子宫内膜癌组织uPA和PAI-1 mRNA表达及其意义

目的探讨纤溶酶原激活因子（uPA）及纤溶酶原抑制因子-1（PAI-1）mRNA在子宫内膜癌组织表达及意义。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术,检测35例子宫内膜癌、18例子宫内膜增生和16例正常子宫内膜组织中uPA及PAI-1 mRNA的表达情况。结果uPA、PAI-1 mRNA在子宫内膜癌组织中表达水平均显著高于子宫内膜增生组织及正常子宫内膜组织（F=55.22、51.78,q=11.696-12.218,P〈0.01）;而子宫内膜增生组织中uPA、PAI-1 mRNA的表达与正常子宫内膜组织比较,差异无统计学意义（q=0.215、0.441,P〉0.05）。子宫内膜癌组织中uPA、PAI-1 mRNA的表达水平随手术病理分期（F=17.28、21.88,q=9.347-84.716,P〈0.01）及组织学分级的增高（F=31.22、27.95,q=6.960-10.931,P〈0.01）、肌层浸润深度的增加（t=2.885、3.316,P〈0.01）及淋巴结的转移显著增高（t=5.177、3.954,P〈0.01）,与病人病理类型无关（t=0.060、0.115,P〉0.05）。结论子宫内膜癌组织uPA及PAI-1 mRNA的高表达与子宫内膜癌发生、发展及浸润转移有一定关系,并且与疾病进展、预后有关。

海藻糖对液氮保存同种瓣的保护作用

目的探索将海藻糖作为保护剂用于液氮冻存同种瓣。方法10%二甲亚砜+0.1mol.L-1海藻糖(实验组)和单独使用10%二甲亚砜(对照组)作为冷冻保护剂,经程控梯度降温,液氮冻存大鼠的同种瓣6个月后复温,通过电镜、光镜观察和内皮细胞活力测定,对两种保存方法的优劣进行比较。结果实验组的内皮细胞活力明显高于对照组,并且其结构的破坏也较对照组轻。结论10%二甲亚砜+0.1mol.L-1海藻糖作为同种瓣的冷冻保护剂,其保护效果明显好于单独使用10%二甲亚砜。

重组人神经生长因子腺相关病毒载体的构建及病毒滴度的测定

目的克隆人神经生长因子-β(nerve growth factor-β,NGF-β)基因,重组于腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)载体,构建表达人NGF-β的重组腺相关病毒,检测滴度,为NGF-β的真核表达及临床应用提供实验基础。方法从正常人基因组中扩增出人NGF-β全长开放读框,将其克隆于pAAV-MCS载体,双酶切和测序鉴定重组病毒载体。将该质粒与腺相关病毒包装质粒(pAAV-RC)、腺相关病毒辅助质粒(pAAV-Helper)共转染AAV-293细胞,通过包装得到重组腺相关病毒并回收病毒原液。以pAAV-LacZ和pAAV-RC、pHelper共转染AAV-293细胞,重组病毒AAV-LacZ感染AAV-HT1080细胞,经对报告基因LacZ的X-Gal染色,通过蓝染的细胞计算病毒滴度。结果PCR产物经电泳证明大小正确,重组质粒pAAV-NGF-β经双酶切和测序证实NGF-β基因正确插入载体且序列正确。通过AAV-LacZ感染AAV-HT1080细胞后X-gal染色计数,测定重组腺相关病毒的滴度为10×109pfu.L-1。结论成功构建了表达人NGF-β基因的重组腺相关病毒载体,为进一步研究NGF-β基因治疗角膜病打下基础。