胎儿角膜深低温保存对FAS/FASL蛋白表达的影响

目的:研究细胞凋亡信号分子Fas和细胞凋亡因子FasL在新鲜及深低温保存后胎儿角膜的表达情况。方法:应用免疫组织化学SABC法对33例不同胎龄(5mo至足月)胎儿角膜石蜡标本切片后,分别进行了Fas和FasL蛋白染色。结果:胎儿角膜细胞Fas蛋白及FasL蛋白全为胞质和/或胞膜着色。33/33例角膜上皮细胞、基质细胞及内皮细胞Fas蛋白阳性表达,经统计学分析,未发现不同月龄间有差异。33/33角膜上皮细胞及内皮细胞FasL蛋白阳性表达,经统计学分析,未发现不同月龄间有差异,角膜基质细胞FasL蛋白的表达为0/33。新鲜角膜和冷冻保存后角膜的Fas,FasL蛋白阳性表达量经统计学分析无差别。结论:新鲜和深低温保存后的5mo至足月龄胎儿角膜均可见Fas,FasL蛋白的表达。其中Fas在角膜上皮、基质和内皮细胞均表达,FasL在角膜上皮、内皮细胞表达,而基质细胞不表达。深低温保存对胎儿角膜Fas/FasL蛋白表达无影响。

雷帕霉素脂质体滴眼液对大鼠角膜新生血管抑制作用的研究

目的探讨雷帕霉素（RAPA）对大鼠角膜新生血管（CNV）的抑制作用及其机制。方法采刚成组设计法，将102只健康Wistar大鼠按随机数字法分为正常对照组（A组，6只）、碱烧伤空白对照组（B组，24只）、碱烧伤空白脂质体对照组（C组，24只）、碱烧伤RAPA脂质体治疗组（D组，24只），碱烧伤RAPA豆油治疗组（E组，24只），除正常对照组外，均选用右眼制作碱烧伤模型。利用薄膜分散法制备RAPA脂质体滴眼液，以正交设计法研究制备工艺中影响脂质体制备质量的主要影响因素，筛选出较理想的处方。碱烧伤后每日裂隙灯显微镜观察眼局部情况，并详细记录碱烧伤后大鼠角膜反应情况与新生血管生长情况，采用免疫组织化学方法与半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测角膜组织缺氧诱导因子1α（HIF-1α）与血管内皮生长因子（VEGF）的表达。实验结果采用方差分析与组间q检验进行统计学分析。结果（1）制得的RAPA脂质体为完整的类球形，平均粒径为145．2nm，包封率为90．02％；RAPA脂质体滴眼液中RAPA含量高，粒径合适。（2）B、C、D、E组碱烧伤后14d，CNV面积为（28．289±0．703）、（28．005±0．801）、（20．002±1．005）、（22．300±0．853）mm^2（F=159．62，P〈0．05）；D、E组分别与B、C组相比，CNV生长迟缓、稀疏，退化较早，相应组间CNV面积分别比较差异有统计学意义（q=47．80、46．20、34．60、32．90，均P=0．00）；D组与E组间比较，CNV退化更早，面积更小，差异有统计学意义（q=13．20，P=0．00）。碱烧伤后，HIF-1αmRNA、VEGFmRNA、HIF—1α蛋白、VEGF蛋白表达显著增强；其中，D、E组的HIF-1α、VEGF表达被显著抑制，D组变化更明显。结论脂质体是RAPA良好的药物载体。RAPA能通过HIF-1与VEGF途径显著抑制CNV的生长，有望成为防治CNV的一种有效方法。