热休克蛋白70对大鼠体外心脏细胞功能的影响

目的:观察重酒石酸去甲肾上腺素诱导后热休克蛋白70在体外心脏中的表达,并探讨热休克蛋白70对大鼠体外心脏细胞功能的影响。方法:实验于2003-03/09在华中科技大学同济医学院药理实验室进行。取成年雄性Wistar大鼠12只,随机分为2组,每组6只:①生理盐水组:腹腔注射生理盐水0.4mL,注射后24h取体外心脏,常规建立Langendorff体外心脏灌注模型,灌注15min转为工作心15min后停灌45min,恢复灌注15min改为工作心30min。②重酒石酸去甲肾上腺素组:腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素3.1μmol/kg(0.53mg/kg),24h后取体外心脏,方法同生理盐水组。采用Westernblot法测定心肌细胞中热休克蛋白70含量及生化指标。结果:12只大鼠全部进入结果分析。①热休克蛋白70含量(吸光度):重酒石酸去甲肾上腺素组明显高于生理盐水组(t=10.16,P<0.01)。②生化指标:重酒石酸去甲肾上腺素组三磷酸腺苷含量、超氧化物歧化酶活性、心肌线粒体Ca2+-ATPase活性、心肌线粒体合成三磷酸腺苷能力优于生理盐水组犤(13.67±2.60),(5.36±0.89)μmol/g;(2.44±0.14),(4.64±0.29)μkat/g;(6.77±0.90),(2.54±0.28)μkat/g;(124.22±13.58),(61.25±5.84)mmol/g;P均<0.01犦,丙二醛含量、肌酸激酶和乳酸脱氢酶漏出率、心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+含量低于生理盐水组(P<0.01)。结论:重酒石酸去甲肾上腺素诱导的热休克蛋白70的高表达对缺血再灌注未成熟心肌细胞功能具有明显的保护效应,可以减轻细胞内和线粒体内Ca2+超载而发挥其细胞保护效应,减轻再灌注损伤。

线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道在未成熟心肌缺血预处理中的作用

目的探讨线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道（mitoKATP）在未成熟心肌预处理保护中的作用，为未成熟心肌的保护提供依据。方法采用Langendorff离体心脏灌注模型，将24只新生（出生14～21d）日本长耳大白兔按随机数字表法分为4组：缺血／再灌注组（I／R组），心脏缺血预处理组（E1组），mitoKATP阻滞剂5-hydroxydecanoate（5-HD）＋心脏缺血预处理（E2组），mitoKATP通道开放剂Diazoxide（Diaz）预处理组（E3组）；检测心脏功能恢复率、心肌含水量、血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶漏出率、三磷酸腺苷（ATP）含量、超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量、心肌细胞内Ca^2＋含量、心肌线粒体Ca^2＋含量、心肌线粒体Ca^2＋-三磷酸腺苷酶活性（Ca^2＋-ATPase）、心肌线粒体合成ATP的能力；电子显微镜观察心肌超微结构。结果E1组、E3组心功能恢复优于I／R组和E2组，心肌含水量低于I／R组和E2组（P〈0．05）；E1组、E3组三磷酸腺苷含量、超氧化物歧化酶活性、心肌线粒体Ca^2＋-ATPase活性、心肌线粒体合成ATP的能力均优于I／R组和E2组（P〈0．05），丙二醛含量、血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶漏出率、心肌细胞内Ca^2＋含量、心肌线粒体Ca^2＋含量低于I／R组、E2组（P〈0．05）；E1组、E3组心肌超微结构损伤较I／R组和E2组明显减轻。结论心肌缺血预处理对未成熟心肌具有明显的保护作用，其机制可能是通过mitoKATP通道的开放起作用。

改良心肌保护液对不同时间热缺血供心移植效果的影响

目的研究对短暂常温热缺血的猪供心采用改良心肌保护液低温保存后对供心结构和功能的保护作用。方法建立猪原位心脏移植模型,分别采用St.Thomas液灌注和改良心肌保护液保存供心。24只家猪随机分为对照组(C组)、5min热缺血组(W1组)、10min热缺血组(W2组)和改良心肌保护液组(E组)。C组,低温灌注后切取供心,4℃保存4h和心脏移植后测定心肌含水率(MWC)、丙二醛(MDA)、三磷酸腺苷(ATP)含量和心脏超微结构观察;W1组,供心灌注低温保护液前常温缺血5min,余同C组;W2组,供心灌注低温保护液前常温缺血10min,余同C组;E组,供心常温缺血5min后用改良保护液灌注和保存,余同C组。均采用标准法移植心脏。心脏移植后观察移植后供心复跳情况、平均动脉压、心排血量(CO)及早期肌钙蛋白I(cTnI)的漏出水平。结果W1和W2组供心低温保存后MWC、MDA高于C组,而ATP明显降低(P<0.05);E组与C组相比,供心低温保存后MWC、MDA增高,ATP减少(P>0.05);超微结构,W1组损伤较C组和E组明显加重,W2组损伤呈不可逆改变。供心移植后,C组和E组cTnI漏出少,血液动力学指标好于W1、W2组(P<0.05)。结论改良心肌保护液可有效改善供心因短暂常温热缺血而造成的结构和功能损害。供心灌注低温保护液前常温缺血10min可造成供心不可逆改变。

下肢缺血预处理对未成熟心肌的保护作用

目的探讨下肢缺血预处理(LIP)对未成熟心肌保护作用的机制。方法采用下肢缺血预处理动物Langendorff离体心脏灌注模型,将30只日本长耳大白兔采用随机数字表法分为5组:缺血-再灌注损伤(I/R)组(n=6),建立灌注模型,灌注KH液15min转为工作心15min,全心停灌45min,恢复灌注15min改为工作心30min;E1组(n=6),动物麻醉后反复3次阻断双下肢血流5min,松开5min,建立模型,灌注15min转为工作心15min,全心停灌45min,恢复灌注15min改为工作心30min;E2组(n=6),双下肢缺血预处理前静脉注射超氧化物歧化酶至双下肢缺血预处理完毕,重复E1组方法;E3组(n=6),静脉注射蛋白激酶C(PKC)阻滞剂polymyxin(PMB),时间10min,重复E1组方法;E4组(n=6),静脉注射三磷酸腺苷(ATP)敏感性钾通道(mitoKATP)阻滞剂5-HD,时间10min,重复E1组方法。观察左心室功能恢复、心肌含水量(MWC)、血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、心肌组织ATP和丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、超氧阴离子自由基(O2.-)等指标。结果E1组的左心室功能恢复优于I/R组、E2组、E3组、E4组(P<0.05),ATP含量、SOD活性均优于其它各组(P<0.05),心肌含水量低于其它各组(P<0.05),MDA含量、CK、LDH漏出率低于其它各组(P<0.05);I/R组、E2组、E3组、E4组的以上指标比较均差异无统计学意义(P>0.05)。预处理前、后E1组、E3组、E4组的O2.-差异有统计学意义(P<0.05)。结论下肢缺血预处理对未成熟心肌具有明显的保护作用,其机制是通过PKC通路和mitoKATP通道起作用。

金属硫蛋白对未成熟心肌和心肌间质的保护作用

目的探讨诱导金属硫蛋白(MT)在未成熟心肌中的表达对缺血-再灌注未成熟心肌和心肌间质的影响.方法将24只兔(14～21d)按随机数字表法分为4组,每组6只,对照组:腹腔注射蒸馏水0.3 ml,24 h后取离体心脏行Langendorff灌注;组1、组2和组3在腹腔注射3.6%ZnSO4(1.5 ml/kg),分别于注射后12 h、24h和48h取离体心脏行Langendorff灌注.测定心肌细胞中MT含量、血流动力学、生化指标,观察心肌超微结构改变.结果 组2、组3与对照组、组1比较,MT含量、三磷酸腺苷(ATP)含量、超氧化物歧化酶活性、羟脯氨酸含量、心肌线粒体[Ca2+ATPase]m、心肌线粒体合成ATP的能力明显增高(P＜0.01),心肌含水量、丙二醛含量、心肌肌酸激酶、乳酸脱氢酶漏出率、心肌线粒体Ca2+含量、心肌线粒体[Ca2+]m和内皮素含量明显降低(P＜0.01),心肌超微结构损伤明显减轻.结论腹腔注射ZnSO4可诱导心肌MT长时间表达,MT可减轻未成熟心肌和心肌间质的缺血-再灌注损伤.

肾缺血预处理对未成熟心肌的保护作用

目的探讨肾缺血预处理对未成熟心肌保护的影响,为未成熟心肌的保护提供新的方法。方法建立兔Langendorff灌注模型,将18只幼兔随机分为3组,缺血/再灌注组(I/R组):灌注15min转为工作心15min,停灌45min,恢复灌注15min改为工作心30min;心脏缺血预处理组(CIP组):灌注15min转为工作心15min,反复2次缺血5min再灌注5min,重复I/R组的方法;肾缺血预处理组(RIP组):反复3次阻断左肾动脉血流5min再灌注5min,取离体心脏,灌注15min转为工作心15min,重复I/R组的方法。观察血流动力学、生化等指标。结果CIP组和RIP组的冠状动脉流量(CF)、心排血量(CO)、左心室收缩压(LVSP)恢复百分率均较I/R组升高,左心室舒张期末压(LVEDP)恢复率则较I/R组降低,差异有统计学意义(P<0.01);三组间比较,HR、AF恢复率差异无统计学意义(P>0.05);RIP组与CIP组比较各指标恢复率差异无统计学意义(P>0.05)。RIP组与I/R组比较:心肌含水量(MWC)、血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、ATP含量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+-ATPase活性、心肌线粒体Ca2+含量、心肌线粒体合成ATP能力差异有统计学意义(P<0.01),RIP组和CIP组比较各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论肾缺血预处理对未成熟心肌具有心肌保护作用。

心肌缺血预处理对未成熟心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨心肌缺血预处理 (MIP)对未成熟心肌bcl- 2、bax、fas蛋白表达的影响。方法 采用兔Langen dorff模型 ,2 4只幼兔随机分为 3组 ,对照组 (C ,n =8) :仅灌注KH液 180min ,然后取标本 ;缺血 /再灌注组 (I/R ,n=8) :灌注 2 0min后 ,停灌 4 5min ,复灌 12 0min ;心肌缺血预处理组 (MIP ,n =8) ,灌注 2 0min ,反复 2次停灌 5min ,复灌 5min ,然后重复I/R组缺血 /再灌方法。以凋亡细胞原位标记、琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段梯及bcl- 2、bax、fas蛋白表达作为检查指标。结果 琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段梯 :MIP组与I/R组比较 ,光密度明显减弱 ;MIP组与I/R组比较 ,bcl- 2表达明显增多 ,bax、fas表达明显减少。结论 MIP通过影响bcl- 2、bax、fas基因蛋白的表达减少心肌细胞凋亡。

热休克蛋白70对未成熟心肌细胞功能的影响

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)对未成熟心肌细胞功能的影响。方法健康新生长耳大白兔随机分为2组。对照组(C):腹腔注射生理盐水0.4ml,注射后24h取离体心脏,常规建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注15min转为工作心15min后停灌45min,恢复灌注15min改为工作心30min。实验组(E):腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素,24h后取离体心脏,方法同对照组。测定心肌细胞中HSP70含量及相关生化指标并作统计学处理比较。结果HSP70含量E组明显高于C组;E组ATP含量、SOD活性方面均优于C组(P<0.01),MDA含量、CK、LDH漏出率方面均低于C组(P<0.01),心肌线粒体Ca2+-ATPase活性、[ATP]m均优于C组(P<0.01),心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+含量低于C组(P<0.01)。结论HSP70对缺血再灌注未成熟心肌细胞功能具有明显的保护作用。

金属硫蛋白对离体心脏心肌间质的保护作用

目的 探讨金属硫蛋白(MT)对离体心脏心肌间质的影响。方法 Wistar大鼠16只,分为2组:对照组(C,n=8),腹腔注射蒸馏水0.5ml 24h后取离体心脏行离体灌注(Langendorff模型),测定心功能,然后灌注HTK心脏保护液,4C保存3h后再行Langendorff灌注25min;实验组(E,n=8)腹腔注射3.6％硫酸锌(1.5 ml/kg)24 h后取离体心脏,处理方法同C组。以心肌细胞中MT含量、血流动力学指标、心肌组织羟脯氨酸(HP)含量、内皮素(ET)含量和心肌超微结构等作为观察指标。结果MT含量E组与C组比较明显增高;E组心功能恢复方面优于C组(P<0.05),HP含量优于C组(P<0.01),ET含量低于C组(P<0.01),心肌超微结构损伤较C组明显减轻。结论MT对供心心肌间质具有保护作用。

热休克蛋白70对未成熟心肌间质保护作用的研究

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)对未成熟心肌间质的影响。方法健康新生长耳大白兔随机分为2组。对照组:腹腔注射生理盐水0.4ml,注射后24h取离体心脏,常规建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注15min转为工作心15min后停灌45min,恢复灌注15min改为工作心30min;观察组:腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素,24h后取离体心脏,方法同对照组。测定心脏舒张功能指标、心肌细胞中HSP70含量、心肌羟脯氨酸(HP)和血清内皮素(ET)含量。结果HSP70含量观察组明显高于对照组;观察组HP含量高于对照组(P<0.05),ET含量低于对照组(P<0.05)。结论HSP70可明显减轻未成熟心肌间质缺血再灌注损伤。

金属硫蛋白对离体心脏NO、NOS表达的影响

目的探讨金属硫蛋白(MT)对离体心脏一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)的影响。方法Wistar大鼠16只 ,分为2组 :对照组(C,n=8) ,腹腔注射蒸馏水0.5ml24h后取离体心脏灌注HTK心脏保护液 ,4℃保存3h后建立Langendorff灌注模型 ,灌注KH液2h ;实验组 (E ,n=8)腹腔注射3.6%Zn SO4(1.5ml/kg)24h后取离体心脏 ,处理方法同C组。以心肌MT含量、NO、NOS的含量、心肌生化指标作为观察指标。结果MT含量E组明显较C组增高 (P<0.01) ,NO、NOS的含量E组较C组明显增多(P<0.01) ,生化指标E组明显优于C组。结论心肌MT表达影响NO、NOS的表达 ,可能是MT发挥心肌保护作用的因素之一。

同种异体带瓣主动脉移植治疗累及主动脉瓣的感染性心内膜炎临床分析

目的:回顾分析30例应用低温保存的同种异体带瓣主动脉对累及主动脉瓣的感染性心内膜炎的治疗结果。 方法:30例主动脉瓣炎或脓肿患者采用低温保存的同种异体带瓣主动脉行主动脉根部置换手术,术后随访5-86个月观察临床结果。 结果:随访5-86(40.8±15.3)个月。术后早期死亡率3.3％(1/30),远期死亡率6.7％(2/30);与术前比较心功能明显改善(P<0.01);术后随访心内膜炎的发生率占6.7％(2/30);生存者中瓣膜无或有轻度反流81.5％(22/27),中度反流18.5％(5/27)。 结论:同种异体带瓣主动脉移植治疗感染性主动脉瓣炎或脓肿具有较好的疗效。

金属硫蛋白表达对未成熟心肌间质保护作用的研究

目的 :探讨诱导金属硫蛋白 (MT)在未成熟心肌中的表达对缺血 再灌注未成熟心肌间质的影响。方法 :采用Langendorff离体灌注模型 ,分为 4组 :对照组 (C ,n =9) ,腹腔注射蒸馏水 0 3mL ,按注射后时间 12h、2 4h和 4 8h取离体心脏 ,灌注KH液 15min转为工作心 15min ,全心停灌注 4 5min ,恢复灌注 15min改为工作心 30min ;E1 2h组 (n =6 )、E2 4h 组 (n =6 )、E4 8h 组 (n =6 )各组分别按腹腔注射 3 6 %ZnSO4 (1 5mL kg)后 12h、2 4h和 4 8h取离体心脏 ,常规建立Langendorff灌注模型 ,方法同C组。以心肌细胞中MT含量、血流动力学指标、心肌组织羟脯氨酸 (HP)含量、内皮素 (ET)含量作为观察指标。结果 :腹腔注射ZnSO4 后 12hMT开始表达 ,2 4h达高峰 ,4 8h仍在高表达水平。MT含量在E2 4h、E4 8h组与C、E1 2h组比较明显增高 ;E2 4h、E4 8h组在心功能恢复方面均优于C组和E1 2h组 (P <0 0 5 ) ,在HP含量优于C组和E1 2h组 (P <0 0 1) ,在ET含量低于C组和E1 2h组 (P <0 0 1)。结论 :腹腔注射ZnSO4 可诱导心肌MT长时间表达 ,MT可减轻未成熟心肌间质的缺血 再灌注损伤。

金属硫蛋白在供心中的表达和作用的研究

目的 探讨金属硫蛋白 (MT)在供心中的表达和作用。方法 Wistar大鼠 2 4只 ,分为 4组 :对照组 (C ,n =6 ) ,腹腔注射蒸馏水 0 5mL 2 4h后取离体心脏行Langendorff灌注 ,然后灌注HTK心脏保护液 ,4℃保存 3h后再行Langendorff灌注12 0min ;实验组 1组 (E1,n =6 )腹腔注射ZnSO412h后取离体心脏 ,处理方法同C组 ;实验组 2组 (E2 ,n =6 )腹腔注射ZnSO42 4h后取离体心脏 ,处理方法同C组 ;实验组 3组 (E3,n =6 )腹腔注射ZnSO448h后取离体心脏 ,处理方法同C组。测定心肌细胞中MT含量、心肌含水量 (MWC)、血清肌酸激酶 (CK)和乳酸脱氢酶 (LDH)漏出率、ATP含量、丙二醛 (MDA)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)活性、心肌细胞内Ca2 +含量、心肌线粒体Ca2 +-ATPase活性及其Ca2 +含量、心肌线粒体合成ATP能力 [ATP]m。结果 MT含量E2和E3组较C、E1组明显增高 (P <0 0 1) ;E2和E3组ATP含量、SOD活性方面均优于C组 (P <0 0 5 ) ,心肌含水量、MDA含量、CK、LDH漏出率方面均低于C组 (P <0 0 5 ) ,心肌线粒体Ca2 +-ATPase活性、[ATP]m 均优于C组 (P <0 0 1) ,心肌细胞内Ca2 +含量、心肌线粒体Ca2 +含量低于C组 (P <0 0 1)。结论 腹腔注射ZnSO4可诱导供心MT长时间表达 。

酸性HEPES-KH液对未成熟心肌和心肌间质的保护作用

目的 观察不同 p H值 N- 2 -羟乙基哌嗪 - N′- 2 -乙磺酸 ( N- 2 - hydroxyethyl piperazine- N′- 2 - ethanesulfonicacid,HEPES) -重碳酸盐缓冲液 ( Krebs- Henseleit,KH)复灌液对缺血 -再灌注未成熟心肌和心肌间质的影响。 方法采用 L angendorff离体灌注模型将 2 4只大白兔分为 3组 ,对照组 ( n=8)、缺血 -再灌注组 ( n=8)和酸性灌注组 ( n=8) ,观察其左心室功能恢复率、心肌含水量 ( MWC)、血清肌酸激酶 ( CK)、乳酸脱氢酶 ( L DH)漏出率 ,心肌组织三磷酸腺苷 ( ATP)、丙二醛 ( MDA)含量和超氧化物歧化酶 ( SOD)活性 ,心肌羟脯氨酸 ( HP)和血清内皮素 ( ET)含量等指标。结果 酸性灌注组在左心室功能恢复率、ATP含量、SOD活性、HP含量等方面均优于缺血 -再灌注组 ( P<0 .0 5 ) ,在MWC、MDA含量、CK、L DH漏出率和 ET含量等均低于缺血 -再灌注组 ( P<0 .0 5 )。 结论 p H反常是缺血 -再灌注损伤的重要原因 ,复灌初期应用梯度酸性 HEPES- KH液有助于未成熟心肌和心肌间质的保护。

热休克蛋白70对缺血再灌注未成熟心肌间质的保护作用

目的观察热休克蛋白70在未成熟心肌中的表达及对缺血再灌注未成熟心肌间质的影响。方法①实验于2001-12/2002-06在华中科技大学同济医学院药理实验室完成。选用出生14～21d的健康新生长耳大白兔12只。随机将兔分为2组对照组和实验组,每组6只。②对照组腹腔注射生理盐水0.4m L,注射后24h取体外心脏,常规建立Langendorff体外心脏灌注模型,灌注15m in转为工作心15m in后停灌45m in,恢复灌注15m in改为工作心30m in;实验组腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素,24h后取体外心脏,方法同对照组。③采用蛋白印迹法测定心肌细胞中热休克蛋白70含量。按公式计算羟脯氨酸含量(样本A值/标准A值×10×稀释倍数×1/组织质量)。采用均相放射免疫竞争法直接测定血浆内皮素1水平。④计量资料差异比较采用t检验。结果兔12只均进入结果分析。①实验组心肌细胞中热休克蛋白70含量(A值)明显高于对照组(P<0.01)。②实验组兔心肌羟脯氨酸含量明显高于对照组(P<0.01),血清内皮素1水平明显低于对照组(P<0.01)。结论腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素诱导未成熟大白兔心脏热休克蛋白70表达,在注射24h后热休克蛋白70表达明显增多,热休克蛋白70可明显减轻未成熟心肌内皮素的释放和心肌胶原的降解。

不同心肌保护液对供心移植保护作用的对比研究

目的 研究改良心肌保护液对短暂常温热缺血供心移植后的保护作用。方法 18只家猪随机分为 3组 ,对照组 (C组 ) :不缺血下供心低温灌注St.Thomas液后切取 ,4℃保存 4h后行原位心脏移植 ;热缺血组 (W组 ) :供心灌注低温St.Thomas保护液前常温缺血 5min ,4℃保存 4h后行原位心脏移植 ;改良心肌保护液组 (E组 ) :供心常温缺血 5min后用改良保护液灌注和保存 ,4℃保存 4h后行原位心脏移植。以心脏排出量 (CO)、心肌含水率、丙二醛(MDA)和ATP含量、肌钙蛋白I(cTnI)和心脏超微结构作为观察指标。结果 心肌含水率、MDA含量和cTnI含量E组明显低于W组 (P <0 .0 5 ) ;CO和ATP含量E组明显高于W组 (P <0 .0 5 ) ;E组与C组相比无显著差异 (P>0 .0 5 ) ;超微结构 ,E组损伤较W组明显减轻。结论 改良心肌保护液可有效改善供心因短暂常温热缺血而造成的结构和功能损害。

金属硫蛋白对离体缺血再灌注未成熟心肌细胞功能的影响(英文)

背景：实验已证实金属硫蛋白对成熟心肌有保护作用，但对于未成熟心肌的保护作用尚缺乏实验证据。 目的：探讨诱导金属硫蛋白在未成熟心肌中的表达及对缺血再灌注未成熟心肌细胞功能的影响，为未成熟心肌的保护提供有效的方法。 设计：完全随机分组设计，对照实验。 单位：青岛大学医学院附属青岛市立医院妇产科和心脏外科，华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科。 材料：实验于2001-10／2002-09在华中科技大学同济医学院药理实验室(安全级别一级)完成。选用出生14～21d日本长耳大白兔27只，雌雄不拘。随机将兔分为4组：对照组9只，腹腔注射ZnSO_4 12，24，48h组各6只。 方法：①对照组：腹腔注射蒸馏水0．3mL，按注射后12，24和48h取离体心脏，灌注重碳酸氢盐缓冲液15min转为工作心15min，全心停灌45min，恢复灌注15min改为工作心30min。腹腔注射ZnSO_1 12，24，48h组：分别按腹腔注射36g／L ZnSO_4 12，24和48h后取离体心脏，余方法同对照组。②计算心肌肌酸激酶和乳酸脱氢酶15min漏出率：心肌肌酸激酶(乳酸脱氢酶)(IU／L)×15min漏出液(L)／[1000×心肌湿重(g)]。③采用荧光素酶法心肌组织三磷酸腺苷含量。④心肌线粒体Ca^(2+)-三磷酸腺苷酶活性按Jones方法在Shimadzu UV-1200型紫外分光光度计上测定。⑤在电感耦合等离子体原子发射光谱仪上测定线粒体Ca^(2+)含量。⑥取制备的心肌线粒体悬液按Nayler法测定线粒体合成三磷酸腺苷能力。⑦采用^(109)Cd-血红素饱和法测定心肌组织中金属硫蛋白含量。组间计量资料差异比较采用t检验。 主要观察指标：各组兔心肌细胞中金属硫蛋白含量、肌酸激酶和乳酸脱氢酶漏出率、三磷酸腺苷含量、心肌细胞内Ca^(2+)含量、心肌线粒体Ca^(2+)-三磷酸腺苷酶活性及线粒体Ca^(2+)含量、心肌线粒体合成三磷酸腺苷能力比较。结果：日本长耳大白兔27只均进入结果分析。①乳酸脱氢酶漏出率、肌酸激酶漏出率、心肌Ca^(2+)含量、线粒体Ca^(2+)含量：腹腔注射ZNSO424，48h组明显低于对照组和腹腔注射ZnSO_412h组(P<0．01)；。②心肌三磷酸腺苷含量、心肌线粒体Ca^(2+)-三磷酸腺苷酶活性、心肌线粒体合成三磷酸腺苷能力、心肌金属硫蛋白含量：腹腔注射ZnSO_4 24，48h组明显高对照组和腹腔注射ZnSO_4 12h组(P<0．05～0．01)。 结论：腹腔注射ZnSO_4可诱导心肌金属硫蛋白长时间表达，金属硫蛋白可减轻未成熟心肌细胞缺血再灌注损伤。

肾缺血预处理对未成熟心肌凋亡蛋白表达的影响

目的 :探讨肾缺血预处理 (RIP)对未成熟心肌细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法 :采用兔Langendorff模型 ,幼兔 2 4只随机分为 3组 ,对照组 (C ,n =8) :仅灌注KH液 180min ,然后取标本 ;缺血 /再灌组 (I/R ,n =8) :灌注 2 0min后 ,停灌 4 5min ,再灌 12 0min ;肾缺血预处理组 (RIP ,n =8) ,反复 2次阻断肾血流 5min/放开 5min ,建立Langendorff模型 ,然后重复I/R组缺血 /再灌方法。以凋亡细胞原位标记与半定量分析、琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段梯及Bcl 2、Bax、Fas基因蛋白的表达作为观察指标。结果 :凋亡细胞原位标记与半定量分析 :RIP组与I/R组比较 ,心肌细胞凋亡率显著减少 ;琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段梯 :RIP组与I/R组比较 ,光密度显著降低 ;RIP组与I/R组比较 ,Bcl 2表达明显增多 ,Bax、Fas表达显著减少。结论 :RIP可能通过调节Bcl 2、Bax、Fas蛋白的不同表达影响心肌细胞的凋亡。

金属硫蛋白对缺血/再灌注未成熟心肌细胞功能的影响

目的探讨诱导金属硫蛋白(MT)在未成熟心肌中的表达对缺血/再灌注未成熟心肌细胞功能的影响。方法采用Langendorff离体灌注模型 ,大白兔分为4组 :对照组(C ,n=9) ,腹腔注射蒸馏水0.3ml,按注射后时间12、24、和48h取离体心脏 ,灌注KH液15min转为工作心15min,全心停灌45min,恢复灌注15min改为工作心30min ;E12h组 (n=6)、E24h组 (n=6)、E48h组 (n=6)各组分别按腹腔注射3.6 %ZnSO4(1.5ml/kg)后12、24和48h取离体心脏 ,常规建立Langendorff灌注模型。方法同C组。以心肌细胞中MT含量、CK和LDH漏出率、ATP含量、心肌细胞内Ca2 +含量、心肌线粒体Ca2 +-ATPase活性及其Ca2 +含量、心肌线粒体合成ATP能力[ATP]m作为观察指标。结果腹腔注射ZnSO4 后12hMT开始表达 ,24h达高峰 ,48h仍在高表达水平。MT含量在E24h、E48h组与C、E12h组比较明显增高 ;E24h、E48h组ATP含量优于C组和E12h 组 (P<0.05) ,CK、LDH漏出率均低于C组和E12h组(P<0.05) ,心肌线粒体Ca2 +-ATPase活性、[ATP]m均优于C组和E12h组(P<0.01) ,心肌细胞内Ca2 +含量、心肌线粒体Ca2 +含量低于C组和E12h组(P<0.01)。结论腹腔注射ZnSO4 可诱导心肌MT长时间表达 ,MT可减轻未成熟心肌细胞缺血/再灌注损伤。