四逆汤(附子、干姜、甘草)对肾血管性高血压大鼠血压调节作用的实验研究

目的探讨四逆汤对肾血管性高血压大鼠血压的调节作用和可能的机制。方法健康雌性Wistar大鼠24只,随机分为正常组、对照组和治疗组,每组8只。根据双肾动脉夹闭法建立肾性高血压动物模型,应用四逆汤(附子、干姜、甘草)灌胃治疗2周,RBF-2型鼠尾动脉血压计测量血压,放射免疫法测定血浆中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和降钙素基因相关肽(CGRP)的含量,TUNEL法检测肾组织细胞凋亡,免疫组化法测定肾组织中AngⅡ和CGRP的表达。结果(1)对照组和治疗组大鼠血压较正常组明显升高,四逆汤能明显降低血压[(131.6±14.2vs116.2±8.3)mmHg,P<0.05]。(2)各组动物血浆AngⅡ水平无显著性变化(P>0.05),治疗组CGRP含量较对照组明显升高[(75.2±12.2vs54.8±18.1)pg/mL,P<0.05]。(3)四逆汤治疗明显减少肾小球凋亡阳性细胞数(12.6±3.5vs29.4±3.5细胞个数/10个视野,P<0.05);治疗组明显降低AngⅡ表达水平,显著升高CGRP表达水平(P<0.05)。结论四逆汤可能通过调节肾血管性高血压大鼠血浆和肾组织中血管活性物质AngⅡ和CGRP的水平,发挥其血压调节和保护高血压靶器官的作用。

三种化学物质诱发大鼠认知障碍:优化阿尔茨海默病模型的研究

目的:根据正交试验原理,应用3种化学物质诱发大鼠认知障碍模型,判定模型质量,试图优化出建立阿尔茨海默病(AD)模型的方法。方法:健康雌性Wistar大鼠16只,按L16(215)正交试验设计分组观察,依二水平三因素的方法制备模型。三因素为:A因素:一水平为鹅膏蕈氨酸(IBA)一次性微量(1μL,120mmol/L)注入大鼠Meynert基底核;二水平为注射等量人工脑脊液。B因素:一水平为β淀粉样肽1～40(Aβ1～40,20μL)左侧脑室注射,1次/d,连续1周;二水平注射等量人工脑脊液。C因素:一水平为D-半乳糖(D-gal,48mg/kg)皮下注射,1次/d,连用56d;二水平注射等量生理盐水。在处理前后用MG-2迷宫观察大鼠学习记忆成绩。苏木精-伊红染色观察神经细胞形态和数量,Bielschowsky染色观察神经元纤维缠结(NFT)和老年斑等病理改变。结果:应用三因素150d后,IBA,Aβ1～40,D-gal联合应用可致大鼠记忆障碍(均方:7.5625;F=8.067;P<0.05);海马皮层锥体细胞数量明显减少(P<0.01),Alzheimer细胞增多及卫星现象。IBA致大鼠学习记忆障碍(均方:915.0625,10.5625,F=10.602,11.267;P<0.05,0.05);D-gal致大鼠学习障碍(均方:495.0625,F=5.736;P<0.05)。3种化学物质及其交互效用分别可致海马皮质锥体细胞数量明显减少(1.4±0.28,2.2±0.85,1.7±0.14,1.8±0,0.

大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后GAP-43及IGF-1促进神经元再生表达的实验研究

目的探讨Wistar大鼠脑缺血再灌注损伤后生长相关蛋白GAP-43抑制神经元凋亡和胰岛素样生长因子-I（IGF-1），促进神经元再生的可塑性表达机制。方法将80只成年健康雄性Wistar大鼠，分为GAP-43组和IGF-1组，每组各40只，并随机分为正常对照组、假手术组和缺血1h再灌注2h、6h、12h、24h、48h、3d、7d、14d组，每组4只（n=4）。应用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注动物模型，并采用免疫组织化学方法检测GAP-43与IGF-1在神经元凋亡中的表达情况，并进行图像分析。结果GAP-43组：缺血再灌注2h，海马、皮质区及纹状体区神经元GAP-43呈基础表达，6-48h表达逐渐增高，7d达高峰，14d达最低，P〈0.05。与假手术组比较有显著性差异，P〈0.05。IGF-1组：正常对照组及假手术组在海马区、皮质区及纹状体区IGF-1阳性标记出芽细胞呈基础表达。缺血再灌2h IGF-1表达明显增高，24h达高峰，P〈0.05。48h恒定表达。3-14d仍维持高值表达，P〈0.05。结论GAP-43与IGF-1参与抑制并促进神经元轴突再生的表达。

活忆饮对阿尔茨海默病模型大鼠β-淀粉样肽1-40和烟碱型胆碱受体的影响

目的:观察中药方剂活忆饮对实验性阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脑内不同部位β-淀粉样肽1-40(Aβ1-40)和烟碱型胆碱受体(nAchR)表达的影响,探讨中医药治疗AD的方法。方法:成年健康雌性Wistar大鼠15只,在脑立体定位仪上切断大鼠双侧穹窿-海马伞,切除双侧卵巢,建立实验性AD动物模型。按随机数字表法分为3组,每组5只。1AD组:4.8 ml生理盐水灌胃,每日1次;2雌激素治疗组(E2组):苯甲酸雌二醇(1 mg/kg)皮下注射,每周1次;3活忆饮治疗组:中药方剂活忆饮每次灌胃4.8 ml,每日1次(活忆饮主要由补肾益精中药熟地,活血行气中药黄芪,以及泻火解毒中药黄连等组成,水煎浓缩至含生药量1 kg/L汤剂)。所有大鼠均治疗28 d。采用免疫组化染色观察大脑皮质区、海马CA1区、杏仁复合体区、Meynert核区的Aβ1-40、nAchR阳性细胞表达。结果:活忆饮治疗组和E2组皮质区、海马CA1区、杏仁复合体区、Meynert核区nAchR阳性细胞数均显著高于AD组,而Aβ1-40阳性细胞数显著低于AD组(P<0.05或P<0.01)。活忆饮治疗组大脑皮质区、杏仁复合体区nAchR阳性细胞数较E2组均明显升高,海马CA1区和Meynert核区Aβ1-40阳性细胞数则均较E2组显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:中药方剂活忆饮可以提高AD模型大鼠脑内不同部位nAchR表达,降低Aβ1-40表达,具有干预AD病理过程的作用。

碱性成纤维细胞生长因子促进大鼠脑缺血再灌注后肢体功能恢复的神经可塑性研究

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(basicfibooblastgrowthfactor,bFGF)能否促进大鼠局部脑缺血再灌注后的功能恢复并从神经可塑性角度探讨其机制。方法:线栓法制作Wistar大鼠大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO)模型,随机分为bFGF组、对照组、假手术组及正常组,采用行为测试试验评分观察肢体功能恢复情况,免疫组化法观察脑缺血周边区微管相关蛋白-2(microtubulinassociatedpretein2,MAP-2)和生长相关蛋白-43(growthassociatedprotein43,GAP-43)的免疫活性强度。结果:bFGF组前肢放置试验和平衡试验评分优于对照组,前肢放置试验在第9,11,13,15,17,19,21,23,25,27天差异具有统计意义(P<0.01～0.05),平衡试验在第13,15,19,23,25,27天差异有统计学意义(P<0.05)。bFGF组皮质缺血周边区MAP-2和GAP-43表达水平高于对照组,前者在第21,28天(0.388±0.057,0.379±0.049比0.275±0.058,0.260±0.066),差异有统计学意义(t=2.77,2.89,P<0.05),后者在第15,21,28天差异有统计学意义(P<0.01～0.05)。结论:外源性给予bFGF能促进大鼠MCAO后的肢体功能恢复,其机制可能与缺血周边区GAP-43和MAP-2的表达上调有关。

肾血管性高血压大鼠模型的建立和评测(英文)

背景:建立一种有效并简便可靠的高血压动物模型,对研究高血压的机制和治疗有重要的意义。目前,国内外常利用犬、大鼠、兔等实验制作高血压动物模型,其中肾动脉狭窄性高血压模型由于简便可靠被广泛应用于人类高血压及其并发症的研究。目的:建立简便、可靠的大鼠实验性肾动脉狭窄性高血压模型。设计:随机分组设计、动物实验。单位:青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所。材料:实验于2005-09/2006-02在山东省脑病防治重点实验室完成。选择健康Wistar大鼠81只,随机数字表法分为单侧肾动脉狭窄组18只,双侧肾动脉狭窄组17只,单侧肾动脉结扎组15只,双侧肾动脉结扎组15只,单侧肾动脉狭窄假手术组6只,双侧肾动脉狭窄假手术组4只,正常对照组6只。方法:单侧肾动脉狭窄组,微型银夹夹闭右侧肾动脉,12d后手术切除左侧肾脏。双侧肾动脉狭窄组,微型银夹夹闭右侧肾动脉,12d后左侧做同样处理。单侧肾动脉结扎组,丝线结扎右侧肾动脉,12d后手术切除左侧肾脏。双侧肾动脉结扎组,丝线结扎右侧肾动脉,12d后左侧做同样处理。单侧肾动脉狭窄假手术组,手术暴露右侧肾脏,不做处理放回原位。12d后切除左侧肾脏。双侧肾动脉狭窄假手术组,手术暴露右侧肾脏,不做处理放回原位,12d后左侧做同样处理。正常对照组6只,不作任何处理。应用RBP-2大鼠血压计测量鼠尾血压和心率。主要观察指标:造模成功率、大鼠血压、心率。结果:纳入动物81只,死亡61只,均进入结果分析。①血压:单侧肾动脉狭窄组、双侧肾动脉狭窄组、双侧肾动脉结扎组血压明显高于正常对照组、双侧肾动脉狭窄假手术组[分别为(138.0±36.5),(154.2±11.6),(160.5±0.7),(101.3±17.6),(108.3±5.7)mmHg]。②心率:各肾动脉狭窄组动物心率变化不稳定,单侧肾动脉狭窄组、双侧肾动脉狭窄组、双侧肾动脉结扎组、正常对照组、双侧肾动脉狭窄假手术组分别为[(367.5±47.2),(420.2±47.8),(386.0±4.2),(390.3±42.4),(417.3±27.5)次/min]。③存活率:肾动脉狭窄组存活率(单侧22%,双侧29%)显著高于肾动脉结扎组(单侧0,双侧12%),以双侧肾动脉狭窄组存活率最高。结论:双侧肾动脉夹闭法可建立稳定的肾动脉狭窄性高血压大鼠模型。

四逆汤对肾性高血压大鼠血管活性物质的调节作用

目的:探讨肾性高血压大鼠血液内一氧化氮(NO)和内皮素(ET)浓度,主要靶器官内皮素受体A(ETRA)、一氧化氮合酶(NOS)表达的变化以及四逆汤的干预作用。方法:健康♀Wistar大鼠24只,随机分为正常对照组、肾性高血压组和四逆汤治疗组,每组8只。根据双肾动脉夹闭法建立肾性高血压动物模型,应用RBF-2型大鼠尾动脉血压计测量血压,硝酸还原酶比色法测定血清中NO含量,放射免疫法测定血浆中ET的含量。免疫组化法测定心、脑、肾组织ETRA和NOS的表达。结果:①四逆汤治疗组大鼠血压较对照组明显下降。②血清NO和血浆ET含量明显升高,动物血压与血清NO水平成反比。③各靶器官ETRA表达水平,肾性高血压组均显著高于正常对照组;四逆汤治疗组在肾和心均显著低于肾性高血压组。④肾和脑iNOS表达水平,肾性高血压组显著高于正常对照组;四逆汤治疗组明显低于肾性高血压组。心脏eNOS表达水平,肾性高血压组显著低于正常对照组,治疗组显著高于高血压组。结论:四逆汤可能通过调节肾性高血压大鼠肾、心、脑血管活性物质的表达和血液内的有效浓度,发挥其血压调节作用。

四逆汤对肾性高血压大鼠主要靶器官血管活性物质表达的影响

目的研究四逆汤对肾性高血压大鼠主要靶器官血管活性物质表达的影响。方法健康雌性Wistar大鼠24只,随机分为正常对照组、肾性高血压组和四逆汤治疗组,每组8只。根据双肾动脉夹闭法建立肾性高血压动物模型,免疫组化法测定心、脑、肾组织内皮素受体A(ETRA)、一氧化氮合酶(NOS)、血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)、降钙素基因相关肽(CGRP)的表达。结果①各靶器官ETRA表达水平,肾性高血压组均显著高于正常对照组(P<0.05);四逆汤治疗组在肾和心均显著低于肾性高血压组(P<0.05),但在脑无显著性差异(P>0.05)。②肾和脑iNOS表达水平,肾性高血压组显著高于正常对照组(P<0.05);四逆汤治疗组明显低于肾性高血压组(P<0.01)。心脏eNOS表达水平,肾性高血压组显著低于正常对照组(P<0.01),治疗组显著高于高血压组(P<0.01)。③各器官CGRP表达水平,肾性高血压组较正常对照组均显著升高(P<0.05);四逆汤治疗组较肾性高血压组均明显降低(P<0.01);④Ang-Ⅱ在肾和心的表达水平,四逆汤治疗组较肾性高血压组均明显降低(P<0.05),但在脑无显著性差异(P>0.05)。结论四逆汤可能通过调节肾性高血压大鼠肾、心、脑组织中ETRA、NOS、Ang-II和CGRP的表达水平,发挥其血压调节作用。

肌苷对大鼠脑缺血再灌注后血管内皮生长因子表达的影响(英文)

背景:肌苷参与机体多方面的代谢过程,对缺血性脑损伤具有一定的保护作用,但其机制还没有彻底阐明。目的:研究肌苷对大鼠脑缺血再灌注后血管内皮生长因子(vascularen-dothelialgrowthfactor,VEGF)表达的影响,探讨肌苷的神经保护作用机制。设计:随机对照的实验研究。地点和材料:本实验在青岛大学医学院脑血管病研究所和山东省脑血管病防治重点实验室完成。成年健康雌性SD大鼠68只,体质量230～270g,清洁级,由中国科学院上海实验动物中心提供。干预措施:成年健康雌性SD大鼠68只,应用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,随机分为治疗组32只和对照组32只,每组再随机分为缺血1.5h再灌流2,6,12,24h,2,3,7,14d组(n=4),另外4只作假手术组。应用免疫组织化学方法检测脑缺血再灌流后脑组织VEGF的表达。结果:假手术组脑组织未见VEGF阳性表达。对照组在皮层区和纹状体区VEGF在脑缺血再灌注2h开始表达,12h达高峰,持续24h,随即迅速降低。VEGF阳性细胞主要位于Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ层神经元和血管内皮细胞,尤其神经细胞核周细胞浆和树突染色最深。肌苷治疗组VEGF表达于缺血再灌注2h～2d较对照组显著增高,经统计学处理,差异有非常显著性意义(t=3.78～22.62,P<0.01)。结论:肌苷可上调脑缺血再灌注后VEGF的表达,可能是其缺?

大鼠骨髓基质细胞体外培养转化为神经元细胞的实验研究

目的探讨体外原代培养骨髓基质细胞(BMSC)向神经元细胞转化情况。方法取成年W istar大鼠BMSC,无血清和有血清培养基进行细胞克隆,获取骨髓间质干细胞(MSCs),应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)进行细胞扩增及诱导分化。结果分离纯化后的BMSC经原代培养形成细胞克隆团,经传代后其数量明显增多,其分化细胞形态多样,包括神经元细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞,仍具有神经细胞所特有的性质。结论BMSC具有较强的自我更新能力和多分化潜能,在合适的环境条件下,可诱导分化出神经元细胞和神经胶质细胞,是较为理想的种子细胞。

外源性雌激素对IBA和D-gal诱发大鼠认知障碍的干预作用

目的 应用鹅膏蕈氨酸 (IBA)和 D-半乳糖 (D- gal)诱发 Wistar大鼠认知障碍模型 ,观察补充外源性雌激素的治疗作用与机理。方法 1认知障碍组 :应用 IBA(1μl)一次性微量注入大鼠 Meynert基底核 ,同时大鼠皮下注射 D- gal(48mg/ Kg) ,制作模型。 2治疗组 :按模型组方法制备模型 ,在应用 IBA后 7d开始应用苯甲酸雌二醇 (1 mg/ Kg)和黄体酮 (1 0 mg/ Kg)治疗 ,每 7d皮下注射 1次 ,治疗时间 1 50 d。3假手术组 :健康大鼠按模型制作过程操作 ,应用生理盐水替代 IBA和 D- gal,注射用水替代雌二醇和黄体酮皮下注射。用 MG- 2迷宫观察大鼠至其测试达到连续 1 0次中有 9次正确反应所需要的电击次数 ,作为学习记忆成绩。HE染色和 Bielschowsky染色观察脑组织变化。结果 应用 IBA和 D- gal1 50 d后 ,模型组大鼠学习记忆能力较其他组明显低下 ,其电击次数 (2 5.5± 1 2 .39次 )明显高于治疗组 (3.80± 3.83次 )和假手术组 (2 .3± 4.50次 ) ,均 P<0 .0 5;而治疗组和假手术组比较无显著性差异 (P>0 .0 5)。光镜下海马皮层平均单个视野中锥体细胞计数模型组 (3.2 5± 2 .60个 )明显少于治疗组 (1 5.0± 6.35个 )和假手术组 (1 7.85± 1 1 .1 9个 ) ,均 P<0 .0 5;而治疗组和假手术组无显著性差异 (P>0 .0 5)。

神经调节素-1β对小鼠脑缺血再灌注损伤的干预作用及可能的机制

目的研究神经调节素-1β(NRG-1β)对小鼠脑缺血再灌注后神经行为功能,脑梗死体积,脑组织含水量,神经细胞凋亡以及胶质细胞水通道蛋白-4(AQP-4)表达的影响和神经保护的作用机制。方法应用线栓法建立小鼠大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)模型,经颈内动脉微量注射NRG-1β(2μg/kg)干预治疗,Bederson法评价动物的神经行为功能;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,观察脑梗死体积;干湿重法测定脑组织含水量;免疫荧光染色检测神经细胞凋亡;免疫组织化学检测AQP-4的表达。结果脑缺血再灌注损伤后,动物均表现神经行为功能障碍,缺血侧出现脑梗塞病灶,脑组织含水量、神经细胞凋亡数量和胶质细胞AQP-4表达均高于假手术组。与对照组相比较,NRG-1β治疗组缺血24h,动物神经行为功能损伤明显改善,凋亡神经细胞数明显减少,脑梗塞体积显著缩小(P<0.05);但脑组织含水量和AQP-4表达与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。缺血再灌注22h、46h和70h组,上述5项指标较相应的对照组均有显著性差异(P<0.05)。结论NRG-1β可能通过下调脑缺血再灌注损伤诱导的胶质细胞AQP-4表达和抑制细胞凋亡,减轻脑水肿和缩小梗死体积,从而改善动物的神经行为功能。

电针对局灶性脑缺血/再灌注大鼠IL-1Ra mRNA表达的调节

目的 :观察电针 (EA)对局灶性脑缺血 /再灌注大鼠IL 1RamRNA表达的调节作用。方法 :采用线栓法制备SD大鼠局灶性大脑中动脉阻塞缺血 /再灌注 (MCAo)模型 ,并应用RT PCR的方法进行观察。结果 :MCAo大鼠缺血侧大脑皮层在再灌注后 1 2hr和 2 4hrIL 1RamRNA表达增加 ;在缺血侧纹状体缺血再灌注后 1 2hrIL 1RamRNA表达明显增加 ,但再灌注后 2 4hr表达明显降低 ,电针可使IL 1RamRNA的表达明显增加。结论 :EA可使内源性IL 1RamRNA表达增加 ,从而使IL 1Ra表达增加 ,对脑缺血起保护作用 ,这也可能是EA抗脑缺血损伤的机制之一。

脑缺血再灌注后神经元特异性烯醇化酶和S-100β蛋白变化与神经功能等级评定的关系(英文)

背景:脑脊液和血浆中神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经组织蛋白S-100β含量在脑缺血性损伤时升高的程度能反映脑损伤的程度和预后。目的:观察大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织NSE和S-100β的变化规律及其意义。设计:随机对照的研究。地点及对象:本实验在青岛大学医学院脑血管病研究所和山东省脑血管病防治重点实验室完成。成年健康雌性SD大鼠36只,体质量230～270g,清洁级,由中国科学院上海实验动物中心提供。方法:实验由作者完成。方法:用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,应用神经等级评分观察脑缺血再灌注后行为功能的恢复,免疫组织化学法检测脑组织中NSE和S-100β的动态变化。主要观察指标:各组大鼠皮质区、纹状体NSE,S-100β含量及神经功能评分。结果:皮质区、纹状体区的NSE和S-100β免疫阳性反应均于缺血再灌注后12h明显增强,并随时间变化而逐渐下降,至14d降至正常水平。神经功能评分再灌注2h～1d时为3.00分,再灌注3,7,14d恢复至1.50分(t=2.60～4.48,P<0.05)。结论:脑缺血再灌注损伤后脑组织NSE和S-100β蛋白表达增加,并与神经功能恢复有相关性。

黄芪甲苷对缺氧/复氧损伤人脐静脉内皮细胞与中性粒细胞黏附能力及细胞核转录因子κB表达的影响

目的:采用人脐静脉内皮细胞缺氧复氧模型模拟器官组织缺血-再灌注所诱导的血管改变,观察黄芪甲苷对缺氧/复氧损伤血管内皮细胞与中性粒细胞黏附及细胞核转录因子κB表达的干预作用。方法:实验于2005-09/2006-05在青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所细胞生物工程实验室进行。①实验材料:新生儿脐带(由青岛大学医学院附属医院妇产科提供,产妇及其家属知情同意,实验符合赫尔辛基宣言中的伦理学标准)。②实验过程及分组:人脐静脉内皮细胞原代培养,传至3代后,随机分为3组。对照组:常规培养;缺氧/复氧组:先缺氧处理1h,再复氧1h;药物干预组:在培养液中加入终浓度分别为20,40,80mg/L的黄芪甲苷预处理,12h后进行缺氧/复氧处理。③实验评估:分别用硫代巴比妥法和酶联免疫吸附试验测定细胞培养液中丙二醛的含量和细胞间黏附分子1浓度;免疫化学法测人脐静脉内皮细胞核转录因子κB的表达;虎红染色法检测人脐静脉内皮细胞与中性粒细胞黏附。结果:①与对照组比较,缺氧/复氧组细胞培养液中丙二醛含量增多(P<0.01);随着黄芪甲苷预处理剂量的增加,丙二醛含量降低(P<0.01),呈剂量依赖性。②与对照组比较,缺氧复氧组人脐静脉内皮细胞核转录因子κΒ阳性细胞率、细胞培养液中细胞间黏附分子1浓度及中性粒细胞黏附率升高(P均<0.01);随着黄芪甲苷预处理剂量的增加,核转录因子κB表达阳性细胞率、中性粒细胞黏附率下降(P<0.05或P<0.01),细胞间黏附分子1浓度减少(P<0.01),呈剂量依赖性。结论:黄芪甲苷通过抑制缺氧复氧引起的血管内皮细胞核转录因子κB表达,减轻血管内皮细胞与中性粒细胞黏附,对缺氧/复氧损伤血管内皮细胞具有保护作用,且呈剂量依赖性。

兔脑缺血再灌注后NSE和S-100的表达及其血清水平的变化

目的:探讨兔大脑中动脉缺血再灌注(MCAO/R)后脑组织神经元特异性烯醇化酶(NSE)和S-100蛋白的表达及其血清含量的变化。方法:将制作成功的兔MCAO/R模型58只,随机分为永久性缺血组30只和缺血再灌注组28只;另取10只动物行假手术分别作为缺血组(5只)及再灌注组(5只)的对照组。免疫组化法检测脑缺血再灌注不同时间脑组织NSE和S-100蛋白的表达,ELISA法检测血清NSE和S-100的含量。结果:假手术组脑组织NSE和S-100表达微弱,血清含量较低。永久性脑缺血3h和缺血再灌注2h后,脑组织NSE和S-100表达同步升高和降低,变化趋势基本一致,但NSE和S-100表达在缺血再灌注47h组较永久性缺血48h组再次明显升高。血清NSE和S-100水平直到缺血5h和再灌注5h开始同步升高,较脑组织NES和S-100表达时间延迟3h。结论:神经细胞和胶质细胞对缺血再灌注损伤非常敏感,再灌注可加重脑组织的损伤,破坏血-脑屏障,NSE和S-100从脑脊液循环进入了血液循环,血清NSE和S-100的水平可作为评价脑损伤程度和转归的早期指标。

四逆汤对肾性高血压大鼠血压的调节作用和机制

目的探讨四逆汤对肾性高血压大鼠血液内血管活性物质含量和主要靶器官血管活性物质表达的调节作用。方法健康♀Wistar大鼠24只,随机分为伪手术(SO)组、肾性高血压(RH)组和四逆汤治疗(ST)组,每组8只。根据双肾动脉夹闭法建立肾性高血压动物模型,应用RBF-2型大鼠尾动脉血压计测量血压,硝酸还原酶比色法测定血清中一氧化氮(NO)含量,放射免疫法测定血浆中内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量。免疫组化法测定心、脑、肾组织内皮素受体A(ETRA)、一氧化氮合酶(NOS)、AngⅡ和CGRP的表达。结果①ST组大鼠血压明显低于RH组(P<0.05)。②大鼠血清NO、血浆CGRP和ET含量ST组均明显高于RH组(P<0.05),AngⅡ含量无变化(P>0.05)。③大鼠心、肾ETRA表达水平ST组均明显低于RH组(P<0.05),但脑组织中含量差异无显著性(P>0.05);心脏eNOS表达水平ST组明显高于RH组(P<0.05),脑、肾iNOS表达水平ST组明显低于RH组(P<0.05);心、脑、肾CGRP表达水平ST组均低于RH组(P<0.05);心、肾AngⅡ表达水平ST组均明显低于RH组(P<0.05),但在脑差异无显著性(P>0.05)。结论四逆汤可能通过调节肾性高血压大鼠心、脑、肾内血管活性物质的表达及其血液内的有效含量,而发挥血压调节作用。

藻蓝蛋白对脑缺血再灌注后NF-κB和IL-6表达及神经细胞凋亡的影响

目的研究藻蓝蛋白对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑保护作用的可能机制。方法大鼠60只,采用改良线栓法建立大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)模型,应用藻蓝蛋白进行治疗,观察脑缺血再灌注后神经细胞核因子-κB,IL-6免疫表达和神经细胞凋亡变化,以及藻蓝蛋白对上述指标的影响。结果脑缺血再灌注6h开始,皮质区和纹状体区神经细胞NF-кB表达逐渐增强,于再灌注1d达高峰,之后逐渐下降。IL-6表达部位和变化规律与NF-кB相似,但其表达高峰在再灌注2d。神经细胞凋亡于脑缺血再灌注6h开始逐渐增加,在皮质区和纹状体区分别与再灌注1d和2d达到高峰,其变化规律与NF-кB和IL-6表达一致。应用藻蓝蛋白后,神经细胞NF-κB和IL-6表达显著减低,神经元凋亡明显减少。结论藻蓝蛋白具有抑制脑缺血再灌注后神经细胞凋亡、下调NF-κB和IL-6表达的作用。

全骨髓贴壁法获纯化骨髓间充质干细胞向神经干细胞的诱导分化

目的:来源于骨髓间充质干细胞的神经干细胞是最近研究的一个热点。实验拟进一步验证通过全骨髓贴壁法分离纯化骨髓间充质干细胞并诱导分化为神经干细胞的效率,并对其的体内外标记进行了观察。方法:实验于2006-11/2007-05在青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所完成。①实验材料:选取出生4周左右Wistar大鼠,雌雄不拘,SPF级,体质量200g左右,由青岛市实验动物和动物实验中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:选用出生4周左右Wistar大鼠,由其股骨和胫骨分离纯化骨髓间充质干细胞,加碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子诱导其分化为神经干细胞,并进行免疫组织化学鉴定。以5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记神经干细胞,在24孔板中进行细胞免疫组织化学和免疫荧光鉴定。将标记的神经干细胞定位注入大鼠基底节区,1周后取脑作石蜡切片,进行免疫组织化学和免疫荧光染色。结果:获得了较纯化的骨髓间充质干细胞,经诱导72h后,部分细胞增殖分裂成小圆形,呈团簇状半悬浮状态。继续培养72h可见细胞呈现典型神经元样改变,细胞伸出两个或多个突起,胞体呈多角形或不规则形,折光性较强,细胞突起之间相互连接成网状,可见细胞核及核仁,经诱导后有巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白阳性细胞表达。采用BrdU掺入DNA合成期的神经干细胞,1周后体内外标记阳性率>85%。结论:采用全骨髓贴壁法可获得较纯化的骨髓间充质干细胞,其在适宜的诱导分化条件下可诱导分化神经干细胞。BrdU可作为神经干细胞体内示踪的理想标记物。