小鼠角膜上皮细胞永生化细胞系的建立及表型鉴定

目的探讨小鼠角膜上皮细胞永生化细胞系的建立方法,并鉴定其表型的稳定性。方法提取小鼠角膜上皮原代细胞,以猴空泡病毒40大T抗原(SV40-LT)慢病毒感染小鼠角膜上皮原代细胞建立永生化细胞系。通过HE染色与免疫荧光染色对角膜上皮组织表型和标记物(K12、Pax6、Ki-67)进行鉴定。提取原代角膜上皮细胞并对其角膜上皮细胞分层蛋白K14进行鉴定,观察细胞明场视野评估细胞形态学特征。对转染后的P1和P8代细胞的部分标志物(K12、Pax6、Ki-67、ABCG2、K14)进行鉴定。采用结晶紫染色法观察转染后的P1和P8代细胞克隆的形成能力。结果小鼠角膜上皮组织中K12、Pax6、Ki-67染色阳性;P1、P8代小鼠角膜上皮细胞中K12、Pax6、Ki-67、K14和ABCG2染色阳性,上述标志物阳性率比较,差异均无显著性(P>0.05),P1与P8代小鼠角膜上皮细胞克隆能力无明显差异(P>0.05)。结论使用SV40-LT慢病毒转染小鼠角膜上皮,成功建立永生化小鼠角膜上皮细胞系,表型稳定且稳定增殖。

基于“雨课堂”系统解剖学混合教学模式探讨与实践

目的探讨基于“雨课堂”的混合教学模式在解剖学教学中的应用及效果。方法随机取我校2017级临床医学(5+3)专业2个班61名学生,借助“雨课堂”智慧教学工具进行了系统解剖学课程混合教学。统计学生期末卷面考试成绩、平时成绩和综合成绩,对学生使用“雨课堂”情况及效果进行问卷调查。结果学生期末卷面平均成绩为(73.22±13.20)分,综合平均成绩(76.94±10.75)分,及格率95.08%。问卷调查显示,学生对“雨课堂”学习和教学效果非常满意占85.25%,基本满意14.75%;学生认为“雨课堂”改善了课堂氛围,促进了课外学习和个人学习主动性,提高了学习效果,接受和认可“雨课堂”的混合教学模式。结论基于“雨课堂”的系统解剖学混合教学可以促进学生学习主动性和积极性、提升教学效果。

X线联合超声Logistic模型预测乳腺癌腋窝淋巴结转移的价值分析

目的分析与乳腺癌腋窝淋巴结转移相关的X线和超声征象,构建Logistic回归模型并评估其对术前预测腋窝淋巴结状态的临床价值。方法选取2015年1月至2022年1月高密市人民医院收治的312例原发性乳腺癌患者作为研究对象,根据是否发生腋窝淋巴结转移(ALNM)分为转移组(n=141)与未转移组(n=171)。所有患者均行X线及超声检查,比较未转移组与转移组乳腺浸润性导管癌的X线征象、超声征象,采用多因素Logistic回归分析ALNM的影响因素;绘制ROC曲线分析X线、超神征象及Logistic回归模型预测乳腺癌腋窝淋巴结转移的价值。结果两组X线原发灶长径、皮肤增厚、乳头回缩、淋巴结门和淋巴结密度比较差异有统计学意义(P<0.05),两组象限位置、钙化和边缘毛刺比较差异无统计学意义;两组超声原发灶长径、淋巴结皮髓质分界和淋巴结皮质比较差异有统计学意义(P<0.05),两组原发灶高回声晕、后场回声、血流分级和纵横比比较差异无统计学意义。多因素Logistic回归分析结果显示,X线征象的乳房皮肤增厚征象、超声淋巴结皮质增厚征象是乳腺浸润性导管癌患者发生ALNM的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,X线乳房皮肤增厚征象和超声征象的淋巴结皮质增厚预测淋巴结转移的AUC分别为0.652(95%CI:0.589~0.714)、0.725(95%CI:0.666~0.784),模型预测ALNM的AUC为0.795(95%CI:0.742~0.848),预测效能较好。结论乳腺癌患者的X线皮肤增厚征象和超声腋窝淋巴结皮质增厚征象与ALNM有关,X线联合超声的Logistic模型可较准确地预测乳腺癌患者的腋窝淋巴结状态。

基于前列腺解剖的比较治疗良性前列腺增生不同微创术式的临床研究

目的比较基于前列腺解剖的、治疗良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)的不同微创术式的安全性和有效性.方法选取120例需要进行外科手术治疗的BPH患者,依据对患者实施的手术方式进行分组,分为三组,分为经尿道列腺钬激光剜除术组(钬激光剜除组)、经尿道前列腺等离子剜除术组(等离子剜除组)和经尿道前列腺电切术组(电切组),每组40例.术前对患者进行常规检查,并进行术前评估.结果基于前列腺解剖的钬激光剜除组、等离子剜除组的手术时间、术中出血量、膀胱冲洗时间、导尿管留置时间、术后住院时间均短于电切组(P<0.001).结论三组患者在前列腺解剖的基础上因选择的手术方式不同对手术的效果存在一定的差异,前列腺剜除术较普通电切术的创伤更小,安全可靠,更易恢复.剜除术式选择的能量平台不同,临床效果亦不同,激光剜除术式优于等离子剜除术式.

以临床应用为导向的局部解剖学整合实验教学设计与实践

探讨以临床应用为导向的局部解剖学整合实验教学设计方案与实践效果。方法 通过优化师资配置、引入临床素材、改进实验流程和教学方法、加强形成性评价,建立以临床应用为导向的局部解剖学整合实验教学设计方案,进行了教学实践。结果 实验班实验考核成绩、综合评价成绩均高于对照班;绝大多数实验班学生认为整合实验课能够促进小组合作学习和个人学习的主动性、提高了解决实际问题的意识和学习效果,并认可多元化教学评价方法。结论 以临床应用为导向的局部解剖学整合实验教学设计方案有效可行。

冠脉造影诊断冠状动脉粥样硬化与心肌桥形态特点的关系

目的:探究冠脉造影诊断冠状动脉粥样硬化(AS)与心肌桥形态特点的关系。方法:选取2017年9月-2018年2月期间来我院诊断的冠脉病变患者200例,其中检出心肌桥51例。均行选择性冠脉造影(PCA)检查。结果:MB多发生于LAD43.1%(22/51),且单发肌桥概率94.1%(48/51)高于多发肌桥概率5.9%(3/51)(P<0.05),AS合并MB中壁冠脉狭窄≥50%概率为39.2%(20/51),且多发生于MB近端55.0%(11/20)。壁冠脉AS与MB长度、位置存在正性相关(P<0.05)。结论:PCA检出心肌桥中较多为单发,且以左前降支居多,存在促进近段血管形成粥样硬化的风险,而心肌桥厚度与AS存在相关性,因此在诊断中需格外关注。

常染色体显性遗传视网膜色素变性家系的临床表型和致病突变基因位点鉴定

目的分析一个中国北方视网膜色素变性(RP)家系病人的临床表型及致病基因突变,寻找致病基因突变位点,探讨表型与基因型之间的关系。方法收集中国北方地区的一个RP家系的临床资料,共有11例家庭成员参与研究,其中包括5例病人和6例正常成员。完善该家系内所有参与研究成员的眼科检查,提取该家系中全部成员的外周血基因组DNA,选取先证者进行视觉系统相关目标区域全外显子组测序,最终通过家系内共分离验证致病突变,进一步分析该突变与病人表型间的关系。结果临床检查显示该家系内5例病人均符合典型的RP表型,目标区域外显子组测序显示核受体亚科2第E组第3个成员(NR2E3)基因c.166G>A突变,该突变导致了NR2E3基因所编码蛋白第56号氨基酸由甘氨酸变为精氨酸(p.56,G>R);保守性分析显示该突变在各物种中高度保守,生物信息学预测结果表明该突变具有较高的致病性。结论该家系内符合典型RP表型病人目标区域外显子组测序发现了NR2E3基因上一个已知的突变(c.166G>A,p.56,G>R),该突变在家系内共分离。

靶向bFGF及USCs复合BAM对膀胱重建影响

目的研究靶向碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、尿源干细胞(USCs)复合膀胱脱细胞基质(BAM)用于膀胱再生修复的可行性。方法制备多孔结构的BAM。将24只雄性SD大鼠随机分为BAM组、BAM/USCs组、BAM/USCs/靶向bFGF组和假手术组(n=6),除假手术组均行膀胱半切术建立膀胱缺损模型。BAM组支架材料为BAM材料加少量PBS,BAM/USCs组将1×10^(6)密度的USCs负载至BAM材料上,BAM/USCs/靶向bFGF组将1×10^(6)密度的USCs和10μmol/L的靶向bFGF共同负载至BAM材料上,将支架材料缝合于切除膀胱的位置。术后90 d测定各组尿动力学,处死大鼠取下再生的膀胱组织进行组织学检查,评估膀胱再生情况。结果术后90 d,BAM组、BAM/USCs组、BAM/USCs/靶向bFGF组、假手术组膀胱顺应性依次增大(F=345.800,P<0.01)。组织学观察显示,4组膀胱平滑肌的再生程度及再生区域的血管再生程度依次增加(F=65.870~619.100,P<0.01)。结论靶向bFGF蛋白、USCs复合多孔结构的BAM材料具有良好的促膀胱再生能力,是一种具有可行性的修复支架材料。

影像技术在“精准肝切除”术中导航的应用

我国是肝癌大国,世界卫生组织统计数据显示中国肝癌病人总数约占世界肝癌病人总数的55%,每年新增病例约占世界总数的一半^（[1]）。肝胆外科技术的发展对国民健康水平的提高具有重要意义。随着＂精准医疗＂概念的提出与发展,我国的肝胆外科领域逐步步入＂精准肝切除＂时代。

肝门静脉左支分支分型的数字化研究及编码分析

目的探究肝门静脉左支新的分型和研究方法,为肝数字解剖研究提供数据和参考。方法应用Hisense CAS对110例国人上腹部增强CT数据进行肝血管三维重建,准确显示肝门静脉左支的三维图像。分析肝门静脉左支分支的形态特点及分布规律,进行编码并统计分析。结果根据门静脉左支走行特点可分为6型:Ⅰ型61例(55.45%),Ⅱ型29例(26.36%),Ⅲ型13例(11.82%),Ⅳ型4例(3.64%),Ⅴ型2例(1.82%),Ⅵ型1例(0.91%)。结论 Hisense CAS能够准确地显示肝门静脉三维影像,方便进行肝内管道观察,为肝门静脉分支分型的数字解剖学研究提供了很好的工具;针对较大数据的观测,用编码的方法非常方便统计分析。

大数据挖掘影响肺腺癌总生存的分子机制

目的大数据挖掘影响肺腺癌总生存的分子机制。方法分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中肺腺癌RNA测序数据,将肺腺癌样本中上调的mRNA分别在10套GEO基因芯片数据中进行生存分析。应用生物信息分析方法探索微小染色体维持蛋白4(MCM4)基因上游相关的微小RNA(miRNA)以及长链非编码RNA(lncRNA)。结果 MCM4mRNA高表达,在10套独立数据中均可致肺腺癌总生存下降(χ2=4.16～10.70,P<0.05)。与MCM4呈显著线性负相关的miRNA为miR-338-3p(r=-0.379,P<0.01),与MCM4呈显著线性正相关的lncRNA为ENSG00000228801.5(r=0.438,P <0.001)、ENSG00000234129.3(r=0.461,P <0.001)、ENSG00000259758.1(r=0.431,P<0.001),并且利用miRanda及DIANA tool数据库证明了调控的可信性。结论ENSG00000228801.5→miR-338-3p→MCM4、ENSG00000234129.3→miR-338-3p→MCM4、ENSG00000259758.1→miR-338-3p→MCM4通路与肺腺癌病人的总生存相关。

电视胸腔镜下纵膈肿瘤切除术中膈神经保护的效果及对手术指标术后恢复的影响

目的:研究电视胸腔镜下纵膈肿瘤切除术中膈神经保护的效果及对手术指标、术后恢复的影响。方法:选取我院2015年1月到2019年12月66例纵膈肿瘤进行前瞻性研究,根据数字随机方法划分为实验组和对照组,每组患者33例。对照组采用标准的开胸手术治疗,实验组在电视胸腔镜下纵膈肿瘤切除术并进行膈神经保护措施,比较术中、术后各项指标及膈神经波动情况。结果:术中,实验组在开胸时间(12.07±3.27)min、开胸出血量(12.89±4.68)、关胸时间(11.46±2.39)min都要低于对照组,存在差异,P<0.05有统计学意义,总手术时间差异不大,P>0.05无统计学意义;术后,实验组带管时间(3.25±0.95)d、引流量(365.89±102.49)mL、住院时间(7.79±2.19)d少于对照组,P<0.05具有统计学意义。术中、术后各个指标呈现为正相关性,但强弱程度有差异,P<0.05具有统计学意义。实验组膈神经波动为(186.25±28.54)υ/V,对照组为(120.22±25.36)υ/V,数据差异明显,t=9.935,P<0.05具有统计学意义。结论:电视胸腔镜下开展纵膈肿瘤切除手术可以减少开胸、关胸时间、住院时间、带管时间,减少患者出血量,可维护膈神经,避免膈神经受到损伤。

基于生物信息学探讨芍药甘草汤作用机制

基于生物信息学方法,探究了芍药甘草汤治疗疾病关键基因和通路。采用中药网络数据库平台(TCMSP)、GeneCards数据库搜索芍药甘草汤的靶点和TN(三叉神经痛)对应的所有靶点;利用细胞图谱3.7.2软件构建了"药物—成分—疾病—靶点"网络图并对关键靶点进行GO和KEGG分析。研究结果表明,TCMSP数据库共检索得到芍药甘草汤活性成分106个,IL1B、VEGFA、MAPK8等是芍药甘草汤治疗三叉神经痛的核心靶点,揭示了芍药甘草汤治疗三叉神经痛的作用机制。

AQP5通过激活Akt信号通路促进角膜上皮损伤愈合和神经再生

水通道蛋白近年来已被证实在多种组织中参与细胞间粘附、迁移和增殖等多种功能,本研究旨在探讨AQP5在角膜上皮创伤愈合和神经再生中的作用。本研究采用以C57BL/6小鼠为背景构建的AQP5基因敲除(AQP5^(-/-))小鼠。通过对小鼠进行角膜上皮清创术,建立野生型(AQP5^(+/+))和AQP5^(-/-)小鼠角膜损伤愈合模型。

EGF-CP-HA水凝胶对大鼠皮肤创面愈合的影响

目的通过胶原蛋白肽-透明质酸负载表皮生长因子(EGF-CP-HA)水凝胶在大鼠全层皮肤缺损伤口的应用来探讨其对皮肤伤口愈合的影响。方法90只SD大鼠,麻醉后制备伤口创面动物模型,随机分为生理盐水(NS)组、透明质酸(HA)水凝胶组、胶原蛋白肽-透明质酸(CP-HA)水凝胶组、透明质酸负载表皮生长因子(EGF-HA)水凝胶组和EGF-CP-HA水凝胶组,每组18只。后4组大鼠在其皮肤伤口处分别贴敷相应水凝胶治疗。观察并记录创面愈合情况。分别在相应时间点麻醉大鼠后取伤口及其周缘1cm的组织,行苏木精-伊红、Masson、免疫组化染色来观察损伤区域不同时间的组织病理变化、胶原纤维分布、血管内皮生长因子-α(VEGF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果EGF-CP-HA水凝胶组大鼠皮肤伤口愈合时间最短(F=6.46,P<0.01)。苏木精-伊红染色显示,EGF-CP-HA水凝胶组创面炎性反应较NS组轻,毛细血管及胶原纤维生成较其他组多;Masson染色显示,EGF-CP-HA水凝胶组胶原纤维较其他组多,排列规则、有序,更接近正常皮肤;免疫组化染色显示,EGF-CP-HA水凝胶组TGF-β1和VEGF-α的表达强度均显著高于NS组(F=12.51~18.64,P<0.05)。结论EGF-CP-HA水凝胶可减轻皮肤创面的炎症反应,提高VEGF-α和TGF-β1的表达水平,明显促进伤口愈合。

MRA测量喙突-肩胛盂上结节和喙突-肱骨头距离对肩袖损伤的评估价值

目的探讨磁共振关节造影(MRA)测量喙突-肩胛盂上结节和喙突-肱骨头距离对肩袖损伤的评估价值。方法回顾性分析145例肩关节MRA检查者,按照损伤部位的不同将病例分为肩胛下肌腱损伤组52例,冈上肌肌腱损伤组54例,正常对照组39例,3组分别在斜矢状位和横轴位上测量喙突-肩胛盂上结节垂直距离及喙突-肱骨头前后距离,比较两种距离与肌腱病理改变的关系。结果冈上肌腱损伤组测量喙突-肩胛盂上结节平均垂直距离较对照组大,差异有统计学意义(t=3.6,P<0.05);喙突-肱骨头前后距离较对照组小,差异有统计学意义(t=-4.5,P<0.05)。肩胛下肌腱损伤组喙突-肱骨头的前后距离、喙突-肩胛盂上结节垂直距离与对照组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论肩关节MRA测量的喙突-肩胛盂上结节垂直距离增大和喙突-肱骨头前后距离减小在提示冈上肌腱损伤时有参考意义,但在评估肩胛下肌腱损伤方面价值有限。

周围神经损伤对脊髓影响的研究进展

周围神经损伤在临床上较为常见,严重影响病人的生活质量。周围神经损伤后,不仅会在其直接损伤部位产生炎症反应、神经纤维脱髓鞘变性等病理过程,也会对受累脊髓节段造成不同程度影响。越来越多研究表明,周围神经损伤后脊髓受损程度与感觉运动功能损害关系密切。本文就周围神经损伤后脊髓内部神经元死亡、神经营养因子变化、胶质反应以及康复训练的作用等几个方面进行综述。

运动训练对脊神经背根损伤大鼠痛觉功能的影响及其机制探讨

目的观察运动训练对脊神经背根损伤大鼠痛觉功能的影响,并探讨其机制。方法 45只Wistar大鼠随机分为3组各15只,训练组和手术组均制备脊神经背根损伤模型,假手术组只暴露而不损伤脊神经;训练组大鼠制模7 d进行运动训练,手术组和假手术组自由活动。比较各组大鼠痛觉阈值及脊髓后角Ⅱ板层胶原纤维酸性蛋白(GFAP)、离子钙接头分子(Iba-1)的光密度值(OD值)。结果与手术组比较,训练组制模14、21 d痛觉阈值降低(P均<0.05);与假手术组及同组制模前1 d比较,训练组及手术组制模1~28 d痛觉阈值升高(P均<0.05)。与手术组比较,训练组制模14、28 d的GFAP OD值减少(P均<0.05);与假手术组比较,训练组及手术组制模7、14、28 d的GFAP OD值增加(P均<0.05);与同组制模7 d比较,训练组制模14、28 d的GFAP OD值减少(P均<0.05)。与手术组比较,训练组制模14、28 d的Iba-1 OD值减少(P均<0.05);与假手术组比较,训练组及手术组制模7、14、28 d的Iba-1 OD值增加(P均<0.05);与同组制模7 d比较,训练组制模14、28 d的Iba-1 OD值减少,手术组制模14 d的Iba-1 OD值增加,制模28 d的Iba-1 OD值减少(P均<0.05)。结论运动训练可恢复脊神经背根损伤大鼠的痛觉功能,机制可能与抑制脊髓后角Ⅱ板层GFAP、Iba-1表达有关。

缺血后处理抑制内质网应激对肾缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的通过观察内质网应激相关因子在缺血再灌注以及缺血后处理(IPO)肾脏中的表达,探讨IPO对缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法将36只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)和IPO组。在给予各组大鼠相应处理后24 h,采集大鼠下腔静脉血,检测血清中肌酐和尿素氮的浓度,评估肾功能;采集肾脏标本进行苏木精-伊红(HE)染色,观察组织形态变化;采用免疫组织化学法和Western blotting法检测Cleaved Caspase3蛋白在肾近端小管上皮细胞中的表达;采用免疫荧光法检测凋亡因子GRP78和CHOP及上皮标志物E-Cadherin蛋白在肾近端小管上皮细胞内的表达。结果 Sham组血清肌酐和尿素氮浓度在正常范围内,IR组的浓度明显高于Sham组,IPO组的浓度明显低于IR组(F=202.726、496.013,P<0.05)。与Sham组相比,IR组的肾组织损伤明显,近端小管上皮细胞肿胀,管腔内可见脱落的上皮细胞,血管球内毛细血管严重淤血;而IPO组比IR组肾小管上皮细胞肿胀轻,管腔内少见脱落的上皮细胞,肾小管损伤程度低,血管球内毛细血管轻度淤血。IR组近端小管上皮细胞中Cleaved Caspase3蛋白阳性表达率明显高于Sham组,而IPO组阳性表达率明显低于IR组(F=195.804,P<0.05)。Sham组近端小管上皮细胞中GRP78和CHOP蛋白荧光信号极低,E-Cad-herin蛋白荧光信号较强,显示正常生理状态;IR组GRP78和CHOP蛋白荧光信号明显高于Sham组,E-Cadherin蛋白荧光信号明显低于Sham组;IPO组GRP78和CHOP蛋白荧光信号比IR组稍低,E-Cadherin蛋白荧光信号较IR组稍高。结论缺血再灌注可引起急性肾损伤,影响肾功能。IPO可能通过减轻内质网应激强度,从而减少损伤后的细胞凋亡,减轻肾脏缺血再灌注所致的损伤,达到保护肾脏的目的。

肝脏恶性肿瘤患者的彩色多普勒超声诊断价值

目的:探讨肝脏恶性肿瘤患者的彩色多普勒超声诊断价值。方法:随机抽取本院2018年1月至2019年5月接收的80例肝脏恶性肿瘤患者,所有患者均接受彩色多普勒超声检查,并对比病理结果。结果:病理检查结果:64例原发性肝癌,16例转移性肝癌;经彩色多普勒超声检查:64例原发性肝癌,13例转移性肝癌,3例漏诊,诊断准确率是96.25%。原发性肝癌64例中,弥漫型肝癌、小肝癌、块状型肝癌、结节型肝癌分别有10例、16例、9例和29例。肿瘤大小1.1cm×1.3cm~13.9cm×18.5cm。结论:肝脏恶性肿瘤诊断过程中,彩色多普勒超声具有较高的应用价值,其可以将肝脏恶性肿瘤病灶数量、形态、部位、体积等清楚地显示出来,从而为疾病的诊断和治疗提供数据参考。