肺炎链球菌对大环内酯类抗菌药物耐药机制的研究

目的调查烟台地区肺炎链球菌对抗菌药物的敏感性,研究烟台地区肺炎链球菌对大环内酯类抗菌药物耐药机制。方法收集社区和临床分离的肺炎链球菌,根据美国临床实验室标准化研究所/美国临床实验室标准化委员会(CLSI/NCCLS)的推荐,用K-B法、Etest法检测肺炎链球菌对青霉素等11种抗菌药物的耐药性及对大环内酯类抗菌药物的耐药表型;用聚合酶链反应(PCR)扩增耐药基因ermB和mefE基因。结果42株肺炎链球菌中25株对青霉素低度耐药(65.0%),无对青霉素高度耐药株;肺炎链球菌对大环内酯类和克林霉素表现出极高的耐药率,对红霉素和克林霉素耐药率为98.0%和93.0%;42株肺炎链球菌中40株检测到ermB基因、1株检测到mefE基因,其中9株菌同时检测到ermB和mefE基因。结论烟台地区对青霉素不敏感肺炎链球菌检出率高;对红霉素和克林霉素近乎全部耐药,ermB基因介导的靶位改变是烟台地区肺炎链球菌对大环内酯类抗菌药物的主要耐药机制。

大肠埃希菌耐药性及耐药基因检测

目的了解产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）与非产ESBLs大肠埃希菌（ECO）的耐药性及耐药基因携带情况,并阐明产ESBLs ECO基因型分布。方法K-B法检测54株ECO对22种抗菌药物的敏感性,PCR方法扩增ESBLs基因、氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药物耐药基因。结果54株ECO对阿米卡星、奈替米星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢西丁、氨曲南、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南和美罗培南敏感性达70.0%～100.0%;对喹诺酮类、庆大霉素、哌拉西林敏感性〈27.8%;27株产ESBLs ECO中,CTX-M-1型9株、SHV型5株、TEM型16株、OXA-1型8株、6株未检测出ESBLs基因型、10株有≥2种ESBLs基因型;54株ECO中耐氨基糖苷类抗菌药物44株,aac（3）-Ⅰ4株、aac（3）-Ⅱ38株、aac（6′）-Ⅰ17株、aac（6′）-Ⅱ11株、ant（2″）-Ⅰ8株及ant（3″）-Ⅰ12株;54株ECO中耐喹诺酮类抗菌药物41株,qnr基因检出率为7.3%。结论碳青酶烯类为治疗ESBLs阳性ECO的首选药物;除氨基糖苷类抗菌药物和呋喃妥因外,产ESBLs组耐药性明显高于非产ESBLs组;产ESBLsECO中TEM型为最常见的ESBLs型别;氨基糖苷类抗菌药物耐药基因以aac（3）-Ⅱ和aac（6）-Ⅰ为主;ECO对喹诺酮耐药率较高,且检测到qnr基因。

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药特征及其耐药机制研究

目的分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药特征,并研究对亚胺培南的耐药机制。方法采用Micro-Walkaway-40进行细菌鉴定和药物敏感试验,应用PCR法对铜绿假单胞菌亚胺培南耐药相关基因(IMP、VIM、GIM、OXA)和膜微孔蛋白基因oprD2进行检测,琼脂稀释法检测氰氯苯腙(cccp)对耐亚胺培南铜绿假单胞菌MIC的影响。结果 65株耐亚胺培南铜绿假单胞菌对舒普深、特治星、阿米卡星的耐药率分别为38.5%、43.1%和44.6%,对头孢他啶、马斯平和环丙沙星的耐药率分别为50.8%、53.8%和55.4%;65株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中,IMP阳性11株(16.9%)、VIM 4株(6.2%),oprD2基因缺失5株(7.7%),其余耐药基因未检出;CCCP检测阳性时,亚胺培南的MIC值下降,提示存在主动外排机制的菌株7株(10.8%)。结论耐亚胺培南铜绿假单胞菌多重耐药现象较为严重,其耐药机制主要与细菌产IMP型金属β-内酰胺酶、细胞主动外排机制以及膜微孔蛋白基因oprD2缺失有关。

SOX4在肿瘤中的研究进展

SOX4属于SOX转录因子家族,对胚胎发育过程中心脏的形成、T/B淋巴细胞的发育和分化、胰腺的发育、骨骼的发育等具有重要的作用。近年来,越来越多的研究表明SOX4在人类许多肿瘤中表达升高并且与肿瘤的发展密切相关。在不同类型肿瘤或肿瘤的不同阶段,SOX4通过参与肿瘤细胞的增殖、凋亡或分化的过程从而具有双重的作用:促癌作用和抑癌作用。产生这种差异的具体机制尚不清楚,因此深入研究SOX4基因与肿瘤的关系对肿瘤的治疗和预后判断具有重要意义。

烟台地区嗜麦芽窄食单胞菌整合子分布及其可变区所携带耐药基因盒的研究

目的分析嗜麦芽窄食单胞菌对临床常用抗菌药物的耐药性,探讨明确嗜麦芽窄食单胞菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子的存在情况以及所携带的耐药基因盒,为本地区更好地预防和控制嗜麦芽窄食单胞菌感染性疾病提供帮助。方法收集临床分离的51株嗜麦芽窄食单胞菌采用微量肉汤稀释法测定嗜麦芽窄食单胞菌对17种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。根据GenBank注册的基因序列设计引物,PCR扩增Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子。对整合子阳性菌株扩增其可变区产物进行测序分析,所得结果在GenBank数据库中进行同源性比对,了解可变区中含有基因盒的信息。结果 (1)51株嗜麦芽窄食单胞菌标本来源分布以痰液最多,为41株,占80.39%,感染人群主要以60岁以上年龄段为主,为38株,占74.5%。病房分布:重症监护室(ICU)20株,占39.22%;呼吸内科13株,占25.49%;干部病房6株,占11.76%,所占比例较大。(2)药敏结果显示嗜麦芽窄食单胞菌对多数常用抗菌药物耐药性较高,部分菌株表现出对9种以上抗菌药物的多重耐药。(3)51株嗜麦芽窄食单胞菌PCR基因扩增结果7株菌Ⅰ类整合子阳性(13.7%),没有检测到Ⅱ、Ⅲ类整合子,Ⅰ类整合子可变区携带的耐药基因包括aacA4、aadA1、catB8、dfrA17和aphA15五种。结论嗜麦芽窄食单胞菌对多数常用抗菌药物耐药性较高,部分菌株表现出多重耐药性。Ⅰ类整合子是嗜麦芽窄食单胞菌多重耐药的重要因素之一。

节律基因在慢性粒细胞白血病中表达水平及意义

目的探讨节律基因在慢性粒细胞白血病(CML)中的表达情况,及其与bcr/abl融合基因的相关性,为临床治疗提供新的分子靶点。方法收集106例CML患者慢性期、加速期、急变期的骨髓标本和50例健康体检人员的外周血为对照,采用RT-PCR法检测per1、per2、bcr/abl基因表达情况。结果 per1、per2、bcr/abl基因在慢性期、加速期和急变期存在不同水平的变化,并且per1、per2表达水平与bcr/abl基因存在负相关。结论节律基因作为肿瘤抑制因子在CML中是低表达的,在信号转导通路中是否与bcr/abl基因相互作用还需深入研究。

革兰阴性菌脓毒血症患者早期NK细胞及可溶性粒细胞靶受体对病人预后的影响

目的:探讨革兰阴性菌脓毒血症患者早期NK细胞及血清可溶性粒细胞靶受体(sTREM-1)对病人预后的影响。方法:脓毒血症发生后12h内,采集49例高度怀疑革兰阴性菌感染患者的外周血,应用流式细胞术分析NK细胞,ELISA法测定血清sTREM-1的浓度,同时使用生物梅里埃API20E鉴定系统进行细菌鉴定;采集16个健康人的血样品作为对照。结果:49例患者均确诊为革兰阴性菌感染。与对照组相比,脓毒血症患者外周血NK细胞明显增多(P<0.01),且淋巴细胞中NK细胞比例>20%的患者生存期长于NK细胞≤20%的患者(P<0.05)。患者血清sTREM-1水平较对照明显增高(P<0.01),且血清sTREM-1浓度>180pg/ml的患者生存期长于sTREM-1浓度≤180pg/ml的患者(P<0.05)。结论:革兰阴性菌脓毒血症患者早期NK细胞增加和血清sTREM-1水平增高可改善患者的生存期。

酵母样真菌的培养鉴定及其耐药性分析

目的对引起感染的酵母样真菌类型及其耐药特性进行研究，以指导临床合理用药。方法从2005年1月～2007年12月我院临床送检的血液、中段尿、粪便、痰、胸腹水、伤口分泌物、穿刺液等标本中，采用常规方法培养和分离酵母样真菌，用法国生物梅里埃ATB-EXPREss系统对酵母样真菌进行鉴定，用ATB-FUNGUS药敏试条进行药敏试验。结果共分离到484株酵母样真菌，其中白色假丝酵母菌占42．4％，热带假丝酵母菌占27．9％，光滑假丝酵母菌占10．5％，清酒假丝酵母菌占7．0％，近平滑假丝酵母菌占2．3％，克柔假丝酵母菌占2．7％，中间假丝酵母菌占4．1％，其他酵母菌占3．1％。酵母样真菌对两性霉素B敏感，对5-氟胞嘧啶、氟康唑、伊曲康唑存在不同程度的耐药。结论临床需要加强真菌送检培养，合理使用抗真菌药物，尽量避免单纯经验用药，以减少耐药菌株的出现。

节律基因在肿瘤中的研究进展

生物昼夜节律是生物体内具有自我调节功能、以生命活动24h为周期的一种生理节律系统,因其节律特性类似于钟表而被叫做生物钟。生物昼夜节律依照周期的长短分为亚日节律（ultradian rhythm）,周期短于1d,如呼吸、心跳等;近日节律（circadian rhythm）,周期接近于24h,

输注清蛋白对1,3-β-D葡聚糖检测结果的影响研究

目的探讨输注清蛋白对血浆1,3-β-D葡聚糖检测结果的影响,以期更好地将此方法用于临床。方法通过收集42例输注清蛋白患者,分别在输注前及输注后1、2、3d采集血样,于2h内进行1,3-β-D葡聚糖检测,对所检测数据进行统计学分析,探讨输注清蛋白对1,3-β-D葡聚糖检测结果是否存在影响及影响程度。结果输注清蛋白对血浆1,3-β-D葡聚糖检测结果无明显影响。结论输注清蛋白对血浆1,3-β-D葡聚糖检测结果无影响,临床在下达1,3-β-D葡聚糖医嘱及观察检验报告时可以不予考虑患者是否输注清蛋白。

唾液在临床疾病诊断中的研究进展

唾液是口腔腺体分泌的一种重要的生物流体物质,当机体发生某种疾病时,唾液中某些成分会发生变化,唾液中发生变化的这些生物标志物在血液中均可检测到,只是浓度较低。对唾液分泌通路、唾液中生物标志物与疾病相关性的深入研究以及敏感的分子诊断技术的应用,使唾液作为标本用于疾病的诊断成为可能,同时也将开辟疾病快速无创诊断的新途径。

革兰氏阴性菌脓毒血症患者早期CD4阳性淋巴细胞和NK细胞的临床研究

目的:明确革兰氏阴性菌脓毒血症患者淋巴细胞和NK细胞的早期变化以及血清可溶性粒细胞靶受体(sTREM-1)的水平,探讨脓毒血症患者早期的免疫状况。方法:脓毒血症发生后12h内,采集39例高度怀疑革兰氏阴性菌感染患者的外周血;同样采集16个健康人的血样品。应用单克隆抗体在流式细胞仪上分析淋巴细胞及NK细胞;血清sTREM-1的浓度用ELISA法测定。结果:与对照相比,脓毒血症患者CD3/CD4细胞明显减少(P<0.01);而NK细胞明显增高(P<0.01)。患者ANNEXIN-V/CD4/CD3阳性细胞、ANNEXIN-V/CD8/CD3阳性细胞以及ANNEXIN-V/CD14阳性细胞比例(中位数±标准差)分别是(7.53±2.25)%、(7.59±3.39)%和(1.96±4.17)%。脓毒血症患者血清sTREM-1水平较对照明显增高(P<0.01)。结论:研究结果首次证实革兰氏阴性菌脓毒血症患者早期出现CD4淋巴细胞减少、NK细胞增加和血清sTREM-1水平增高的免疫特征。

外周血有核细胞中t-PA mRNA的表达与脑梗死患者的相关性研究

目的:探讨脑梗死患者与t-PA mRNA表达的关系。方法:用逆转录-PCR(RT-PCR)法检测40例脑梗死患者和40例正常对照者外周血有核细胞中t-PA mRNA的表达。结果:脑梗死患者组外周血有核细胞中t-PA mRNA的表达明显增强,同正常对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论:外周血有核细胞中t-PA mRNA的表达增强与脑梗死密切相关,可作为脑梗死的辅助诊断指标;并有可能作为脑梗死疗效的动态监测指标。

RhoC在妊娠滋养细胞疾病中的表达及其与葡萄胎恶变的相关性研究

目的:分析研究RhoC在侵袭性葡萄胎、葡萄胎以及绒癌中的表达和葡萄胎恶病的相关性,为临床诊治提供可靠的依据。方法:通过免疫组化方式检测30例存在恶变倾向的葡萄胎,30例没有出现恶变的葡萄胎,10倒侵袭性葡萄胎,20例绒癌组织中的RhoC表达情况,通过化学发光发检测葡萄胎患者血人绒毛膜促性腺激素,同时结合患者临床资料开展分析。结果:侵袭性葡萄胎中的RhoC表达显著高于葡萄胎,存在恶变倾向的葡萄胎RhoC表达显著高于没有恶变的葡萄胎,葡萄胎恶变和RhoC表达、卵巢黄素化囊肿以及血人绒毛膜促性腺激素显示正相关。结论:Rh0C和滋养细胞的侵袭过程和侵袭程度相关,RhoC表达上调属于滋养细胞恶性转化的一类早期事件,在对葡萄胎中Rh0C蛋白表达进行检测,能够成为预测其产生恶变的指标之一,为临床开展预防性化疗提供有力的依据。

白血病的分子诊断技术研究进展

白血病是一种起源于造血干细胞的恶性增殖疾病,其特征是骨髓异常分化的原始细胞克隆性扩张。近年来,在白血病患者中发现了越来越多的细胞遗传学和分子遗传学标志物异常,突显了这种疾病的生物学异质性。大多数白血病都有某种染色体易位,而染色体易位会导致新的融合基因产生、癌基因的扩增、原癌基因点突变和抑癌基因的失活等。2016年,WHO对白血病提出了新的诊断与分型标准,更加突出了分子生物学在白血病诊断和治疗中的作用[1]。详细的分子标志物监测对于白血病患者的治疗和预后评估至关重要,特别对于初步治疗后和长期随访期间监测微小残留病变(MRD)极其重要。近年来,随着各种分子生物学技术的不断发展,分子生物学检测在白血病诊治中的作用越来越重要。本文针对白血病的分子诊断技术的研究进展进行总结,以便更好地了解各种分子诊断技术,方便临床医生选择更合适的分子诊断方案。

自然杀伤T细胞样细胞在系统性硬化病患者中的表达及意义

目的研究外周血自然杀伤T细胞样(NKT-like)细胞在SSc患者中的表达,探索NKT-like细胞与SSc实验室指标和临床指标之间的相关性,进而探讨NKT-like细胞在SSc发生发展中的作用。方法选取2018年12月至2019年12月在北京大学人民医院风湿免疫科门诊和住院就诊的46例SSc患者(SSc组),年龄及性别与之匹配的30名健康体检者,作为健康对照组(HC组)。采用流式细胞术收集SSc组和HC组外周血NKT-like细胞和其他淋巴细胞亚群的细胞数量和百分比。同时采用多种实验方法测定其他实验室指标。相关性分析采用Pearson或Spearman分析,2组间差异采用Mann-WhitneyU检验,或采用Fisher确切概率法,对NKT-like细胞和其他临床及实验室指标进行相关统计学分析。结果与HC组[165(72,226)个/μl]相比,SSc组外周血中NKT-like细胞数量[30(19,58)个/μl]及比例明显降低,差异具有统计学意义(Z=-5.69,P<0.001)。相关性分析可见,NKT-like细胞数量与总T细胞(r=0.56,P<0.001)、CD4+T细胞(r=0.42,P=0.004)、CD8+T细胞(r=0.60,P<0.001)、B细胞(r=0.50,P<0.001)及NK细胞(r=0.33,P=0.024)呈正相关;NKT-like细胞所占淋巴细胞百分比与CD8+T细胞所占百分比呈正相关(r=0.34,P=0.020),与其他淋巴细胞百分比无相关性(P>0.05)。NKT-like细胞降低组ESR较NKT-like细胞正常组显著升高[15(9,28)mm/1 h与8(4,16)mm/1 h,Z=-2.04,P=0.042]。NKT-like细胞数量与ESR呈负相关(r=-0.34,P=0.019)。结论SSc患者外周血NKT-like细胞存在数量和比例明显降低,NKT-like细胞不仅与多种淋巴细胞亚群呈正相关,而且与反映疾病活动度的ESR呈负相关。NKT-like细胞可作为监测SSc疾病活动的一种指标。

C／EBPα在慢性髓性白血病患者中的表达及其作用机制研究

目的研究转录因子CCAAT／增强子结合蛋白α（C／EBPα）在慢性髓性白血病（CML）患者中的表达情况及其作用机制。方法收集50例CML患者（慢性期33例，加速期7例，急变期10例）骨髓标本和20名正常对照者外周血标本，用RT-PCR方法检测C／EBPα基因mRNA的表达情况及其与bcr-abl融合基因的相关性；观察伊马替尼对K562细胞C／EBPα基因mRNA表达的影响；采用慢病毒转染的方法将重组pLVX-C／EBPα-3FLAG-Puro及空载体pLVX-EGFP-3FLAG-Puro慢病毒质粒转入K562细胞，构建稳定表达C／EBPα的K562细胞株；用CCK-8试剂盒检测细胞增殖；RT-PCR方法检测Fox03a、Bim基因的表达情况。结果与正常对照者相比，CML患者C／EBPαmRNA表达显著下降（P〈0．01），并与bcr-abl融合基因表达呈负相关（r=0．505，P〈0．01）；RT-PCR和Westernblot检测结果显示成功构建稳定表达C／EBPα的K562细胞株；K562-C／EBPα细胞增殖水平明显低于未处理K562细胞及K562-空载体细胞；K562-C／EBPα细胞Fox03α、Bim基因mRNA相对表达量分别为1．06±0．06、0．53±0．07，均高于K562-空载体和K562细胞（P〈0．01，P〈0．05）。结论CML患者转录因子C／EBPα表达水平下调，过表达C／EBPa对K562细胞增殖有抑制作用。

异种脱细胞真皮基质修复膜在喉肿瘤切除术后黏膜缺损修复中的临床研究

目的探讨应用异种（牛）脱细胞真皮基质修复膜修复喉部手术后黏膜缺损的I临床使用价值。方法对20例喉癌术后的黏膜缺损应用异种脱细胞真皮基质修复膜1期修复，其中声门区癌18例，其中T2NoMo8例，T3N1MO5例，T3N2MO4例，T4N2MO1例。声门上区癌2例，T3N1MO1例，T3N2MO1例。结果20例患者黏膜缺损修复均1期愈合。患者术后3-6个月应用电子喉镜复查，修复膜均已替代缺损黏膜组织，局部功能恢复；20例喉癌中6月生存率100％（11／11）；一年生存率100％（3／3），其余9例术后不足6月，正在观察之中。讨论异种脱细胞基质修复膜为修复喉肿瘤术后的黏膜缺损提供了一种新的方法，手术操作简便，有很好的临床应用价值。

HPV-DNA与TCT联合检测在宫颈癌诊断中的应用

目的:探讨高危型人乳头状瘤病毒(HPV)DNA检测与液基细胞学检查(TCT)在子宫颈病变诊断中的应用价值。方法:对600例患者分别做HPV-DNA和TCT检测,对其中一项或两项异常者做阴道镜病理活检,对病理结果阳性患者进行HPV-DNA和TCT检测结果分析。结果:其中一项或两项异常者150例,HPV-DNA检测阳性者(H组)为115例,其中病理结果阳性为39例,符合率为33.9%;TCT检测阳性者(T组)为76例,其中病理结果阳性为40例,符合率为33.9%;两项均为阳性者(H+T组)是56例,其中病理结果阳性为51例,符合率为91.1%。H组与H+T组比较x2=13.95,P<0.01;T组与H+T组比较x2=4.00,P<0.05,结果有显著差异。结论:HPV-DNA及TCT联合起来进行检测可以提高宫颈癌及癌前病变的筛查及早期诊断的检出率。

转录因子SOX4及C／EBPα在慢性粒细胞白血病中的表达及其意义

目的研究转录因子SOX4和C／EBPα在慢性粒细胞白血病（CML）患者中的表达水平及其临床意义。方法收集68例CML患者骨髓标本，包括57例初诊患者及11例应用伊马替尼治疗患者，以30名健康体检者的外周血单个核细胞作为健康对照。采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Westemblot技术检测SOX4和C／EBPd的表达情况，分析两者表达水平的相关性及应用伊马替尼对二者表达水平的影响。结果与健康对照组相比，SOX4mRNA在初诊CML患者中的表达水平升高（6．5455±1．4952比0．0596±O．0188，t=3．139，P=0．0023），而C／EBP仪表达水平降低（O．2388±0．0338比0．8105±0．0562，t=9．240，P〈0．0001）。两者的表达水平与初诊患者的年龄、性别、白细胞计数和bcr-abl均无相关性（均P〉0．05）。伊马替尼治疗的11例患者中，5例治疗后SOX4表达水平较治疗前降低（0．1206±O．0449比0．5579±0．1448，t=2．885，P=0．0204），C／EBP戏表达水平升高（0．3303±0．0424比0．1505±0．0465，t=2．855，P=0．0213）；6例治疗中发生急变，其SOX4表达水平高于治疗前（0．4699±0．1230比0．0502±0．0366，t=2．370，P=0．0393），C／EBPd表达水平降低（0．19794-0．0647比O．3787±0．0429，t=2．327，P=0．0423）。初诊CML患者SOX4与C／EBP α mRNA的表达水平呈负相关（r=-0．5546，P=0．0028）。结论初诊CML患者中SOX4表达水平明显升高，而C／EBP仅表达水平明显降低，两者表达呈负相关；伊马替尼治疗的急变患者SOX4表达水平比治疗前升高，而C／EBPα比治疗前降低。提示C／EBPd-SOX4信号轴可能参与了CML的发生、发展，且其与预后相关。SOX4为CML的靶向治疗提供了一个新方向。