开展组织胚胎学创新性实验的效果与体会

目的提高教学效果,激发学生主动学习热情,培养学生的创新意识和创新能力。方法根据《组织学与胚胎学》本科教学的内容,结合临床过敏性皮肤病,设计肥大细胞与过敏反应实验。随机选择部分同学参加实验,总结分析实验方法和结果,收集对创新实验反馈意见,评价创新实验的效果。结果学生通过参与肥大细胞的分离提取、致敏肥大细胞、甲苯胺蓝染色以及抗过敏药物对肥大细胞脱颗粒影响的全部实验过程,对教材中相关的内容有了更深刻的理解和记忆,对教材中涉及的研究方法有了感性认识。创新性实验教学激发了学生的学习主动性,开阔了学生的视野,培养了学生的动手能力,同时促进了教师教学水平的提高。结论创新性实验教学对激发学生的学习热情、培养学生的创新性思维,促进教学相长具有很好的推动作用。

胚胎干细胞移植对急性损伤肝脏的作用

目的探索胚胎干细胞移植在急性损伤肝脏中的存活和分化情况。方法用四氯化碳(CCl4)制备小鼠急性肝损伤模型,将BrdU标记的来源于小鼠原始生殖细胞的胚胎干细胞经静脉移植于模型动物体内,分别于移植后2周、4周取出肝脏,用免疫组织化学、免疫荧光双重染色和PAS染色方法检测移植细胞在受体小鼠肝内的分布、存活、白蛋白的表达和糖原代谢。结果急性损伤小鼠肝脏可见大量肝细胞空泡样变性,有严重出血现象;2周时损伤肝内可见炎性细胞浸润和未吸收的出血区;4周时仍见少量炎性细胞浸润。干细胞移植2周,肝小叶内可见散在分布的BrdU和ALB双阳性着色细胞,PAS染色呈阳性反应;部分小细胞呈BrdU单阳性着色;损伤移植组的肝小叶结构基本恢复。移植4周,损伤肝小叶结构正常,小的BrdU阳性细胞数量增多。结论原始生殖细胞可以在急性损伤肝脏中存活,并分化为肝细胞和肝小叶内的其他细胞,并明显改善损伤肝的组织结构。

大剂量雌二醇对大鼠血压及血浆和组织中生长抑素含量的影响

本实验观察大剂量雌二醇对大鼠血压的影响，用放射免疫方法检测生长抑素含量变化。结果表明：腹腔大剂量注射雌二醇显著提高大鼠血压。在雌二醇诱发高血压的过程中，下丘脑，延髓，脑垂体、肾上腺中生长抑素的含量明显减少，血浆生长抑素的含量显著提高（Ｐ＜０．０５～ｐ＜０．０１）。提示生长抑素水平的变化参与雌二醇诱发高血压过程。

溴氰菊酯致大鼠慢性中毒的肝组织形态学观察

目的探讨溴氰菊酯对大鼠肝组织结构的慢性损伤作用。方法选取大鼠32只,随机分为空白对照组（Ⅰ组）、橄榄油对照组（Ⅱ组）、溴氰菊酯1.56 mg/kg组（Ⅲ组）、溴氰菊酯6.25 mg/kg组（Ⅳ组）,每组8只。Ⅲ、Ⅳ组连续6个月经口灌胃染毒,Ⅱ组只给予相当剂量的橄榄油,观察大鼠染毒期间行为学变化,测定肝脏器系数,肝组织切片经苏木精-伊红染色和PAS染色,观察肝细胞形态学变化和肝细胞糖原含量的变化。结果染毒组大鼠出现流涎、大汗、立毛等中毒症状。苏木精-伊红染色显示Ⅲ、Ⅳ组肝细胞胞浆疏松,内可见脂滴,肝血窦淤血。染毒组大鼠肝细胞的糖原含量有不同程度降低,Ⅳ组与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组相比,Ⅲ组和Ⅰ组相比差异有统计学意义（F=9.015,q=3.675~10.058,P〈0.05）;但Ⅲ组与Ⅱ组比较,差异无统计学意义（q=0.672,P〉0.05）。Ⅲ、Ⅳ组肝脏器系数与其他各组比较,差异均有统计学意义（F=10.737,q=3.945~9.968,P〈0.05）。结论长期低剂量摄入溴氰菊酯可造成大鼠肝组织的慢性损伤,并具有剂量-效应关系。

溴氰菊酯对小鼠肝肾组织结构损害的形态学观察

目的研究溴氰菊酯(DM)对小鼠肝、肾组织形态学的影响及其机制。方法将30只小鼠随机分为对照组、DM 3.125mg/kg组、DM 6.250mg/kg组,每组10只,分别腹腔注射橄榄油、相应浓度的DM溶液3～5d,苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠注射后第3、5天肝、肾组织的形态学变化,酶组织化学法检测琥珀酸脱氢酶(SDH)、单胺氧化酶(MAO)和碱性磷酸酶(ALP)在肝、肾组织中的表达情况。结果 HE染色可见注射后第3、5天DM染毒组小鼠肝脏肝索排列紊乱,肝血窦及中央静脉内淤血严重,炎细胞成团聚集,肾小管水肿,肾小球毛细血管扩张淤血。酶组化染色显示,注射后第3、5天DM各组肝、肾组织内SDH和MAO阳性表达较对照组增强;ALP阳性表达在肾脏较对照组增强,但在肝脏较对照组减弱,差异均有显著性(F=4.907～47.303,q=3.937～13.964,P<0.05)。结论低浓度DM通过改变各种酶活性影响肝、肾的代谢功能而导致肝、肾的损伤。

CUGBP1在人肺腺癌组织和细胞中的表达

目的比较分析CUGBP1基因在人肺腺癌组织和细胞内表达的特点,及其CUGBP1表达水平与癌细胞增殖活性的关系。方法以人肺腺癌组织标本和人肺腺癌细胞株A549为研究对象,应用免疫组化、Western Blot、RT-PCR方法检测人肺腺癌组织、细胞内CUGBP1蛋白和基因的表达,并分析其特点。结果 CUGBP1基因主要在人肺腺癌组织的细胞核呈强阳性表达,在所有类型腺癌组织中80%以上的癌巢细胞CUGBP1基因呈阳性表达,阳性表达率明显高于正常对照组,差异有显著性(t′=100.01,P<0.001)。95%以上的A549细胞CUGBP1表达呈阳性,且CUGBP1表达量明显低于LPS组,差异有显著性(t=407.53,P<0.001)。结论 CUGBP1基因在人肺腺癌癌巢细胞和A549细胞的胞核内高表达;炎性刺激可增强人肺腺癌细胞株A549的增殖和CUGBP1基因表达;CUGBP1基因可能成为人肺腺癌的早期诊断和增殖状态判断的新指标。

应用非小细胞肺癌组织芯片研究新辅助化疗对P-gp、LRP、MRP和GST-π定量表达影响的临床意义

目的探讨新辅助化疗(NACT)对非小细胞肺癌(NSCLC)P-糖蛋白(P-gp)、肺耐药相关蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)和谷胱甘肽转移酶S(GST-π)定量表达的影响。方法应用组织芯片、免疫组化及图像定量分析技术,对92例NSCLC标本(其中52例未经化疗的直接手术标本,20例同时具备化疗前活检标本和化疗后手术标本)中P-gp、LRP、MRP和GST-π的表达进行了检测。结果P-gp、LRP、MRP和GST-π在未经化疗的标本中,阳性表达率分别为68.06%,72.22%,81.94%,83.33%;P-gp、LRP和GST-π在腺癌中的表达强度均高于鳞癌(P<0.05,P<0.001,P<0.001),MRP的表达在腺、鳞癌间差异无显著性(P>0.05)。新辅助化疗后,P-gp、GST-π平均光密度与积分光密度在不同临床分期、组织学类型、分化程度、肿瘤大小、年龄以及淋巴结有无转移组中,均高于化疗前(P<0.05或P<0.001);而LRP、MRP平均光密度与积分光密度在上述各组中,在新辅助化疗前、后,差异均无显著性(P>0.05)。结论肺腺癌的原发耐药性可能强于鳞癌;新辅助化疗可能通过诱导耐药蛋白的表达增加肺癌组织的获得性耐药;新辅助化疗的采用与否应视不同病人的具体情况而定,Ⅰ～Ⅱ期NSCLC采用新辅助化疗应慎重,以免影响术后化疗效果;检测NSCLC新辅助化疗前、后耐药蛋白的定量表达,对术前及术后个性化化疗方案的选择和实施具有重要的指导意义。

小鼠胚胎干细胞向肝细胞定向分化过程中NF-κB表达

目的了解小鼠胚胎肝脏发育的过程和体外干细胞向肝细胞定向分化与NF-κB表达的关系,探讨干细胞向肝细胞定向分化的分子机制。方法分离培养扩增小鼠原始生殖嵴细胞,向培养液中分别加入20μg/L的β-神经细胞生长因子（β-NGF）、0.5g/L新生鼠肝脏提取液和胎肝细胞上清液,体外诱导小鼠生殖嵴来源的胚胎干细胞（PGCs）向肝样细胞定向分化。观察细胞的形态学变化;免疫细胞荧光法检测肝样分化细胞内α1-抗胰蛋白酶（AAT）及NF-κB的表达,Real-Time PCR方法检测诱导分化过程中NF-κB mRNA的表达。免疫组化法检测胚胎发育11.5、14.5、18.5d的肝脏组织中NF-κB的表达。结果 PGCs培养液中加入β-NGF、新生鼠肝脏提取液和胎肝细胞上清液可见部分细胞变为圆形或卵圆形;诱导12d后,圆形或卵圆形细胞呈ATT阳性表达;在诱导分化过程中NF-κB的表达逐渐增强,伴随肝细胞的成熟而呈阳性表达并由胞质转入胞核。Real-Time PCR方法检测结果显示,在诱导分化过程中NF-κB的表达升高（t=50.229～75.344,P〈0.01）。在胎肝发育过程中随肝原细胞向肝成熟细胞转化,肝细胞胞质中NF-κB的表达逐渐增强,并向细胞核内转移。结论 NF-κB在PGCs体外向肝细胞分化和体内肝发生过程中变化一致。

被动吸烟致金黄地鼠神经管上皮细胞的过度凋亡

目的探讨被动吸烟对神经管的致畸作用与细胞凋亡的关系。方法采用核固红结晶紫染色方法,原位末端标记法及形态计量方法定量分析了被动吸烟致金黄地鼠神经管上皮细胞凋亡的变化。结果被动吸烟引起神经管上皮细胞的过度凋亡,实验各组均较对照组神经管上皮细胞凋亡显著增加,而细胞分裂相减少孕9d时,神经管上皮细胞的凋亡细胞最多,凋亡指数为9.82±3.67,与对照组相比有统计学意义(P<0.01);孕10d时细胞凋亡逐渐减少;孕11d后,细胞凋亡降至最低,凋亡指数为5.21±2.82,与对照组相比有统计学意义(P<0.05)。结论被动吸烟可以促使神经管上皮细胞的过度凋亡,可能是导致神经管畸形发生的重要原因之一。

中国沿海常见棘毒鱼类的毒性研究──日本鬼鮋背鳍棘中的毒腺结构

于1996年6月—1997年6月，在山东青岛、日照沿海采集日本鬼，采用光学显微镜和电子显微镜技术观察其背鳍棘中毒腺的形态结构，研究其致毒机理。结果表明，日本鬼背鳍的毒腺呈梭形，位于背鳍棘背外侧的两纵沟内，有结缔组织包绕。在毒腺内发现两种类型的细胞：Ⅰ型细胞的胞质为均质状，单核；Ⅱ型细胞胞质内充满颗粒，未见细胞核。两种毒腺细胞均呈多边棱柱体，呈辐射状排列。Ⅰ型细胞胞质电子密度中等，有均匀分布的细小颗粒，细胞内仅见少而散在分布的线粒体和线头状结构；Ⅱ型细胞颗粒为许多囊泡及电子密度不同的颗粒状物质。腺体内下方的组织内有一种小细胞，其胞质内含有溶酶体样结构，其内涵物与Ⅰ型细胞胞质类似。提示该毒腺的细胞不同于哺乳动物的分泌细胞。

miR-126在ApoE-/-小鼠颈动脉粥样硬化斑块中的表达

目的观察微小RNA(miR)-126及靶基因血管细胞粘附分子1(VCAM-1)在载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠颈动脉粥样硬化斑块中的表达,探讨miR-126与动脉粥样硬化斑块形成的关系。方法取8周龄Apo E-/-小鼠24只,随机分为对照组(假手术+普通饮食)、模型组(颈动脉套管术+高脂饮食)各12只。术后第8周末检测血浆中总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的水平,HE染色观察颈总动脉斑块面积/血管面积,荧光定量PCR(RT-PCR)检测斑块内miR-126、VCAM-1 mRNA水平的表达,Western blot检测VCAM-1蛋白水平的表达。结果与对照组相比,模型组血脂水平明显升高(P<0.05);模型组的颈动脉粥样硬化斑块面积/血管面积明显大于对照组(P<0.01);miR-126表达水平在模型组明显低于对照组(P<0.01);VCAM-1的mRNA及蛋白的表达在模型组明显高于对照组(P<0.01)。结论 miR-126在颈动脉粥样硬化斑块中的表达下调可能在斑块形成过程中发挥重要作用。

扇贝多肽对小鼠免疫功能调节的研究

目的探讨扇贝多肽(PCF)对免疫低下小鼠免疫功能的调节作用。方法应用地塞米松(DEX)建立小鼠免疫抑制模型,通过形态学、细胞功能学和流式细胞分析等方法研究PCF腹腔注射对机体免疫功能的影响。结果:PCF腹腔注射能够明显改善DEX所致的免疫低下反应,脾脏白髓组织明显增大,外周血T淋巴细胞数量增多和脾淋巴细胞对ConA诱导的转化能力明显提高。结论PCF腹腔注射对小鼠免疫功能具有一定的正向调节作用,可能主要是通过影响外周成熟的免疫细胞而发挥作用。

盖玻片在培养细胞免疫电子显微术中的应用(英文)

体外培养的细胞不仅可用于研究其形态和机能的变化,而且可进行不同药物学作用时细胞内抗原成分的定位检测及细胞特征的研究。通常盖玻片放入培养皿中作为培养细胞的支持物,细胞在盖玻片上长成单层,可立即固定、染色,进行光学显微镜的观察。在实验中我们发现,加盖玻片的单层细胞培养法也可以直接应用于免疫电镜的包埋前和包埋后染色方法。该技术具有以下优点。(1)使用盖玻片可以避免免疫电镜标本制作过程中,为了搜集细胞而进行的数次刮取、离心。免疫反应及后固定、脱水、浸透、包埋均在盖玻片上进行,使培养细胞的损伤降低至最小程度。(2)如果在直径3.5cm的培养皿中进行免疫过氧化物酶反应大约需要至少200μl抗体,而使用盖玻片法,每张盖玻片则仅需要10μl抗体,大大节约了免疫反应的抗体量,既简便又经济。(3)盖玻片法使包埋后培养细胞呈单层位于包埋块的表面,在每一张超薄切片中都能观察到很多细胞。

中国沿海常见棘毒鱼类的毒性研究——光魟螫伤的调查研究

被棘毒鱼螫伤是渔业工作者中常见的职业病 ,本研究对中国沿海近 4 0个渔港 ,1 0万余名渔民进行了调查研究 ,发现鱼工类是我国沿海毒性最强的棘毒鱼 ,发病率为 3%～ 9%。并且对光鱼工的毒腺结构进行了初步观察。用毒棘直接刺伤及粗提液注射大鼠的方法 ,对其螫伤表现及演变过程进行了初步探讨。并且提出预防及治疗的方法。

腹腔镜与开腹直肠癌术后应激反应期ghrelin的动态变化及意义

目的 ghrelin作为一种新发现的胃肠激素在炎症和应激反应中的潜在作用尚未明确。研究旨在了解不同手术操作所致围手术期外周循环ghrelin的特征性变化,以及与炎性细胞因子相关性及与应激中的调节作用。方法前瞻性随机对照试验,选取44例直肠癌患者随机分配至开腹手术组(对照组=22例)和腹腔镜手术组(实验组=22例),记录手术时间、术中失血量、住院天数和术后肠功能恢复时间,术前及手术开始后6、12、24、36、48、72 h测定血清中ghrelin、C-反应蛋白(C-reactive pro-tein,CRP)、皮质醇、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、IL-6、IL-8、α-1抗胰蛋白酶(alphao-antitrypsin,AAT)水平。结果 2组患者手术学指标比较均有统计学意义(P<0.05)。术后24 h 2组血清ghrelin水平均显著升高,对照组显著高于术前(P<0.01)和试验组峰值水平(P<0.05),2组ghrelin于术后36～48 h降至术前水平。除皮质醇外,2组其他试验参数术后峰值比较均有统计学意义(P<0.05)。术后24h ghrelin与TNF-α相关系数最高(r=0.64,P<0.05),与IL-6也存在相关性(r=0.56,P<0.05)。结论应激反应会导致血浆中ghrelin水平升高,其反应程度依赖于炎性反应的刺激强度。

骨髓间充质干细胞分泌细胞因子与腹腔肥大细胞膜的稳定性

背景:研究表明骨髓间充质干细胞分泌的细胞因子对特异性和非特异性免疫细胞具有免疫调节作用,所以有必要深入研究其对肥大细胞的作用。目的:探讨骨髓间充质干细胞分泌因子对特异性和非特异性诱发肥大细胞脱颗粒、释放炎性递质的影响。方法:采用全骨髓贴壁法分离和纯化大鼠骨髓间充质干细胞,收集培养第3代的骨髓间充质干细胞上清液获取干细胞分泌因子。分离培养大鼠腹腔肥大细胞,分别以大鼠抗卵蛋白血清特异性被动致敏腹腔肥大细胞和用Compound48/80非特异性致敏肥大细胞。结果与结论:干细胞因子、酮替芬均能抑制特异性和非特异性诱发肥大细胞脱颗粒和释放类胰蛋白酶,与模型对照组相比差异有显著性意义(P<0.05),但干细胞因子抑制特异性和非特异性诱发肥大细胞脱颗粒和释放类胰蛋白酶的效果均不如酮替芬组(P<0.05)。结果表明干细胞分泌的细胞因子具有稳定肥大细胞膜,减轻其脱颗粒、释放炎症递质的作用。

消瘿强肌汤对甲状腺机能亢进性肌病骨骼肌线粒体的影响

目的观察消瘿强肌汤对甲状腺机能亢进性肌病大鼠骨骼肌线粒体的影响,探讨消瘿强肌汤治疗甲亢肌病的机理。方法健康雌性Wistar大鼠随机分为4组:甲亢肌病模型组每日腹腔注射甲状腺激素钠盐250μg/100g造模,中药组在造模后灌服消瘿强肌汤30d,生理盐水对照组造模后灌服生理盐水30d,正常对照组每天腹腔注射生理盐水。各组取骨骼肌观察琥珀酸脱氢酶活性和含量的变化,透射电镜观察骨骼肌及线粒体的形态变化。结果甲亢肌病模型组骨骼肌琥珀酸脱氢酶呈色降低,含量下降。超微结构显示线粒体嵴断裂,甚至融合消失。中药组可见酶活性和含量恢复,线粒体嵴排列规则,空泡消失。结论消瘿强肌汤可通过恢复线粒体酶活性和线粒体结构来改善甲亢肌病的骨骼肌功能。

苦参碱对小鼠成纤维细胞L929的作用及其机制

目的探讨苦参碱对小鼠成纤维细胞L929的作用及其机制。方法分别应用0.25、0.50、0.75、1.00 g/L苦参碱处理小鼠成纤维细胞L929为24、487、2 h,采用MTT法检测成纤维细胞L929生长抑制率;West-ern blot分析法检测小鼠成纤维细胞L929中磷酸化的eIF4E、eIF4E-BP1和Caspase-3表达。结果在同一作用时间,随着苦参碱浓度的增加,小鼠成纤维细胞L929生长抑制率增加,差异有显著性（F=31.41~41.55,P〈0.01）;同一浓度的苦参碱随着作用时间延长,细胞生长抑制率无明显变化。苦参碱作用24 h后,小鼠成纤维细胞L929磷酸化的eIF4E和eIF4E-BP1表达降低,Caspase-3表达增加,差异有显著性（t=9.79~13.32,P〈0.01）。结论苦参碱能诱导小鼠成纤维细胞L929的凋亡,其作用是通过eIF4E、eIF4E-BP1和Caspase-3途径实现的。

被动吸烟对金黄地鼠致畸作用的研究

目的 采用被动吸烟方法研究香烟烟雾对金黄地鼠胚胎的致畸作用。②方法 应用被动吸烟笼具将不同妊娠时间的金黄地鼠分组进行被动吸烟 ,而后计数每组的胚胎植入数、活胎、吸收胎、死胎、畸胎及畸形数 ,并进行统计学处理。③结果 孕 1～ 6d ,7d ,9d以及 10～ 14d吸收胎加死胎的百分数比对照组略有增加 ,畸胎和畸形数无增加。而孕 8d吸收胎加死胎百分数、畸胎率均比对照组有显著增加 (χ2 =17.2 ,5 1.4,P <0 .0 0 1)。④结论 吸烟对胚胎有致畸作用。

酒精对心肌细胞超微结构及细胞色素C氧化酶活性的影响

目的:通过给小鼠腹腔内注射不同浓度酒精,建立大量饮酒的动物模型,探讨酒精对心脏毒性作用的机理。方法:应用电镜技术观察心肌细胞的超微结构变化,以及酶细胞化学染色方法观察细胞色素C氧化酶(cytochromCoxidase,Cox)活性的变化。结果:透射电镜下,实验各组心肌细胞肌原纤维排列紊乱,出现空泡,肌丝溶解,线粒体肿胀,嵴断裂甚至消失,细胞核形状不规则,部分染色质浓缩,边集于核膜下,呈斑块状;定位于线粒体内膜和嵴上的Cox活性减弱,电子密度降低。结论:酒精可以使心肌细胞超微结构发生异常改变,并且使线粒体上Cox活性减弱,从而导致心肌细胞结构和功能的改变。