青岛地区人群高尿酸血症与代谢综合征各组分间的关系

目的探讨青岛地区人群高尿酸血症(HUA)与代谢综合征(MS)各组分间的关系。方法选择青岛某大学2 249例MS患者,详细询问其病史、个人史,测量身高、体质量、血压、空腹血糖(FPG)、血脂、血尿酸(UA)。分析HUA与MS各主要组分间的关系。结果 HUA患者MS各主要组分发病率为肥胖68.1%、高血压54.9%、糖尿病19.9%、高甘油三酯血症52.2%;体质量指数、血压及TG与血UA水平显著相关(P<0.01或<0.05)。结论 HUA与MS各组分间关系密切,积极控制HUA,有利于MS其他组分的控制及心脑血管疾病的早期预防。

益肾泄浊方对痛风性肾病并发慢性肾衰竭大鼠肾功能及病理影响的实验研究

目的:观察益肾泄浊方对痛风性肾病并发慢性肾衰竭大鼠模型血清尿素氮、肌酐、尿酸的影响及肾脏病理组织学变化的影响。方法:将大鼠随机分组处理:模型组予高酵母饲料喂养及腺嘌呤灌胃,建立痛风性肾病并发慢性肾衰竭大鼠模型;同时分别以别嘌醇、益肾泄浊方干预;正常对照组给予普通大鼠颗粒饲料喂养,生理盐水灌胃。监测大鼠血清尿酸、肌酐及尿素氮水平的变化,同时观察大鼠肾脏病理改变。结果:与正常对照组比,第5周末模型组大鼠尿素氮、血肌酐、血尿酸增高,P<0.05,肾脏病理为痛风性肾病并发慢性肾衰竭大鼠模型改变;与模型组比较,别嘌醇组血尿酸明显下降,P<0.05;益肾泄浊方大剂量组血肌酐下降明显,P<0.05;益肾泄浊方大剂量组病理修复最好,别嘌醇组次之。结论:益肾泄浊方可以保护痛风性肾病并发慢性肾衰竭大鼠肾功能、修复肾脏病理。

建立痛风性肾病并发慢性肾功能衰竭动物模型方法的探讨

目的探讨痛风性肾病并发慢性肾功能衰竭(简称慢肾衰)动物模型的建立方法。方法以10%高酵母饲料喂养6～8周龄雄性Wistar大鼠,分别以100、150、200、250、300mg/(kg.d)腺嘌呤灌胃,动态监测大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)及血尿酸(UA)水平的变化,同时观察大鼠肾脏病理改变。结果与正常对照组比较,以100mg/(kg.d)腺嘌呤灌胃7天,大鼠血清BUN、Cr及血UA均明显升高(P<0.05),同时肾脏病理组织学出现痛风性肾病的病理改变,随着造模时间的延长,上述生化指标及肾脏病理组织学变化更明显,在第26天(约4周)血Cr达到慢肾衰水平,而41天(约第6周)血Cr明显超过慢肾衰水平。血UA于造模后第7天达到较高水平,较长时间内维持在高水平上,血UA在第41～48天之间迅速下降,肾脏病理组织学淋巴细胞浸润,纤维组织增生加重,造模48天时在上述病变基础上纤维组织增生明显,间质纤维化。而其他剂量腺嘌呤灌胃至14天,与正常对照组比较,血清BUN、Cr及血UA均明显升高(P<0.05),达到肾功能衰竭水平;恢复正常饲料喂养,17天后血清BUN、Cr及血UA水平明显下降,至35天时,上述指标恢复接近正常水平。结论用10%高酵母饲料喂养雄性Wistar大鼠,同时予以100mg/(kg.d)体重腺嘌呤灌胃5周,可建立理想的痛风性肾病并发慢肾衰的实验动物模型。

马兜铃酸对肾小管上皮细胞氧化应激效应的作用

目的探讨马兜铃酸(AA)对人肾小管上皮细胞(HK-2)氧化应激的作用。方法体外培养HK-2细胞,AA组在培养体系中加入AA 20 mg/m l刺激培养48 h;另设对照组。采用MTT法观察HK-2细胞活性,透射电镜观察细胞的超微结构,流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果与对照组比较,AA组HK-2细胞活性显著抑制,细胞凋亡比例明显增加,SOD、GSH-PX活力明显下降,MDA含量明显增加(P均<0.05)。结论 AA诱导HK-2细胞凋亡的机制与其导致的氧化应激损伤有关,氧化应激作用可能为马兜铃酸肾病的发病机制之一。

红花黄色素对马兜铃酸致人肾小管上皮细胞损害的作用

目的:探讨红花黄色素对马兜铃酸(aristolochic acid,AA)导致人肾小管上皮细胞系(HK-2)损害的保护作用。方法:以90%DMEM培养液加10%小牛血清培养HK-2细胞,加入不同浓度的红花黄色素和AA(终浓度为20μg/m)培养48 h。实验分为4组:(1)对照组:培养液不加AA;(2)AA组:在培养液中加入AA;(3)红花黄色素低浓度治疗组:在培养液中加入AA和红花黄色素(终浓度为50 mg/L);(4)红花黄色素高浓度治疗组:在培养液中加入AA和红花黄色素(终浓度为100 mg/L)。采用MTT法观察HK-2细胞活性;透射电镜观察细胞的超微结构;应用流式细胞术检测细胞凋亡百分率;采用实时定量荧光PCR技术检测凋亡蛋白Caspase-3 mRNA的表达情况。结果:AA组HK-2细胞的活性显著抑制;治疗组细胞活性明显增加,而且随着红花黄色素浓度的增加其作用愈趋明显。与对照组比较,AA组凋亡细胞的比例明显增加(P<0.05),红花黄色素治疗组凋亡细胞的比例也增加,但比AA组细胞凋亡的比例明显减少。AA组Caspase-3 mRNA的表达较对照组明显增高;治疗组Caspase-3 mRNA的表达较AA组降低。结论:红花黄色素可明显提高HK-2细胞抵抗AA导致的细胞损伤,保护HK-2细胞。

肾康注射液对马兜铃酸致肾小管上皮细胞损害的研究

目的:探讨肾康注射液(SKI)对马兜铃酸(AA)导致肾小管上皮细胞损伤的影响。方法:以90%DMEM培养液加10%胎牛血清培养人肾小管上皮细胞系(HK-2),加入不同浓度的SKI(终浓度分别为4、6、8mg/mL)和AA(终浓度为10、20、40μg/mL)培养48h。采用MTT法观察HK-2细胞活性;根据MTT法检测细胞活性的结果,选择SKI最佳干预浓度8 mg/mL和AA致细胞明显凋亡浓度20μg/mL,将实验分为3组,①对照组:培养液不加马兜铃酸;②AA干预组:在培养液中加入AA(终浓度为20μg/mL);(3)SKI治疗组:在培养液中加入AA(终浓度为20μg/mL)和SKI(终浓度为8 mg/mL)。用透射电镜观察3组细胞的超微结构;应用流式细胞术检测细胞凋亡百分率;分别采用实时定量荧光PCR及Western-blot技术检测凋亡蛋白Caspase-3 mRNA及蛋白的表达情况。结果:与对照组比较,AA干预组细胞结构发生改变,治疗组大部分细胞结构基本正常,部分细胞结构改变明显。AA浓度超过10μg/mL时,HK-2细胞的活性显著抑制。分别以不同浓度4,6,8mg/mL的SKI和AA(20μg/mL)处理HK-2细胞后,则细胞活性明显增加,而且随着SKI浓度的增加其作用愈趋明显(P<0.05)。与对照组比较,AA组凋亡细胞的比例明显增加(P<0.05),SKI治疗组凋亡细胞的比例也增加,但比AA组细胞凋亡的比例明显减少。AA组Caspase-3 mRNA及蛋白的表达较对照组明显增高;治疗组Caspase-3 mRNA及蛋白的表达较AA组降低。结论:肾康注射液通过降低凋亡蛋白Caspase-3 mRNA及蛋白的表达抑制HK-2细胞的凋亡,明显提高HK-2细胞抵抗AA致细胞损伤的能力,起到保护HK-2细胞的作用。该途径可能为肾康注射液抑制HK-2细胞凋亡的机制之一。

罗格列酮对尿酸代谢的影响及机制探讨

目的 观察高水平胰岛素是否导致血尿酸浓度的升高,胰岛素增敏剂罗格列酮能否改善高尿酸血症,并进行机制探讨.方法 将自发2型糖尿病伴代谢综合征的OLETF大鼠及其同系的正常对照LETO大鼠各60只随机分为对照组、实验组和干预组,分别给予正常饮食、高嘌呤饮食加腺嘌呤灌胃及罗格列酮干预3周,测量各组大鼠体重、血尿酸、胰岛素、甘油三酯、总胆固醇等指标,检测肾皮质尿酸转运子（UAT）和尿酸盐转运子1（URAT1）mRNA表达.以不同浓度胰岛素孵育HK-2细胞24 h,检测其UAT mRNA表达.结果 （1）在正常饮食状态下,OLETF大鼠血胰岛素水平明显高于LETO大鼠（P〈0.05）,尿酸水平差异无统计学意义.（2）高嘌呤饮食喂养和腺嘌呤灌胃3周后,OLETF大鼠血胰岛素水平明显高于LETO大鼠[（61.83±12.13对36.73±12.73）μIU/ml,P〈0.05],高尿酸血症的发病率（76.92%对36.13%,P〈0.01）和血尿酸[（327.75±45.73对264.40±36.32）μmol/L,P〈0.01]水平明显高于LETO大鼠.（3）与实验组OLETF大鼠相比,罗格列酮干预3周后胰岛素水平明显下降[（41.3±10.2对61.8±12.1）μIU/ml,P〈0.05],血尿酸水平明显降低[（198.0±45.4对236.9±29.30）μmol/L,P〈0.05],尿尿酸排泄量明显增加[（5 644±371对4 692±278）μmol/L,P〈0.05].（4）实验组OLETF大鼠血胰岛素水平与对照组OLETF大鼠无明显差异,肾皮质URAT1和UAT mRNA表达差异亦无统计学意义,而罗格列酮干预后URAT1 mRNA表达明显降低,UAT mRNA表达明显增加.（5）随着培养液中胰岛素浓度的增加,HK-2细胞UATmRNA表达量逐渐减少.结论 胰岛素增敏剂罗格列酮可通过调节UAT和URAT1 mRNA的表达,降低高胰岛素血症诱发的高尿酸血症.

伴甲状腺异位的先天性甲状腺功能减低症患儿NKX2.5基因突变研究

目的 研究伴异位的甲状腺发育不全（TD）患儿中NKX2.5基因的突变情况和遗传特征,完善NKX2.5基因突变库,并为基因诊断与产前诊断奠定应用基础.方法 通过山东省新生儿筛查系统选取山东省90例已排除先天性疾病（特别是先天性心脏病）的伴异位TD病例,提取外周静脉血基因组DNA,采用3对序列特异性引物对NKX2.5基因的全部2个外显子进行PCR扩增,测序后进行突变筛查.运用独立的2组二分类资料比较方法对扩增区域内所发现SNP位点的基因频率进行x2检验.结果 在伴异位的TD病例中未发现NKX2.5基因外显子区及外显子与内含子接头区存在突变,但在第1外显子区发现1个SNP位点（rs2277923,c.63T＞C）为同义突变（Glu→Glu）,经统计,90例伴异位的TD病例中SNPrs2277923的等位基因频率为T=0.416 7,与MAF最小等位基因频率比较,差异无统计学意义（x2=3.437 6,P＞0.05）,提示该SNP位点与TD的发生无相关性.结论 该研究是迄今为止国内关于伴异位的TD病例的最大规模的致病基因的筛查,未见突变存在,证实伴异位的TD病例中NKX2.5基因突变率极低,不是山东地区CH病例的致病基因.

罗格列酮对高尿酸性肾病大鼠肾形态和肾功能的影响

随着生活水平的提高,高尿酸血症的发病率明显增加,与之密切相关的痛风性肾病的发病率也明显增加.降低血尿酸水平可明显缓解肾脏疾病的发展和转归.罗格列酮是一种过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）激动剂,不但降低血糖水平,而且可降低代谢综合征患者血尿酸水平.25周龄OLETF大鼠是目前国际公认的自发2型糖尿病伴代谢综合征动物模型.我们选择25周龄OLETF大鼠为实验对象,观察罗格列酮干预能否改善痛风性肾病大鼠肾形态和功能,并对其机制进行初步探讨.

SLC22A12基因第8外显子和第8内含子多态与中国汉族人原发性高尿酸血症关联研究

目的 研究原发性高尿酸血症患者SLC22AI2基因第8内含子和第8外显子单核苷酸多态（single nucleotide polymorphism,SNP）位点与原发性高尿酸血症遗传易感性的关系.方法 选择山东沿海地区原发性高尿酸血症患者215例,正常对照人群323名.提取基因组DNA,PCR扩增SLC22A12基因第8内含子和第8外显子,对PCR扩增产物进行测序.结果 序列分析发现：（1）SLC22AI2基因第8外显子存在T1309C单核苷酸多态,第8内含子存在-103A＞G单核苷酸多态,这2个多态位点完全连锁.（2）高尿酸血症组-103A＞G G等位基因频率和T1309C C等位基因频率明显高于正常对照组（均为51.9%vs.42.4%,P＜0.01）;（3）高尿酸血症组GG＋GA基因型频率和CC＋CT基因型频率显著高于正常对照组（均为80.0%vs.69.0%,P＜0.01）.（4）-103 A＞G和T1309C基因多态中,含有等位基因G的基因型GG＋GA及含有等位基因C的基因型CC＋CT均使高尿酸血症的发病危险性上升了1.79倍（OR=1.79,95%CI：1.19～2.70）.结论 SLC22A12基因第8外显子T130gC及第8内含子-103A＞G SNP与原发性高尿酸血症密切相关.

ABCG2基因第5外显子C421A多态与中国汉族男性原发性痛风的相关性研究

目的研究三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2基因（ATP—bindingcassette，sub-familyG（WHITE），member2；ABCG2）第5外显子C421A单核苷酸多态（singlenucleotidepolymorphism，SNP）（rs2231142）与中国汉族男性原发性痛风发病的相关性。方法采用PCR扩增及序列测定方法，对200例原发性痛风和235名对照的ABCG2基因C421ASNP进行分析。采用全自动生化仪检测血糖、甘油三酯、尿酸、胆固醇、肌酐、尿素氮等生化指标。结果ABCG2基因C421ASNP的A等位基因频率在痛风组显著高于对照组（分别为44．9％和32．3％，P〈0．01）；AA基因型与原发性痛风的患病显著相关（x^2=15．91，P％0．01，crudeOR=3．02，95％CI：1．36～4．90）；AA基因型个体发生原发性痛风的风险为CC基因型和CA基因型的3．02倍，年龄校正后为1．8倍（OR=1．8，Y。=15．91，P〈0．01，95％CI：1．32～2．45）。痛风组血糖、甘油三酯、尿酸、肌酐、尿素氮均显著高于对照组（P〈0．01）。结论ABCG2基因的C421ASNP多态，尤其是AA基因型可能与中国汉族男性发生原发性痛风密切相关。

甲泼尼龙对马兜铃酸致人肾小管上皮细胞凋亡的影响

马兜铃酸（AA）因具有致突变、致肿瘤和肾毒性等而受到广泛关注。目前对马兜铃酸肾病（AAN）的治疗措施不多，激素在延缓慢性AAN进展有效。我们研究甲泼尼龙（MP）对AA诱导的人肾小管上皮细胞系（HK-2）损伤的作用，进一步探讨激素在AAN中的治疗价值。