医学检验专业临床检验技能考核与评价体系的建立及实践

①目的 建立医学检验专业临床检验技能考核与评价体系并探讨其意义。②方法 根据医学检验专业教学实际情况 ,探索了临床检验技能考核模式 ,优化了考核项目 ,制定了考核目标和基本要求 ,建立了医学检验专业临床检验技能考核与评价体系 ,并应用于教学实践。③结果 该考核与评价体系适合于学生的临床检验技能考核与评价 ,经过临床检验技能考核与评价体系培训学生的临床检验技能 ,其考核成绩及临床实习成绩均明显高于未经过该体系培训的学生 ,差异有显著性 (F =5 .6 83～ 12 .347,q =11.90 1～ 18.736 ,P <0 .0 1)。④结论 医学检验专业临床检验技能考核与评价体系对培养医学检验专业学生创新思维和创新能力具有重要意义。

天然生物保鲜剂对蔬菜护色保鲜的效果

①目的 观察天然生物保鲜剂对蔬菜的护色效果。②方法 采用保鲜剂浸泡法 ,在 2 5℃室温条件下观察不同保鲜剂对蔬菜的保鲜护色效果。③结果 天然生物保鲜剂对蔬菜的护色效果最好。

左卡尼汀对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞保护作用的实验研究

目的研究左卡尼汀对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用。方法通过STZ诱导建立I型糖尿病大鼠模型,成模后采用灌胃方式给予不同剂量的左卡尼汀口服液,6周后行电镜观察,比较疾病模型组与治疗组之间视网膜节细胞的超微结构变化,并进行DNA末端转移酶介导缺口末端标记(TUNEL)染色,观察细胞的凋亡情况。结果电镜显示药物治疗组神经节细胞核异染色质及线粒体空泡化较对照组减少,200 mg·kg-1的治疗剂量效果优于100 mg·kg-1组(P<0.05)。药物治疗组减少了由糖尿病导致的视网膜神经节细胞的凋亡数目(P<0.05)。结论左卡尼汀对糖尿病大鼠模型视网膜节细胞具有保护作用,抗凋亡可能是作用机制之一。

C-PC抑制ox-LDL诱导内皮细胞脂质过氧化损伤的机制研究

氧化型低密度脂蛋白（ oxidized low density lipoprotein, ox-LDL）是诱导动脉血管内皮细胞凋亡的重要因素[3],内皮细胞保护是动脉粥样硬化防治的关键环节[1-3]。研究提示天然海洋药物--螺旋藻藻蓝蛋白（ C-Phycocyanin,C-PC）具有独特的抗动脉粥样硬化疗效[4-5],因此本研究旨在构建血管内皮细胞损伤模型,探讨C-PC在血管内皮细胞脂质过氧化损伤中所起的保护作用。

间苯三酚分光光度法测定硫酸软骨素的研究

目的 :建立一种快速准确的硫酸软骨素测定方法。方法 :利用含有间苯三酚的无机酸与样品中硫酸软骨素反应生成有色产物进行分光光度分析。结果 :10 0℃反应 30min在波长 5 5 8nm处测定硫酸软骨素 ,在 0 .10～ 1.0mg/ml范围内线性关系良好 (r =0 .9993) ,具有较好重现性。 结论 :此法操作简便、结果准确。

川穹嗪对AngⅡ诱导的大鼠心肌肥大细胞JAK-STAT通路作用

目的:研究川穹嗪对心肌肥大JAK-STAT通路的影响。方法:建立心肌肥大动物模型,分离培养新生大鼠心肌细胞,利用RT-PCR检测试验组和对照组基因ANP相对水平、Western blot检测试验组和对照组心肌肥大信号转导途径分子pJAK2、pJAK1、pSTAT3,并进行统计学分析。结果:川芎嗪可显著抑制ANP mRNA的表达(P<0.01),可明显抑制JAK2 JAK1 STAT3的表达(P<0.01)。结论:川穹嗪能干扰大鼠心肌肥大JAK-STAT信号转导通路,为中药干扰JAK-STAT信号转导通路治疗心肌肥大奠定基础。

钝顶螺旋藻藻蓝蛋白诱导HeLa细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨钝顶螺旋藻（Spirulina platensis）藻蓝蛋白（C-phycocyanin,CPC）对体外人宫颈癌细胞（HeLa细胞）凋亡的影响及分子机制。方法首先通过MTT法检测藻蓝蛋白对HeLa细胞增殖的影响,然后通过电镜观察藻蓝蛋白处理后的细胞的凋亡形态,琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA结构变化,流式细胞仪显示不同浓度藻蓝蛋白对HeLa细胞的细胞周期变化的影响,免疫组化法检测藻蓝蛋白对细胞表面凋亡相关基因表达的影响,检测凋亡相关的caspase的活性及细胞色素C的释放,以揭示藻蓝蛋白诱导HeLa细胞凋亡的作用机制。结果与未用藻蓝蛋白作用的对照组相比,藻蓝蛋白组的HeLa细胞存活率明显降低,并存在浓度剂量效应。藻蓝蛋白处理后的细胞呈现典型的凋亡形态,如细胞皱缩、细胞膜微绒毛消失、起泡,染色体密集,形成凋亡小体。凋亡细胞的DNA出现断裂,呈梯状的电泳带（DNAladder）,分子量为180~200 bp及其倍体。并且发现藻蓝蛋白处理后的处于亚二倍体峰HeLa细胞数蛋白浓度随藻蓝蛋白浓度的增高而明显增多。另外藻蓝蛋白能促进HeLa细胞内促凋亡基因（Fas、ICAM-1）的表达并抑制抗凋亡基因（Bcl-2）的表达,从而促进细胞内凋亡信号的传导。藻蓝蛋白可以激活caspase酶并可促进凋亡蛋白——细胞色素C从线粒体到细胞质释放。结论钝顶螺旋藻藻蓝蛋白具有诱导体外HeLa细胞凋亡的作用,通过促进凋亡信号在HeLa细胞内的传导从而达到抗肿瘤的效果。

藻蓝蛋白抑制血管平滑肌细胞过度增殖性管腔狭窄的机制研究

目的联合体内外实验,探讨钝顶螺旋藻藻蓝蛋白(C-PC)抑制血管平滑肌细胞过度增殖、血管损伤后内膜增生和管腔狭窄的作用和机制。方法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,用不同浓度的藻蓝蛋白进行干预,用氚标记胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)参入率检测血管平滑肌细胞DNA合成和增殖状态,用Western blot和图像分析方法检测细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子P21、P27的表达。构建大鼠胸主动脉球囊损伤后再狭窄动物模型,用藻蓝蛋白进行灌胃干预,术后14d取胸主动脉应用HE染色、免疫组化和计算机图像分析仪进行形态学、肌动蛋白(SM-α-actin)、增殖细胞核抗原(PCNA)、P21、P27表达水平检测。结果胎牛血清诱导的血管平滑肌细胞增殖活跃,P21、P27低表达;藻蓝蛋白明显促进P21、P27蛋白表达,明显抑制胎牛血清诱导的血管平滑肌细胞增殖和DNA合成。大鼠胸主动脉球囊损伤后,平滑肌细胞向内膜迁移、过度增殖、形成明显的新生内膜,导致管腔狭窄,SM-α-actin免疫组化证实新生内膜富含平滑肌细胞,PCNA高表达的同时P21、P27处于低表达水平;藻蓝蛋白干预后明显促进P21、P27基因表达,下调PCNA表达,抑制新生内膜形成、病理性血管重构,从而明显抑制管腔狭窄。结论钝顶螺旋藻藻蓝蛋白具有抑制血管平滑肌细胞过度增殖、血管损伤后管腔狭窄的作用,其机制与促进细胞周期关键调节因子P21、P27基因表达有关。

藻蓝蛋白介导光动力疗法在乳腺癌治疗中的机制研究

目的探讨藻蓝蛋白介导的光动力学疗法在乳腺癌治疗中的机制。方法将MCF-7细胞接种于小鼠肋缘皮下脾区构建乳腺癌小鼠模型。小鼠分成4组:对照组、He-Ne激光照射组、藻蓝蛋白处理组、光动力学治疗组(PDT组)。10d后检测瘤块重量,NK细胞活性和T细胞增殖活性。取瘤块制成石蜡包埋切片,采用原位核酸杂交技术、免疫组织化学技术检测组织细胞内凋亡相关蛋白的表达。体外培养的MCF-7细胞也相应分成4组,通过MTT法、电镜和免疫荧光技术检测细胞增殖活性、细胞形态、细胞色素C表达量的变化。结果与对照组相比,激光照射组各检测指标均无明显差异,而藻蓝蛋白处理组中NK细胞和T细胞的增殖活性有所增强,肿瘤组织细胞内抗凋亡蛋白(Fas)表达量明显增多,而瘤块的重量、肿瘤形成率和抗凋亡蛋白(p53、NF-κB、CD44)明显减少,如果藻蓝蛋白结合激光治疗发现各检测指标与对照组比较差异更为明显。体外试验证实藻蓝蛋白能抑制MCF-7细胞的增殖,促进细胞色素C的释放,电镜下细胞呈现典型的凋亡形态,用光动力学方法处理后效果更为明显。结论藻蓝蛋白可以作为一种光敏剂,其介导的光动力学疗法通过增强机体的免疫力同时启动乳腺癌细胞内的凋亡信号转导通路诱导细胞凋亡,从而达到杀死肿瘤的目的。

维生素C、B_6和牛磺酸增强叶酸防畸效果的观察

目的 观察维生素 C、B6和牛磺酸对叶酸防畸效果的影响。方法 以环磷酰胺致胎鼠发育畸形动物模型 ,分别对孕鼠补充叶酸 ;叶酸 +VC+VB6+牛磺酸 ,观察防畸效果。结果 补充上述营养素者可使胎鼠脑膨出率下降 (P<0 .0 1 ) ,胎鼠平均体重增加 (P<0 .0 5 ) ,上枕骨骨化程度提高 (P<0 .0 1 )。补充叶酸 +VC+VB6+牛磺酸组 ,与单独补充叶酸组比较 ,脑膨出率降低明显 (P<0 .0 5 ) ,上枕骨骨化程度提高 (P<0 .0 1 )。结论 叶酸有明显的促进胚胎发育和拮抗环磷酰胺致畸的作用 ,且与 VC、VB6及牛磺酸联合应用的效果明显优于单独补充。

人卵巢癌干细胞的分离培养和初步鉴定

目的:从人卵巢癌细胞株SKOV-3中分离培养卵巢癌干细胞,并鉴定其生物学性质。方法:卵巢癌SKOV-3细胞在含有生长因子的无血清培养基(SFM)中悬浮培养得到肿瘤细胞球。流式细胞术、Transwell小室侵袭实验分别检测SKOV-3细胞及其细胞球CD44和CD117的表达,筛选细胞表面标记物和观察体外侵袭能力;将肿瘤细胞球传代扩增,并用含血清培养基(SSM)培养促使其分化,并将细胞球和普通SKOV-3细胞分别接种于96孔板,CCK-8法检测增殖能力及其耐药性。结果:卵巢癌SKOV-3细胞能在SFM中形成可以稳定传代的细胞球,并显示很强的自我更新和增殖能力,含血清环境能够诱导其分化而贴壁生长;肿瘤细胞球中高表达CD44和CD117抗原标记,特别是CD44,其侵袭能力显著高于正常SKOV-3细胞(P<0.05);细胞球对顺铂具有更强的耐药性,将顺铂作用于细胞球及贴壁分化细胞24,48及72h后,细胞球抑制率分别为2.59%,8.43%,12.08%,显著低于分化贴壁细胞(抑制率分别为10.73%,28.13%,39.17%),分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:采用无血清悬浮培养法从人卵巢癌细胞系中获取的细胞球,可能含有一小部分具有增殖和分化能力的卵巢癌干细胞,多表达CD44和CD117抗原标记,且CD44更具有特异性。

黄芪注射液拮抗大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用和机制

目的探讨黄芪注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用和机制。方法成年健康雄性Wistar大鼠70只,应用线栓法经左侧颈外-颈内动脉插线建立大脑中动脉阻塞再灌注模型,经腹腔注射1g/L黄芪注射液(3ml/kg)干预治疗。Longa法评价大鼠神经功能缺损程度,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察脑梗死体积,苏木素-伊红染色观察顶叶皮质区神经元形态结构变化,透射电子显微镜观察神经细胞的超微结构,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测c-Jun氨基末端激酶3(JNK3)蛋白表达,RT-PCR检测JNK3 mRNA表达。结果经黄芪注射液治疗后,大鼠顶叶皮质区神经元JNK3 mRNA和JNK3蛋白表达较对照组显著减低,凋亡细胞数量显著减少,脑梗死体积显著缩小,神经元形态和超微结构以及动物神经行为功能显著改善。结论黄芪注射液可能通过下调神经元JNK3基因表达而抑制细胞凋亡,缩小脑梗死体积,改善动物的神经行为功能。

五氯酚对人胎盘碱性磷酸酶抑制的研究

监测人胎盘碱性磷酸酶在不同浓度五氯酚溶液中活力与荧光光谱的变化 ;测定五氯酚对其抑制的类型及pH对其抑制的影响 .结果显示 :低浓度的五氯酚 (<1 0mmol/L)使酶活力及其荧光强度迅速下降 ,发射峰位明显红移 ;继续提高五氯酚浓度 ,其活力与荧光强度逐渐下降 ,发射峰位仍在红移 ;五氯酚浓度为 5 0mmol/L时 ,荧光淬灭 ,但酶仍保留 5 1 4%的活力 ;五氯酚浓度高达 10 0mmol/L时 ,酶剩余活力为 30 0 % .进一步实验表明五氯酚使L 色氨酸的荧光强度降低 ,并伴有发射峰位的红移 ,当五氯酚浓度为 5 0mmol/L时 ,L 色氨酸的荧光淬灭 .五氯酚是人胎盘碱性磷酸酶的反竞争性抑制剂 ,其抑制常数 (Ki)为 3 86mmol/L .其抑制也受溶液 pH影响 ,pH <7 5时 ,对酶无抑制 ;pH为 7 5～ 10 5时 ,随 pH的增加 ,抑制作用逐渐增强 .提示五氯酚能够进入酶分子内部使其荧光淬灭 ,并抑制了酶活力 ;表明酶活力抑制与五氯酚的解离状态有关 .

藻蓝蛋白协同全反式维甲酸影响人宫颈癌HeLa细胞的增殖和凋亡

目的:探讨全反式维甲酸(all-transretinoic acid,ATRA)和钝顶螺旋藻藻蓝蛋白(C-phycocyanin,C-PC)联合用药对人宫颈癌HeLa细胞繁殖和凋亡的影响及其诱导细胞凋亡可能的分子机制。方法:实验分4组:对照组,C-PC组,ATRA组,C-PC+ATRA联合用药组。MTT法检测ATRA和C-PC单独及联合用药对HeLa细胞增殖的影响并计算它们的IC50,TUNEL法检测单独及联合用药后HeLa细胞凋亡情况,免疫组化法检测Bcl-2的表达,Westren blotting法检测Caspase-3的表达。结果:ATRA和C-PC均具有抑制HeLa细胞增殖的作用,IC50分别为(0.158±0.036)mmol/L和(192.75±5.79)μg/L。采用不同浓度的ATRA分别联合40或80μg/L C-PC处理HeLa细胞,ATRA的IC50分别为(0.095±0.007)mmol/L和(0.062±0.004)mmol/L,明显低于ATRA单独用药时的IC50值;当达到相同的抑制率时,联合C-PC用药可以显著降低ATRA的使用剂量。与对照组相比,两种药物单独用药增加了HeLa细胞凋亡水平(IODC-PC=63.12,IODATRA=59.98,P<0.05);当两种药物联合用药时,凋亡水平增加更加显著(IOD=89.52,P<0.01)。两药联合使用后HeLa细胞显著下调Bcl-2和上调Caspase-3的表达水平(均P<0.01)。结论:ATRA和C-PC联合用药可抑制HeLa细胞增殖和诱导其凋亡,其分子机制可能是通过抑制Bcl-2表达、促进Caspase-3表达来实现的。

维生素A缺乏对大鼠生精能力及睾丸标志酶活性的影响

目的 探讨维生素A缺乏对大鼠生精能力及睾丸标志酶活性的影响。方法 采用断乳期 2 1～ 2 3天Wistar雄性大鼠 ,体重 35～ 4 5g ,随机分为正常组 ,VA 缺乏组 ,分别饲喂正常饲料及无VA 的饲料 ,喂养 90天后 ,称重 ,乌拉坦麻醉 ,腹主动脉取血 ,采用荧光法测定血清VA 含量 ;摘取双侧睾丸和附睾。计算睾丸和附睾脏器系数 ,作精子相对计数及精子畸形率检测 ,测定睾丸中乳酸脱氢酶 (LDH)、碱性磷酸酶 (ALP)及γ -谷氨酰转肽酶 (GGT)活性 ,测定睾丸中总胆固醇 (CHOL)含量。结果 维生素A缺乏组雄鼠血清VA 含量明显低于正常组雄鼠 (t =4 1 5 1,P <0 0 1) ,睾丸、附睾的脏器系数下降 (t=12 12 ,3 83,P <0 0 1) ,精子数明显减少 (P <0 0 1) ,精子畸形率明显增高 (P <0 0 1)。睾丸中乳酸脱氢酶 (LDH)及γ -谷氨酶转肽酶 (GGT)活性明显降低 (t=3 2 2 ,3 0 7,P <0 0 1) ,碱性磷酸酶 (ALP)活性明显降低 (t′=2 83,P <0 0 5 ) ,睾丸中总胆固醇 (CHOL)含量明显降低 (t=3 37,P <0 0 1)。结论 维生素A缺乏影响雄性大鼠的生精能力。

人肝癌组织中nm23-H1基因突变的检测及意义

目的观察肿瘤转移抑制基因nm23-H1在人原发性肝细胞癌中的突变情况,探讨nm23-H1基因突变与肝癌发生、发展及转移的关系。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性技术(PCR-SSCP),对16例肝癌组织、12例癌旁组织和4例正常肝组织的nm23-H1基因的第1、2、4外显子突变情况突变进行检测。结果肝癌组织中有1例nm23-H1基因第1外显子纯合缺失;肝癌组织中1例第1外显子、1例第2外显子,癌旁组织中2例第2外显子有单链DNA泳动变位。结论nm23-H1基因突变在肝癌组织中发生率低。

小鼠睾丸生殖细胞减数分裂标本制作方法的改进

目的对小鼠睾丸生殖细胞减数分裂标本制作方法加以改进,以便使各期分裂细胞增多、背景清晰、结构紧密、图像清楚、利于阅片。方法小鼠肌肉注射6.5 mg/kg丙酸睾丸酮后继续饲养48 h;处死前腹腔注射秋水仙素,在标本制作过程中采用低渗处理、脱水、中性树胶封片。结果低倍镜下可见细线期、偶线期、粗线期、双线期、终变期细胞,各期细胞染色体分裂相较常规制片明显增加。结论方法改进后可见大量分散良好、背景清晰、染色体结构紧凑的生殖细胞减数分裂各期分裂相。

2,3-吲哚醌对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖影响

目的研究2,3-吲哚醌对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的影响。方法应用MTT比色法观察2,3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞生长的抑制情况;流式细胞仪检测2,3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞周期分布的影响;Western blot方法观察其对细胞信号传导通路蛋白有丝分裂原激活的蛋白激酶(ERK)的作用,同时结合免疫细胞化学方法检测2,3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞caspase-3的影响。结果2,3-吲哚醌能显著抑制SH-SY5Y细胞增殖,并使细胞周期阻滞于G0/G1期;caspase-3蛋白表达随着药物浓度的升高逐渐增加;加2,3-吲哚醌后磷酸化的有丝分裂原激活的蛋白激酶蛋白(ERK1/2)相对表达量降低。结论2,3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞具有抗增殖作用,其作用可能是通过诱导细胞凋亡、改变细胞周期以及作用于细胞通路而实现的。

整合型HBV DNA前C区突变和p53基因突变与肝细胞癌发生的关系

背景与目的:乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)的慢性感染是肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)发生的主要危险因素,但其确切的作用机理还不清楚。本研究拟探讨整合型HBV前C区突变、p53基因突变与HCC发生的关系,以期更好地了解HCC发生的分子机理。方法:应用聚合酶链反应技术(PCR)和聚合酶链反应-单链构象多态(singlestrandconformationpolymorphismanalysisofpolymerasechainreactionproducts,PCR-SSCP)技术对28例肝癌组织、25例癌旁肝硬化组织、12例肝硬化组织和15例正常肝组织标本内的整合型HBVDNA及其前C区基因突变和肝细胞p53基因突变进行检测分析。结果:(1)正常肝组织、肝硬化组织、癌旁肝硬变组织和肝癌组织中整合HBVDNA阳性率分别为6.66%、66.67%、96.43%和96.43%,正常肝组织与其它三组间阳性率差异有非常显著性(P<0.005);(2)4组整合型HBVDNA前C区突变率分别为0%、25.00%、48.15%和70.37%,4组间的突变率差异有显著性(P<0.05);(3)肝癌组织的p53基因突变率(57.14%)明显高于肝硬化组(16.67%)(P<0.05);(4)不同肝组织中p53基因突变率与整合HBVDNA阳性率、HBV前C区基因突变率呈正相关。结论:在肝细胞癌的发生、发展中整合HBVDNA及其前C区基因突变和p53基因突变可能起协同作用。