大学生创新项目对医学本科生素质的影响

目的评价创新实验对医学本科生素质的影响。方法比较近三年已经毕业的,参与和未参与大学生创新项目(简称"大创")的医学本科生的全国硕士研究生招生考试总成绩和单科英语成绩、研究生录取院校、医师资格考试成绩等指标,评价"大创"项目对医学本科生综合素质的影响。结果参与"大创"项目学生的全国硕士研究生招生考试总成绩和其中单科英语成绩均高于对照组,且录取比例、录取院校层次均有较大差别。比较医师资格考试成绩,"大创"学生的平均分数亦远高于未参与改项目的学生。结论"大创"实验在提高医学生创新能力的同时,对综合素质均有不同程度的提高。

青岛市农村区域妊娠期糖尿病患病及相关因素分析

目的探讨青岛市农村区域孕产妇妊娠期糖尿病患病情况以及围产结局,以指导临床早期干预及治疗妊娠期糖尿病,减少母婴并发症。方法整群选取2017年12月—2018年6月青岛辖区平度市妇幼保健院和平度市人民医院分娩的农村户口孕产妇1 319例,孕妇24～28周,行75 g葡萄糖耐量试验(OGTT)任意一点血糖异常即诊断为妊娠糖尿病(GDM)。其中妊娠期糖尿病(GDM)的孕妇400例,作为GDM组;正常妊娠孕妇919名,将其作为对照组,观察并比较两组孕妇的妊娠和围产结局情况。结果青岛市平度地区农村GDM患病率为30.33%(400/1319),而且随孕妇年龄增高发病率逐渐增高(χ2=20.847,P<0.01);GDM产后出血发生率明显高于对照组(χ2=19.445,P<0.05)。GDM的巨大儿发生率也有增高,差异有统计学意义(χ2=2.809,P>0.05)。结论青岛市农村地区GDM患病率较高,GDM对于母婴的危害较大。对于农村地区妊娠期糖尿病应引起足够的重视,做到早发现,早诊断,早干预更有利于维护母婴健康。

FAC对小鼠嗅球小胶质细胞和星形胶质细胞的影响

目的 探究经鼻给予枸橼酸铁铵(FAC)对小鼠嗅觉及嗅球(OB)中小胶质细胞和星形胶质细胞的影响。方法 取健康雄性8周龄C57BL/6小鼠20只,随机分成对照组和FAC组,每组10只。FAC组小鼠按照200 mg/kg体质量双侧鼻孔交替滴入FAC溶液,对照组给予等体积生理盐水,两组均隔天滴1次,共2周。2周后测试小鼠嗅觉功能,采用免疫荧光染色方法观察经鼻给铁对OB中小胶质细胞和星形胶质细胞的影响。结果 与对照组相比,FAC组小鼠出现明显的嗅觉障碍,差异有统计学意义(t=9.57,P<0.05);FAC组小鼠OB的质量明显降低,差异有统计学意义(t=10.50,P<0.05);FAC组小鼠OB中激活的小胶质细胞和星形胶质细胞明显增多,差异有统计学意义(t=5.07、4.83,P<0.05)。结论 经鼻给FAC能够引起嗅觉障碍,造成OB损伤以及小胶质细胞和星形胶质细胞激活。

前扣带回至伏隔核GABA能神经通路调控小鼠肠易激综合征及潜在机制研究

目的:探讨前扣带回(ACC)至伏隔核(NAc)的γ-氨基丁酸(GABA)能神经通路对小鼠肠易激综合征(IBS)的调控作用及潜在机制。方法:(1)慢急性联合应激法(CACS)建立C57BL/6J小鼠IBS模型,分为正常组和IBS组(均n=8),通过行为学测试、肠动力实验和腹部退缩反射评分观察小鼠IBS样症状。(2)采用荧光金(FG)逆行追踪结合荧光免疫组织化学法检测ACC-NAc的GABA能通路和IBS小鼠ACC中GABA神经元兴奋性(均n=8)。(3)在正常和IBS小鼠NAc分别注射1.5μL生理盐水(NS)、GABA_A受体拮抗剂荷包牡丹碱(BIC)或激动剂异四氢烟酸(Isog),并据此将小鼠分为3组(均n=8):NS组、BIC组和Isog组,观察其IBS样症状。(4)采用化学遗传法将腺相关病毒载体AAV2/9-mDlx-iCre-WPRE-pA定向注射于ACC,AAV2/2Retro Plus-hSyn-DIO-hM3D(Gq)-eGFP-WPRE-pA注射于NAc,小鼠分为4组(均n=8):NS(腹腔注射)+NS(NAc注射)组、NS+BIC组、氯氮平N-氧化物(CNO)+NS组和CNO+BIC组;或AAV2/2Retro-hSyn-DIO-hM4D(Gi)-EGFP-WPRE-pA注射于NAc,小鼠分为3组(均n=8):NS+NS组、NS+BIC组和CNO+NS组,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结肠组织中组胺和5-羟色胺(5-HT)的表达,并观察ACC-NAc的GABA能神经通路对小鼠IBS样症状的影响。结果:CACS诱导小鼠出现IBS样症状;FG逆行追踪结合免疫荧光组织化学实验结果显示,ACC的GABA神经元可以投射至NAc。NAc注射BIC后IBS小鼠的焦虑样行为、腹泻样症状和内脏超敏反应显著减轻(P<0.05)。化学遗传法抑制投射至NAc的ACC内GABA能神经元可显著减轻IBS小鼠的症状(P<0.05)。结论:ACC^(GABA)-NAc神经通路可参与小鼠IBS样症状的调控,其机制可能与肠道组胺和5-HT的释放有关。

Cs4-SeNPs对BV2小胶质细胞炎症反应作用及机制

目的 探讨虫草多糖功能化纳米硒(Cs4-SeNPs)对脂多糖(LPS)诱导BV2小胶质细胞炎症反应的作用及其可能机制。方法 以不同浓度(0.01、0.10、1.00μmol/L)Cs4-SeNPs作用LPS诱导的BV2小胶质细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测BV2小胶质细胞活力,免疫印迹技术检测BV2小胶质细胞硒蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白表达,荧光定量PCR技术检测不同时间(4、8、12 h)BV2小胶质细胞促炎因子环氧化酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达。结果 0.01、0.10、1.00μmol/L的Cs4-SeNPs对BV2细胞活力无明显影响。与对照组相比,LPS组GPX4蛋白表达降低(F=25.47,q=6.43,P<0.01);0.01、0.10和1.00μmol/L的Cs4-SeNPs处理组GPX4蛋白表达较LPS组明显升高(q=5.72~14.07,P<0.01),且1.00μmol/L Cs4-SeNPs作用效果最好(q=6.04~8.35,P<0.01)。LPS组COX-2与iNOS mRNA表达较对照组显著上调(F=25.00、37.34,q=12.18、12.06,P<0.001)。1.00μmol/L Cs4-SeNPs预处理12 h可显著抑制COX-2基因表达(q=6.10,P<0.05);预处理8和12 h可显著抑制iNOS mRNA表达(q=4.71、6.97,P<0.05)。结论 Cs4-SeNPs对LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症反应具有抑制作用,其机制可能与硒蛋白GPX4的调控有关。

PD模型小鼠外侧苍白球胶质细胞激活和铁沉积变化

目的 探究慢性1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导帕金森病(PD)模型小鼠黑质(SN)和外侧苍白球(GPe)脑区星形胶质细胞、小胶质细胞数目及铁沉积的变化。方法 将健康雄性8周龄C57BL/6小鼠随机分成对照组和MPTP组,MPTP组小鼠腹腔注射MPTP(18 mg/kg体质量),对照组给予等体积生理盐水,每周2次,持续5周。通过爬杆实验检测小鼠运动功能,组织免疫荧光染色检测酪氨酸羟化酶(TH)神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞数目,普鲁士蓝铁染色(Perl’s-DAB)检测铁沉积。结果 与对照组相比,MPTP组小鼠爬杆转头时间明显增加,差异有统计学意义(t=2.42,P<0.05);SN中TH神经元数目减少,星形胶质细胞和小胶质细胞数目增加,铁阳性细胞数增加,差异均有统计学意义(t=3.82~4.83,P<0.05);GPe中小胶质细胞数目显著增多(t=2.54,P<0.05),星形胶质细胞和铁阳性细胞数目无变化。结论 MPTP诱导的PD小鼠模型建模成功。模型鼠SN胶质细胞激活和铁沉积均增多,而GPe中仅有小胶质细胞激活增多。

MPTP慢性帕金森病模型小鼠步态的改变

目的 探究1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)慢性帕金森病(PD)模型小鼠步态改变。方法 模型组8周龄雄性C57BL/6小鼠给予腹腔注射MPTP(30 mg/kg体质量,每周2次,共4周),对照组注射等量的生理盐水,每组10只。采用动物步态分析系统(CatWalk)分别检测两组注射后1、2、3和4周小鼠步态相关指标。结果 步态分析结果显示,与对照组小鼠相比,模型组的运动持续时间、站立时间、脚步周期显著增加,平均速度、身体速度显著降低,差异均有统计学意义(t=2.209~5.176,P<0.05)。提示小鼠的步态发生改变。结论 MPTP慢性模型可以引起小鼠步态变化。

二氢杨梅素对铁过载导致的海马神经元细胞损伤的保护作用及其机制

目的探讨二氢杨梅素(DMY)对枸橼酸铁铵(FAC)导致的原代海马神经元细胞损伤的保护作用及其机制。方法取出生24 h SD乳鼠的原代海马神经元进行体外培养,使用CCK-8法检测不同浓度DMY处理后的原代海马神经元细胞的活性,确定DMY给药浓度。将原代海马神经元细胞分为对照组(H组)、100 mmol/L浓度的DMY处理组(I组)、250 mmol/L浓度的FAC处理组(J组)、100 mmol/L浓度的DMY与250 mmol/L浓度的FAC共处理组(K组),使用流式细胞术检测各组细胞中活性氧(ROS)的含量,使用比色法检测各组细胞中丙二醛(MDA)的含量,采用Western blot方法检测各组细胞中的NF-E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)和谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)蛋白的表达水平。结果CCK-8检测结果显示,在DMY浓度为100 mmol/L时,原代海马神经元细胞的存活率最高(F=9.95,P<0.05),故以该浓度用于后续实验。与H组相比,J组细胞中ROS和MDA含量明显升高(F=176.81、5523.35,P<0.05);与J组相比,K组细胞中ROS含量和MDA含量明显降低(F=18.21、412.96,P<0.05)。与H组相比,J组细胞中Nrf2、HO-1、GPX4蛋白相对表达量明显降低(F=27.35~81.32,P<0.05);与J组相比,K组细胞中的Nrf2、HO-1、GPX4蛋白相对表达量明显升高(F=8.74~21.46,P<0.05)。结论DMY可以缓解铁过载导致的原代海马神经元氧化应激损伤,其机制可能与其激活了原代海马神经元中的Nrf2-HO-1/GPX4通路有关。

下丘脑室旁核外源性orexin-A对肥胖大鼠摄食的影响及NPY受体信号的调控

目的:探讨饮食诱导肥胖(DIO)大鼠神经肽Y(NPY)受体信号通路是否参与下丘脑室旁核(PVN)外源性注射食欲素A(orexin-A)对摄食和葡萄糖敏感(GS)神经元兴奋性的调控。方法:采用荧光免疫组织化学实验观察PVN中orexin-A受体(即食欲素1型受体,OX1R)和NPY受体Y5(NPY-5R)的表达;采用单细胞外放电记录观察orexin-A对PVN内GS神经元兴奋性的影响;分别于SD大鼠和DIO大鼠PVN埋置套管,经套管注射orexinA、OX1R拮抗剂SB-334867和NPY-5R拮抗剂CGP-71683,观察大鼠0~2 h和0~4 h摄食量。结果:DIO大鼠PVN中OX1R和NPY-5R的表达显著高于SD大鼠。Orexin-A抑制PVN内葡萄糖抑制性(GI)神经元,兴奋葡萄糖兴奋性(GE)神经元,但是orexin-A对GS神经元的兴奋或抑制效应可被NPY-5R拮抗剂CGP-71683部分阻断,且与SD大鼠相比,orexin-A对DIO大鼠PVN内GS神经元兴奋或抑制效应更加明显。PVN内注射orexin-A可增加SD大鼠和DIO大鼠摄食量。但是orexin-A诱导的促摄食效应被NPY-5R拮抗剂CGP-71683部分阻断。与SD大鼠相比,orexin-A诱导的促摄食效应在DIO大鼠中更加明显。结论:PVN内外源性注射orexin-A可能主要通过OX1R信号通路参与大鼠摄食和GS神经元兴奋性调控,NPY-5R信号也参与了该过程调控,在DIO大鼠中更敏感。

miR-29a基因敲除对C57BL/6小鼠肾小球结构和功能的影响

目的:观察微小RNA-29a(miR-29a)基因敲除对小鼠肾小球功能和结构的影响。方法:应用CRISPR/Cas9技术,选择C57BL/6 miR-29a基因敲除型(miR-29a knockout,miR-29a KO)小鼠作为实验组,未敲除型小鼠作为野生型(wild-type,WT)对照组(n=30)。分别在第3、12和24周收集小鼠24 h尿液。采用考马斯亮蓝染色法进行尿蛋白测定;ELISA测定尿白蛋白和尿肌酐水平,并计算尿白蛋白/肌酐比值(urinary albumin/creatinine ra‐tio,UACR)。选取3、12和24周的小鼠,采用过碘酸雪夫氏(periodic acid-schiff,PAS)染色法观察肾脏组织的病理变化;通过透射电镜以及冷冻蚀刻电镜观察肾小球超微结构。另取2组24周的小鼠,一组小鼠腹腔麻醉后用Dyna‐beads™M-450 Tosylactivated微磁珠经心脏灌流后分离肾小球,用于RNA和蛋白的提取;另一组小鼠肾脏用于免疫荧光染色。采用RT-qPCR、免疫荧光染色以及Western blot检测小鼠肾小球足细胞标志性蛋白nephrin和podocin以及肾小球IV型胶原(COL4α3、COL4α4和COL4α5)和层粘连蛋白β2(lamininβ2,LAMB2)的表达。结果:考马斯亮蓝染色法实验结果显示,miR-29a KO组小鼠出现尿白蛋白,WT组小鼠无蛋白尿。UACR结果显示3周时,miR-29a KO组与WT组相比,数据无统计学差异;12周时,miR-29a KO组的UACR比值与WT组相比显著增高(P<0.01);24周时,UACR比值差异更加显著(P<0.01)。PAS染色显示,3周时,miR-29a KO组小鼠肾小球出现轻微的细胞外基质沉积和系膜增生,随着周龄的增加,miR-29a KO组小鼠肾小球出现胶原纤维沉积,系膜扩张和外周血管壁增厚。透射电镜显示,miR-29a KO组小鼠肾小球超微结构在3周开始出现改变,包括足突排列紊乱,轻微融合等现象;12周时足突数量减少、足突融合加重,肾小球基底膜增厚的程度加重;24周时,上述变化进一步加重。与WT组小鼠相比,miR-29a KO组小鼠足细胞标志性蛋白nephrin的表达在mRNA水平显著下调(P<0.05);podocin表达在mRNA水平也呈下降趋势,但结果无统计学意义;COL4α3/α4/α5以及LAMB2表达在mRNA水平明显上调(P<0.05)。West‐ern blot结果显示,与WT组小鼠相比,miR-29a KO组小鼠nephrin和podocin蛋白表达显著降低(P<0.05);COL4α3/α4/α5以及LAMB2表达显著增加(P<0.01)。肾小球免疫荧光结果和Western blot结果一致。结论:miR-29a基因敲除会导致小鼠出现蛋白尿、肾小球损伤及纤维化,随着小鼠的老龄化损伤程度加重。

糖尿病大鼠弓状核-海马肥胖抑素通路构成及对胃运动和胃排空的影响

目的:探究糖尿病大鼠弓状核(ARC)-海马肥胖抑素(obestatin)神经通路构成,以及该通路对大鼠胃运动、胃排空的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠采用果糖溶液诱导胰岛素抵抗加腹腔注射链脲佐菌素的方法制备糖尿病模型,造模之后,随机分为5组:对照组(NS组)、0.1、1和10 pmol obestatin组、obestatin+NBI27914组,每组7只;各组通过置管分别向海马内注射0.5μl生理盐水(NS)、obestatin(0.1 pmol、1 pmol、10 pmol)和混合液(10 pmol obestatin+60 pmol NBI27914),给药后立即记录大鼠胃运动,15 min后进行胃排空研究;通过荧光金(FG)逆行追踪及免疫组化方法比较正常及糖尿病大鼠ARC-海马obestatin神经通路构及ARC obestatin mRNA表达的异同。结果:与正常大鼠相比,糖尿病大鼠ARC FG/obestatin双标神经元数目显著减少(P<0.05),ARC obestatin mRNA表达量显著下降(P<0.05);obestatin各组可剂量依赖性的抑制大鼠胃运动及胃排空(P<0.05~0.01),obestatin的这些效应可被促肾上腺皮质激素受体1(CRFR1)阻断剂NBI27914部分阻断(P<0.05);obestatin对糖尿病大鼠胃运动和胃排空的抑制效应显著减弱(P<0.05)。结论:ARC-海马之间存在obestatin神经和功能通路,参与糖尿病大鼠胃运动及胃排空调控,且CRFR1信号通路参与该过程。该通路功能的减弱可能参与了糖尿病早期胃动力紊乱的发病。

中央杏仁核GABA神经元对小鼠情绪和摄食的调控研究

目的:探讨中央杏仁核(CeA)内γ-氨基丁酸(GABA)能神经元到下丘脑室旁核(PVN)神经通路对小鼠情绪和摄食的调控作用及潜在机制。方法:采用慢性束缚应激(CRS)建立KM小鼠焦虑抑郁样模型。(1)在CRS小鼠和正常对照(NOR)小鼠的PVN注射0.3µL生理盐水(NS)或GABAA受体拮抗剂荷包牡丹碱(BIC),并据此将小鼠分为4组(n=10):NOR+NS组、NOR+BIC组、CRS+NS组和CRS+BIC组。通过旷场实验、高架十字迷宫实验、大理石掩埋实验和强迫游泳实验观察小鼠行为学的变化;观察2周内小鼠摄食和体重的变化。(2)采用荧光金逆行追踪结合荧光免疫组织化学法检测CeA-PVN神经通路。(3)采用化学遗传法将腺相关病毒载体AAV2/9-mDlx-hM3D(Gq)-EGFP-ER2-WPRE-PA定向注射于CeA,小鼠分为4组(n=10):NS(腹腔注射)+NS(PVN微量注射)组、NS+BIC组、氯氮平N-氧化物(CNO)+NS组和CNO+BIC组。观察CeA-PVN的GABA能神经通路对小鼠行为学和摄食体重的影响。结果:行为学结果显示,CRS+NS组出现焦虑抑郁样行为改变;与NOR+NS组相比,CRS+NS组小鼠在6~12 h、12~24 h和2周内的摄食和体重显著降低(P<0.05)。PVN注射BIC后CRS小鼠焦虑抑郁样行为显著减轻(P<0.05),6~12 h、12~24 h和2周内的摄食量显著增加(P<0.05),持续给药第8天开始CRS小鼠的体重显著增加(P<0.05)。荧光金逆行追踪结合免疫荧光组织化学实验结果显示,CeA的GABA神经元可以投射至PVN。化学遗传法和行为学实验结果显示,与NS+NS组相比,CNO+NS组小鼠出现焦虑抑郁样行为(P<0.05),在6~12 h、12~24 h和2周内的摄食量显著降低(P<0.05),且第6天开始体重显著减轻(P<0.05);与CNO+NS组相比,CNO+BIC组的焦虑抑郁样行为显著减轻(P<0.05),在6~12 h、12~24 h和2周内的摄食量显著增加(P<0.05),给药第8天体重也开始显著增加(P<0.05)。结论:CeA-PVN的GABA能神经通路可参与小鼠的情绪行为和摄食调控。

CaSR激动剂R568灌胃对小鼠摄食影响及机制

目的探讨钙离子敏感受体(CaSR)激动剂R568对小鼠食物摄入量的影响及其机制。方法将雄性KM小鼠随机分为R568组、二甲基亚砜(DMSO)组、胆囊收缩素A(CCKA)受体拮抗剂L-364,718+R568组和NPS-2143+R568组,每组8只,采用摄食分析方法,观察灌胃R568对小鼠食物摄入量的影响。将小鼠随机分为DMSO组和R568组(每组7只),采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法观察R568对小鼠血清、胃肠组织胃饥饿素(Ghrelin)、胆囊收缩素(CCK)、酪酪肽(PYY)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)及下丘脑CCK、Ghrelin含量变化的影响;采用荧光免疫组化染色方法,观察R568对下丘脑室旁核(PVN)、外侧区(LHA)、弓状核(ARC)中c-fos表达的影响。将小鼠分为DMSO组和R568组(n=7),采用高效液相色谱(HPLC)法观察R568对下丘脑神经递质多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)含量变化的影响。结果与DMSO组相比,R568灌胃后0~2 h内小鼠摄食量显著降低(F=5.274、5.225,P<0.01),并且这种作用能被CaSR阻断剂NPS-2143阻断;与DMSO组相比较,R568组胃和血清Ghrelin含量显著降低(t=2.995、4.939,P<0.05),近端小肠和血清CCK含量显著增高(t=3.223、4.970,P<0.05),而PYY和GLP-1无明显变化(P>0.05)。R568灌胃后小鼠下丘脑PVN、LHA、ARC中c-fos阳性细胞数目显著增加(t=3.508~6.169,P<0.01)。与DMSO组相比,R568灌胃后下丘脑DA含量显著减少(t=3.288,P<0.05),下丘脑5-HT、CCK及Ghrelin含量差异无显著性(P>0.05)。结论胃肠道CaSR激活后引起小鼠的摄食量减少,其作用机制与调节胃肠道CCK和Ghrelin分泌,调控下丘脑PVN、LHA、ARC神经元的兴奋性以及下丘脑DA的分泌有关。

IGF-1对6-OHDA诱导人神经母细胞瘤细胞损伤作用

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH细胞)神经毒性反应的抑制作用。方法将SK-N-SH细胞种于96孔板,首先用不同浓度的IGF-1(6.25、12.50、25.00、50.00μg/L)预处理细胞24 h,然后与6-OHDA(100μmol/L)共同孵育细胞24 h,采用MTT法检测细胞活力。再将SK-N-SH细胞分为对照组(细胞不处理)、6-OHDA组(用100μmol/L 6-OHDA处理细胞24 h)、6-OHDA+IGF-1组(细胞先用6.25μg/L IGF-1预处理24 h,再与100μmol/L 6-OHDA共同作用24 h),应用Western blot方法检测Bcl-2及Bax蛋白表达。结果6.25~50.00μg/L IGF-1均能够明显对抗6-OHDA诱导的神经毒性作用,提高细胞的存活率(F=11.53,q=4.795~5.556,P<0.05)。与对照组相比较,6-OHDA组Bcl-2蛋白的表达水平明显降低,而Bax蛋白的表达水平明显升高,差异有显著性(F=22.92、35.80,q=8.223、8.727,P<0.01);6.25μg/L IGF-1能够明显对抗6-OHDA诱导的Bcl-2蛋白表达的下调和Bax蛋白表达的上调(q=8.361、11.450,P<0.01)。结论IGF-1可对抗神经毒素6-OHDA诱导的SK-N-SH细胞凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的蛋白表达变化,发挥神经保护作用。

姜黄素对环磷酰胺所致小鼠肠蠕动障碍的作用及机制

目的探讨姜黄素改善环磷酰胺所致小鼠肠蠕动障碍的作用及机制。方法选取雄性健康昆明小鼠40只,随机分为对照组、姜黄素组、环磷酰胺组和姜黄素+环磷酰胺组,每组10只。对照组给予溶媒溶液灌胃和生理盐水腹腔注射,姜黄素组给予姜黄素灌胃和生理盐水腹腔注射,环磷酰胺组给予溶媒溶液灌胃和环磷酰胺腹腔注射,姜黄素+环磷酰胺组给予姜黄素灌胃和环磷酰胺腹腔注射。分别于第1次给药前和末次给药后,测量各组小鼠体质量;采用亚甲蓝灌胃法测量小鼠小肠推进率;取小鼠十二指肠组织,采用荧光定量PCR法和Western blot法检测Cajal间质细胞(ICC)相关因子的表达;小鼠十二指肠组织切片后行苏木精-伊红染色观察组织学变化。结果与对照组相比较,环磷酰胺组小鼠体质量和小肠推进率显著降低(F=112.500、121.988,P<0.01);酪氨酸激酶受体C-kit及其配体干细胞因子(SCF)的mRNA相对表达量(F=181.895、201.84,P<0.01)以及蛋白表达量(F=71.258、93.025,P<0.01)显著下降;组织学观察显示十二指肠黏膜下层大量淋巴细胞浸润。与环磷酰胺组相比较,姜黄素+环磷酰胺组小鼠的体质量和小肠推进率均显著升高(F=19.527、24.511,P<0.01);C-kit和SCF的mRNA相对表达量(F=24.576、37.935,P<0.01)以及蛋白表达量(F=23.631、39.906,P<0.01)显著升高;十二指肠黏膜下层淋巴细胞浸润数量明显减少。而姜黄素组与对照组相比,上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论姜黄素可显著改善环磷酰胺所致小鼠肠蠕动障碍,其机制可能与改善肠组织C-kit/SCF信号有关。

黑质区过表达TFEB对C57/BL6小鼠运动功能影响

目的探究黑质区过表达转录因子EB(TFEB)对C57/BL6小鼠运动功能的影响。方法8周龄雄性C57/BL6小鼠30只,随机分为2组,每组15只。采用脑立体定位注射方法,将携带有TFEB的腺相关病毒(AAV-TFEB)注射至实验组小鼠黑质区,对照组小鼠注射相同剂量的空载腺相关病毒(AAV-mCherry)。4周后,采用免疫荧光和免疫印迹方法检测小鼠黑质区是否高表达TFEB,利用旷场、转棒和爬杆实验评估高表达TFEB小鼠的运动功能变化。结果脑立体定位注射腺相关病毒4周后,可检测到小鼠黑质区高表达TFEB。旷场实验显示,实验组小鼠的运动总距离较对照组增加,差异具有统计学意义(t=2.776,P<0.05),两组小鼠通过中心区域次数差异无显著性(t=1.414,P>0.05)。转棒实验显示,两组小鼠运动疲劳状态差异无显著性(t=1.017,P>0.05)。爬杆实验显示,两组小鼠的运动协调能力差异无显著性(t=0.264,P>0.05)。结论黑质区高表达TFEB能够增强C57/BL6小鼠的持续运动能力。

淫羊藿素对LPS诱导原代星形胶质细胞COX-2和iNOS基因表达影响

目的探讨淫羊藿素(ICT)对脂多糖(LPS)诱导的原代星形胶质细胞炎症反应的抑制作用及雌激素受体(ER)阻断剂ICI182,780对其影响。方法常规培养原代星形胶质细胞,将其分为对照组、LPS组、ICT+LPS组、ICI182,780+ICT+LPS组、ICI182,780组。对照组给予1g/L二甲基亚砜处理,其余各组在有或无ICT预处理条件下,先加入1μmol/L的ICI182,780作用1h,然后加入10μmol/L的ICT预保护1h,继以1mg/L的LPS作用细胞6h。应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组环氧化酶2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因的表达。结果与对照组比较,LPS组COX-2和iNOS基因的表达明显上调(F=18.19、394.80,q=8.89、41.74,P<0.01);ICT预保护能明显降低由LPS诱导的COX-2和iNOS基因表达的上调(q=7.44、13.83,P<0.01),此作用可以被ER特异性阻断剂ICI182,780所阻断(q=6.80、8.80,P<0.01);ICI182,780组二者表达与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ICT能够抑制LPS诱导的原代星形胶质细胞COX-2和iNOS基因的表达,其抗炎机制与ER途径的激活有关。

SNAP94847经腹侧被盖区至迷走神经背侧运动核对焦虑大鼠胃黏膜损伤作用研究

目的:探究黑色素浓集激素(MCH)受体1(MCHR1)拮抗剂SNAP94847能否作用于腹侧被盖区至迷走神经背侧运动核(VTA-DMV)神经通路,进而参与调控大鼠应激性焦虑所致胃黏膜损伤及其潜在机制。方法:采用荧光金逆行追踪结合免疫荧光组织化学法检测VTA-DMV的MCHR神经通路(n=10);采用单细胞外放电记录法检测大鼠VTA微量注射MCH或SNAP94847对多巴胺(DA)神经元放电活动的影响(n=30);18只大鼠随机分为正常+生理盐水(NS)组、焦虑+NS组和焦虑+SNAP94847组,观察VTA微量注射SNAP94847后大鼠行为学变化、胃黏膜炎症损伤及相关炎症指标的变化(n=6);24只焦虑模型大鼠随机分为假损毁+NS组、假损毁+SNAP94847组、电损毁+NS组及电损毁+SNAP94847组,观察电损毁DMV后VTA微量注射SNAP94847对胃黏膜炎症损伤相关炎症指标的影响(n=6)。结果:逆行追踪结合荧光免疫组织化学染色结果显示,VTA可见部分MCHR和荧光金双重标记神经元;MCH可改变大鼠VTA内DA神经元放电活动,且对焦虑模型大鼠的影响更显著(P<0.05);高架十字迷宫实验中,与对照组相比,焦虑+SNAP94847组进入闭合臂次数和时间百分比显著增加(P<0.05);焦虑模型大鼠炎症标志物过氧化氢酶(CAT)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量显著降低(P<0.05),髓过氧化物酶(MPO)活性及丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)含量显著升高(P<0.05),VTA微量注射SNAP94847可显著减轻焦虑模型大鼠胃黏膜炎症损伤(P<0.05);与假损毁+SNAP94847组相比,电损毁+SNAP94847组焦虑模型大鼠CAT活性和GSH-Px含量显著降低(P<0.05),而MPO活性及MDA、TNF-α和IL-6含量显著升高(P<0.05)。结论:VTA-DMV的MCHR信号通路可能参与应激所致焦虑大鼠胃黏膜炎症损伤及焦虑样行为的调控。

中枢Nesfatin-1对脂肪组织UCP-1表达影响及机制

目的了解中枢Nesfatin-1能否通过交感神经促进外周褐色脂肪组织及白色脂肪组织中解偶联蛋白-1(UCP-1)表达,并探讨其中枢分子机制。方法将昆明小鼠随机分为生理盐水组(n=6)、Nesfatin-1组(n=7)、生理盐水+阻断剂组(n=6)和Nesfatin-1+阻断剂组(n=7)。4组小鼠均给予下丘脑腹内侧核(VMH)埋管,恢复3d后,分别腹腔注射生理盐水、生理盐水、β3受体阻断剂、β3受体阻断剂0.2mL,并于30min后VMH微量注射生理盐水、Nesfatin-1(1.5×10^(-8) mol/L)、生理盐水、Nesfatin-1(1.5×10^(-8) mol/L)0.2μL,连续3d。应用Western Blot和RT-PCR方法,检测各组小鼠附睾白色脂肪组织及肩胛部褐色脂肪组织中UCP-1蛋白和mRNA表达水平,以及下丘脑磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的表达。结果Nesfatin-1组脂肪组织中UCP-1蛋白、mRNA表达水平及下丘脑磷酸化AMPK蛋白水平较生理盐水组明显升高,Nesfatin-1+阻断剂组较Nesfatin-1组明显降低,差异有显著性(F=3.461~8.808,P<0.01)。结论 VMH核团微量注射Nesfatin-1可以通过下丘脑-交感神经通路促进外周褐色脂肪组织及白色脂肪组织中UCP-1表达。

淫羊藿苷对原代星形胶质细胞炎症反应的抑制作用

目的探讨淫羊藿苷(ICA)对脂多糖(LPS)诱导的原代星形胶质细胞炎症反应的抑制作用。方法将细胞种于6孔板,分为对照组、LPS组和ICA给药组。对照组先用1μL二甲基亚矾(DMSO)处理细胞1 h,再加入1μL生理盐水;LPS组先用1μL DMSO预处理细胞1 h,再加入LPS(终浓度1 mg/L)处理细胞6 h;ICA给药组先用不同浓度的ICA(0.1、1.0、10.0、20.0μmol/L)预处理细胞1 h,然后与LPS共同孵育细胞6 h。采用荧光定量PCR(RT-PCR)法分别检测各组细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)mRNA的表达。应用RT-PCR法检测ICA给药组(10.0μmol/L)肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)mRNA的表达,并与对照组、LPS组检测结果比较。结果与对照组相比较,LPS组的GFAP mRNA表达明显升高(F=10.63,q=9.775,P<0.01);1.0、10.0、20.0μmol/L的ICA均能够明显抑制LPS诱导的GFAP mRNA的表达(q=4.496~6.111,P<0.05),以10.0μmol/L ICA的抑制效果最明显(q=6.111,P<0.01)。与对照组相比较,LPS组的TNF-α和IL-1βmRNA表达明显升高(F=243.50、378.60,q=30.040、36.000,P<0.01),10.0μmol/L ICA组TNF-α和IL-1βmRNA表达较LPS组显著降低(q=7.689、5.199,P<0.05)。结论ICA能够抑制LPS诱导的原代星形胶质细胞的活化和炎症反应。