TLR4在基因突变小鼠C3H/HeJ坐骨神经损伤修复中的作用

目的探究TLR4突变对小鼠坐骨神经损伤修复产生的影响。方法选择TLR4基因突变型C3H/HeJ小鼠和野生型C3H/HeN小鼠作为实验动物,实验设C3H/HeJ夹伤组(HeJ)、C3H/HeN夹伤组(HeN)及C3H/HeN假手术组(control)。在无菌操作条件下,构建小鼠坐骨神经夹伤模型。分别于术后6、12、24和48 h,qPCR检测损伤神经IL-1β、IL-6、TNF-α因子的表达。术后12 h和24 h,Western blot检测损伤神经p75NTR蛋白的表达。术后1周、2周、4周和8周取小鼠坐骨神经,HE染色观察神经恢复情况,免疫组化检测GAP-43、p75NTR蛋白表达情况。坐骨神经功能指数(sciatic functional index,SFI)评价小鼠运动功能恢复情况。结果在6、12和24 h时,与control组相比,HeN组IL-1β和TNF-α的表达量显著升高(P<0.01),而HeJ组的变化不明显。HeN组与HeJ组之间TNF-α的表达差异显著(P<0.001)。与control组相比,在6 h时HeN组IL-6的表达显著上升(P<0.001)。Western blot结果显示,与HeN组相比,坐骨神经损伤后12 h或24 h时HeJ组小鼠p75NTR蛋白表达显著升高(P<0.001)。HE染色表明,与HeN组相比,HeJ组小鼠淋巴细胞表达较少,炎性反应较弱。免疫组化结果发现,与HeN组相比,HeJ组小鼠GAP43和p75NTR的表达显著升高(P<0.01)。SFI结果显示,与HeN组相比,HeJ组小鼠的SFI评分在术后同期相对较高,神经恢复更好。结论成功构建突变小鼠坐骨神经损伤模型,揭示出TLR4突变可减少炎性因子的释放而加快坐骨神经修复。为临床上治疗周围神经损伤提供了实验理论依据。

CXCL1在乳癌MCF-7细胞上皮-间质转化中作用

目的探讨趋化因子CXC型趋化因子配体1(CXCL1)对人乳癌细胞MCF-7迁移能力和上皮-间质转化(EMT)的影响及其机制。方法体外培养人乳癌细胞MCF-7,分为对照组、CXCL1处理组、CXC趋化因子受体2(CXCR2)抑制剂组,应用CCK8方法检测各组细胞增殖活性,以ELISA法检测各组细胞E-cadherin、Vimentin、p-PI3K、p-AKT蛋白表达,RT-PCR方法检测E-cadherin、Vimentin mRNA表达。结果 CCK8检测结果显示,与对照组比较,CXCL1处理组细胞增殖活性升高(F=58.89,q=8.96,P<0.01),CXCR2抑制剂组细胞增殖活性降低(q=6.31,P<0.05)。RT-PCR结果显示,与对照组相比较,CXCL1处理组E-cadherin mRNA表达下调(t=4.07,P<0.01),Vimentin mRNA表达上调(t=3.62,P<0.05)。ELISA检测结果显示,与对照组比较,CXCL1处理组E-cadherin蛋白表达下调(F=8.95,q=2.02,P<0.05),Vimentin蛋白表达上调(F=111.50,q=14.48,P<0.01),CXCR2抑制剂组E-cadherin表达上调(q=2.04,P<0.05),Vimentin蛋白表达下调(q=6.08,P<0.05);与对照组比较,CXCL1处理组PI3K、PAKT蛋白表达明显升高(F=60.35、28.15,q=10.52、5.37,P<0.01),CXCR2抑制剂组细胞内p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低(q=4.65、4.97,P<0.05)。结论乳癌细胞可能通过CXCL1/CXCR2轴活化PI3K/AKT信号通路发生EMT。