乳球菌对小鼠免疫应答的影响

目的用含pMG36E-P30重组质粒的乳酸乳球菌口服免疫小鼠,观察其所诱导的小鼠细胞及体液免疫类型。方法BABL/C小鼠随机分成疫苗免疫组、乳球菌对照组、生理盐水组,每次分别饲喂5×10^9个悬浮在缓冲液中的重组乳酸乳球菌、不含重组质粒的乳酸乳球菌及等体积生理盐水。于第27、34及48天从鼠尾静脉取血,分离血清,ELISA法检测免疫球蛋白G（IgG）、γ干扰素（INF-γ）、白细胞介素4（IL-4）水平。结果疫苗免疫组IgG水平与乳球菌对照组、生理盐水组比较差异有显著性（F=134.97,q=20.33、19.90,P〈0.01）。疫苗免疫组INF-γ、IL-4水平与生理盐水组及乳球菌对照组比较差异均有显著意义（F=79.20、17.05,q=6.18-16.79,P〈0.01）。结论该口服疫苗能引起小鼠特异性的体液免疫反应并能促进细胞免疫应答。