青岛市胶州地区B(A)亚型患者的血型血清学及基因检测分析

目的调查并分析青岛市胶州地区某三级医院就诊患者B(A)亚型的血清学及分子生物学特征。方法2019年11月至2023年2月,12名患者血液标本经微柱玻璃珠法和盐水试管法ABO血型检测疑为AB亚型,进一步对其ABO基因第6、7外显子进行直接扩增、测序和分析,确定ABO等位基因型别。结果青岛市胶州地区26065名患者中共检测发现9例B(A)亚型,检出率为0.345‰(9/26065);9例B(A)亚型中,8例血清学反应表现A_(w)B,基因检测为BA.04基因与O基因杂合,1例血清学反应表现为ABw,基因检测为BA.04基因与A基因杂合。结论血型血清学结合基因检测可准确鉴定ABO血型,在AB_(w)血清学反应的个体中,有可能存在B(A)亚型等位基因。

FOXM1靶向HMMR对骨肉瘤细胞凋亡和自噬影响

目的探讨叉头盒M1(FOXM1)转录因子通过靶向透明质酸介导的运动受体(HMMR)对骨肉瘤(OS)细胞凋亡和自噬的影响。方法使用慢病毒载体构建敲低FOXM1和过表达HMMR的OS细胞系,将转染空载慢病毒的细胞作为对照组,转染sh-FOXM1慢病毒的细胞作为敲低FOXM1组,转染sh-FOXM1慢病毒和OE-HMMR慢病毒的细胞作为过表达HMMR组。采用Western blot方法检测正常成骨细胞(hFOB1.19)和OS细胞(U-2OS)中FOXM1蛋白的表达;通过流式细胞术检测对照组、敲低FOXM1组和过表达HMMR组U-2OS细胞的凋亡率;采用Western blot方法检测对照组和敲低FOXM1组OS细胞中HMMR蛋白、自噬蛋白(LC3Ⅰ/Ⅱ)、凋亡相关蛋白(Cleaved-Caspase3、Bax)的表达以及过表达HMMR组OS细胞中自噬蛋白(LC3Ⅰ/Ⅱ)的表达。结果FOXM1在U-2OS细胞中的表达明显高于hFOB1.19细胞(t=38.780,P<0.005)。与对照组相比,敲低FOXM1组U-2OS细胞凋亡率显著增加(t=3.517,P<0.05),Cleaved-Caspase3、Bax、LC3Ⅰ/Ⅱ和HMMR蛋白表达显著下降(t=3.155~6.334,P<0.05),而过表达HMMR恢复了敲低FOXM1导致的凋亡率增加和自噬抑制(F=31.00、160.20,P<0.05)。结论FOXM1敲低通过降低HMMR蛋白的表达促进OS细胞凋亡和抑制OS细胞自噬。

基于AS1411适配体的DNA-RNA杂交载体的抗肿瘤研究

目的研究连接适配体的DNA-RNA分子作为杂交载体靶向肿瘤细胞并导入功能性RNA分子进入细胞的有效性,以及对肿瘤细胞的影响。方法设计合成短的互补DNA、RNA分子,组装成DNA-RNA杂合链;连接AS1411适配体为靶向分子,再分别连接p21 saRNA和TIGIT siRNA作为药物分子,记为P21 saRNA和TIGIT siRNA,构成杂交载体,通用结构式为AS1411-DNA/RNA-sxRNA;检测AS1411-DNA/RNA-sxRNA能否靶向结合并进入肿瘤细胞及其对瘤细胞生存、迁移、侵袭和凋亡的影响。结果将设计的杂交载体各部分等摩尔加入杂交缓冲体系并于特定温度条件下孵育,TBM聚丙烯酰胺凝胶电泳检测到AS1411-DNA/RNA-sxRNA成功组装;AS1411-DNA/RNA-sxRNA杂交载体在10%血清条件下也显示出良好的抗降解稳定性;荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察,SKOV3细胞表面及胞内存在绿色大量荧光信号,杂交载体成功进入肿瘤细胞。杂交载体孵育后:在mRNA水平上,p21基因表达(2.14±0.25)是对照组(1.02±0.10)2倍以上,P<0.05;TIGIT基因表达(0.63±0.09)低于对照组(1.09±0.15),P<0.05;在蛋白质水平上,p21基因表达(1.57±0.16)是对照组(1.10±0.09)1.5倍以上,P<0.05;TIGIT基因表达(0.61±0.12)低于对照组(1.01±0.07),P<0.05。CCK-8实验显示,P21saRNA(3.10±0.13)和TIGIT siRNA(2.91±0.13)杂交载体孵育组与空白对照组(3.67±0.15)相比,卵巢癌细胞增殖能力显著下降(P<0.05);划痕实验结果显示,P21 saRNA孵育组愈合率(42.53±2.90)%、TIGIT siRNA孵育组愈合率(36.23±3.43)%,明显低于空白对照组(76.47±3.64)%,P<0.05;Transwell检测迁移能力发现:P21 saRNA孵育组(128.25±5.36)、TIGITsiRNA孵育组(119.50±8.79)低于对照组(186.5±8.56);侵袭能力:P21saRNA孵育组(145.5±9.45)、TIGITsiRNA孵育组(112.25±5.63)也显著低于对照组(202.50±10.12),P<0.05;细胞凋亡率:P21saRNA孵育组(11.74%±2.47%)、TIGIT siRNA孵育组(17.12%±2.04%)明显高于对照组(5.66%±1.44%),P<0.05。结论所制备的AS1411-DNA/RNA-sxRNA杂交载体能够有效靶向肿瘤细胞,携带功能性小RNA靶向导入肿瘤细胞并调控目的基因表达,使肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力受到抑制;该结果为利用DNA-RNA偶联AS1411适配体作为靶向工具的杂交载体,靶向杀伤表面表达NCL蛋白的肿瘤细胞提供了实验基础。

冻干血小板及衍生制品应用的研究进展

血小板为血液系统重要组成部分。浓缩血小板及其衍生制品种类较多,其中富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)、生长因子(growth factors,GFs)以及富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)等已广泛应用于临床。冻干血小板(lyophilized platelets,Lyo-P or freeze-dried platelets,FDP)由浓缩血小板冷冻干燥制备而成,冻干后具有常温下保存时间长、质量轻、便于运输、灭活病原体等优点。Lyo-P含有高浓度GFs、纤维蛋白、白细胞以及多种细胞因子等,除具止血和促凝功能外,Lyo-P及其制品越来越多应用于创面愈合、组织修复、美容及生殖医学等领域。

白细胞介素-17C对溃疡性结肠炎的诊断价值

目的探讨血清白细胞介素-17C(IL-17C)在溃疡性结肠炎(UC)患者中表达的意义以及体外诊断价值。方法选择2017年12月-2018年6月就诊于济宁医学院附属医院的32例UC患者为UC组,另外选择50例正常健康体检者为健康对照组。收集两组的一般资料,包括性别、年龄、疾病严重程度等,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定两组的血清IL-17C水平。根据UC病情严重程度不同将UC组分为轻度、中度、重度UC组,根据年龄不同将两组分为<40岁、40~60岁、>60岁组,比较不同分组的IL-17C水平。结果 UC组IL-17C水平明显高于健康对照组(ng/L:251.72±90.49比138.30±68.10),差异有统计学意义(P<0.05)。不同严重程度UC患者的IL-17C水平比较差异无统计学意义(P>0.05),健康对照组IL-17C水平随年龄增长呈上升趋势(P<0.05),UC组各年龄段IL-17C水平比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。健康对照组和UC组内不同性别之间的IL-17C水平比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论血清IL-17C可能在UC的发生发展过程中发挥作用,对诊断UC具有一定的临床价值,有利于UC的体外诊断。

Compound 48/80活化的肥大细胞对树突状细胞归巢的影响

目的:检测compound 48/80(C48/80)活化的肥大细胞对树突状细胞(DC)向局部引流淋巴结迁移的影响,初步探讨C48/80增强适应性免疫应答的机制。方法:体外培养C57BL/6小鼠骨髓来源的DC(BM-DC)和MC/9肥大细胞,Transwell趋化小室实验检测C48/80处理的MC/9细胞对BM-DC向趋化因子CCL21迁移的影响。甲苯胺蓝染色法检测小鼠肩背部皮肤注射C48/80后肥大细胞脱颗粒状态;流式细胞术检测肩上和腋窝淋巴结CD11c+DC的数量。小鼠肩背部两侧各注射荧光微球标记的BM-DC,制备局部引流淋巴结冷冻切片,荧光显微镜观察C48/80处理对外源性DC归巢的影响。采用负载卵白蛋白的BM-DC(OVA-DC)免疫C48/80处理及对照小鼠,WST-8试剂检测局部引流淋巴结淋巴细胞的增殖活性。结果:采用小鼠骨髓细胞成功培养并获得大量典型的BM-DC。MC/9肥大细胞活化上清可促进BM-DC向CCL21迁移(P<0.01)。皮内注射C48/80后30 min可诱导局部皮肤明显肥大细胞脱颗粒。C48/80注射部位24 h出现明显炎细胞浸润,局部引流淋巴结细胞总数和DC细胞数量增多。注射荧光微球标记的BM-DC后48 h淋巴结冷冻切片显示C48/80处理侧荧光阳性的DC细胞数量明显多于C48/80未处理侧。OVA-DC免疫小鼠显示C48/80处理组抗原特异性淋巴细胞增殖能力较对照组明显增高(P<0.05)。结论:C48/80诱导的肥大细胞活化能够促进DC向局部引流淋巴结归巢,增强特异性淋巴细胞增殖能力,参与适应性免疫应答。

ARID1A和VEGF-C在乳腺癌中的研究

目的：通过检测乳腺癌及癌旁组织中抑癌基因染色质重建复合物SWI/SNF亚基AT丰富结合域（AT＋rich＋interactive＋domain 1A,ARID1A）ARID1A和血管内皮生长因子C（Vascular＋endothelial＋growth＋factor＋C,VEGF-C）VEGF-C的免疫组织化学及mRNA的表达情况,并探讨VEGF-C和ARID1A与临床病理因素的相关性,来试图阐明ARID1A与VEGF-C的表达在乳腺癌发生发展、 侵袭转移中的意义.方法：应用免疫组织化学方法检测60例乳腺癌组织及对应的50例癌旁正常乳腺组织中的ARID1A蛋白、VEGF-C的表达水平.用RT-PCR检测60例乳腺癌及50例癌旁正常组织中ARID1A、VEGF-C的mRNA表达情况.结果：免疫组织化学方法检ARID1A和VEGF-C在乳腺癌中的表达阳性率分别48.3%、65.0%,而ARID1A和VEGF-C在癌旁正常组织阳性表达率为80.%、18.0%,二者比较均有显著性差异（P〈0.01）.ARID1A阳性率随乳腺癌淋巴结转移的出现和临床分期及病理分级的升高而降低（P〈0.05）,乳腺癌中VEGF-C阳性率随出现淋巴结的转移和临床分期及病理分级的升高而增加（P〈0.05）,差异有显著性（P〈0.05）.ARID1AmRNA在乳腺癌中的相对表达量与在正常癌旁乳腺组织的相对表达量比较,差异有统计学意义（P〈0.05）ARID1AmRNA表达随肿瘤分期和组织学分级的增高逐渐降低,淋巴结转移阳性组低于阴性组,差异均有统计学意义（P〈0.05）.VEGF-CmRNA在乳腺癌组织中呈高度表达,与癌旁正常乳腺组织相比差异有显著性（P〈0.01）,VEGF-CmRNA的表达随肿瘤分期和组织学分级的增高而逐渐增高,淋巴结转移阳性组高于阴性组,差异均有统计学意义（P〈0.05）.结论：ARID1A和VEGF-C的表达异常与乳腺癌有较高相关性,它们在乳腺癌的发生发展及侵袭转移过程中具有重要作用.

IL-16通过促进巨噬细胞的M1型极化加重葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠炎症性肠病

目的研究白细胞介素16(IL-16)在炎症性肠病(IBD)发生发展过程中的作用并且明确其参与IBD发病的调控机制。方法采用7周龄野生型C57BL/6(WT)和IL-16敲除(IL-16^(-/-))雌性小鼠,分为WT对照组、WT葡聚糖硫酸钠(DSS)处理组、IL-16^(-/-)对照组和IL-16^(-/-)DSS处理组。DSS模型组给予含25 g/L DSS的饮水7 d,建立IBD模型,对照组小鼠给予正常饮水,建模期间记录小鼠体质量绘制体质量变化曲线。7 d后,解剖分离小鼠全结肠,反转录PCR检测结肠组织IL-16 mRNA水平,ELISA检测结肠组织IL-16蛋白水平,免疫荧光技术检测结肠组织IL-16的表达和定位。HE染色检测小鼠结肠病理损伤,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测结肠组织细胞凋亡,流式细胞术检测腹腔细胞中巨噬细胞的数量和极化情况(F4/80、CD86),免疫组织化学染色法检测结肠组织中巨噬细胞的分布,反转录PCR分别检测结肠组织IL-6、IL-12 mRNA水平,ELISA检测IL-6、IL-12蛋白水平。结果 DSS诱导后,结肠组织高表达IL-16。与WT DSS处理组相比,IL-16^(-/-)DSS处理组小鼠体质量变化较小,结肠组织损伤较轻,凋亡细胞显著减少,IL-16^(-/-)小鼠腹腔或结肠组织中巨噬细胞显著减少,巨噬细胞向M1亚型的极化水平明显减弱,其标志性炎性因子IL-6、IL-12的水平显著降低。结论 IL-16可通过促进巨噬细胞的M1型极化加重DSS诱导的炎症性肠病。

TLR4在基因突变小鼠C3H/HeJ坐骨神经损伤修复中的作用

目的探究TLR4突变对小鼠坐骨神经损伤修复产生的影响。方法选择TLR4基因突变型C3H/HeJ小鼠和野生型C3H/HeN小鼠作为实验动物,实验设C3H/HeJ夹伤组(HeJ)、C3H/HeN夹伤组(HeN)及C3H/HeN假手术组(control)。在无菌操作条件下,构建小鼠坐骨神经夹伤模型。分别于术后6、12、24和48 h,qPCR检测损伤神经IL-1β、IL-6、TNF-α因子的表达。术后12 h和24 h,Western blot检测损伤神经p75NTR蛋白的表达。术后1周、2周、4周和8周取小鼠坐骨神经,HE染色观察神经恢复情况,免疫组化检测GAP-43、p75NTR蛋白表达情况。坐骨神经功能指数(sciatic functional index,SFI)评价小鼠运动功能恢复情况。结果在6、12和24 h时,与control组相比,HeN组IL-1β和TNF-α的表达量显著升高(P<0.01),而HeJ组的变化不明显。HeN组与HeJ组之间TNF-α的表达差异显著(P<0.001)。与control组相比,在6 h时HeN组IL-6的表达显著上升(P<0.001)。Western blot结果显示,与HeN组相比,坐骨神经损伤后12 h或24 h时HeJ组小鼠p75NTR蛋白表达显著升高(P<0.001)。HE染色表明,与HeN组相比,HeJ组小鼠淋巴细胞表达较少,炎性反应较弱。免疫组化结果发现,与HeN组相比,HeJ组小鼠GAP43和p75NTR的表达显著升高(P<0.01)。SFI结果显示,与HeN组相比,HeJ组小鼠的SFI评分在术后同期相对较高,神经恢复更好。结论成功构建突变小鼠坐骨神经损伤模型,揭示出TLR4突变可减少炎性因子的释放而加快坐骨神经修复。为临床上治疗周围神经损伤提供了实验理论依据。

牛蒡子苷元对ConA诱导小鼠急性肝炎的保护作用

目的研究牛蒡子苷元(ATG)对刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠急性肝炎的保护作用。方法将C57BL/6小鼠随机分成DMSO组、ConA/DMSO组、ConA/ATG组,每组10只小鼠。DMSO组和ConA/DMSO组小鼠腹腔注射DMSO,ConA/ATG组小鼠腹腔注射等体积ATG(30 mg/kg),5h后ConA/DMSO组和ConA/ATG组尾静脉注射ConA(20mg/kg)。12h后处死小鼠,取血清和肝脏组织,用生化分析仪测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,苏木精-伊红(HE)染色检测肝组织病理损伤,TUNEL染色检测肝细胞凋亡,ELISA方法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)水平,q-PCR方法检测肝组织中TNF-α和IFN-γmRNA表达水平,流式细胞术检测骨髓来源抑制细胞(MDSCs),生化法检测肝脏匀浆丙二醛(MDA)和髓过氧化物酶(MPO)的表达水平。结果与DMSO组相比,ConA/DMSO组血清ALT和AST水平明显升高(F=125.80、94.74,P<0.05);肝脏组织损伤明显加重;肝细胞凋亡增加;血清和肝组织中TNF-α和IFN-γ水平升高(F=17.52、68.81,P<0.05);肝脏MDSCs募集活化降低;同时MDA和MPO活性升高(F=13.38、14.78,P<0.05)。与ConA/DMSO组比较,ConA/ATG组血清ALT和AST水平明显降低(F=125.80、94.74,P<0.05);肝脏组织损伤明显减轻;肝细胞凋亡减少;血清中TNF-α和IFN-γ的水平降低(F=17.52、68.81,P<0.05);肝组织中TNF-α和IFN-γmRNA的表达水平降低(F=31.55、14.64,P<0.05),MDSCs募集活化明显增强;MDA和MPO活性降低(F=13.38、14.78,P<0.05)。结论 ATG对ConA诱导的小鼠急性肝炎具有明显的保护作用。

高通量测序分析类风湿关节炎患者外周血单个核细胞circRNAs表达谱差异

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中环状RNA (circRNA)表达谱的差异,并结合临床验证筛选出可辅助RA诊断的分子标志物。方法采用高通量测序技术,检测4例RA患者和3例健康对照者PBMCs中circRNA和mRNA表达;基因聚类分析差异表达的circRNAs,KEGG pathway分析差异表达的mRNAs;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法在32例RA患者和20例健康对照者中验证部分差异表达circRNAs,结合ROC曲线分析其作为RA诊断分子标志物的潜力。结果高通量测序结果显示,RA组和健康对照组中共有71种显著差异表达的circRNAs,其中41种上调,30种下调,生物信息学分析显示,涉及的通路多与炎症和转录活性相关。多样本qRT-PCR验证结果显示hsa_circ_0000396和hsa_circ_0130438在RA患者PBMCs中的表达水平显著低于健康对照组(P<0.05),ROC曲线分析进一步表明显示hsa_circ_0000396有望成为RA诊断分子标志物。结论在RA患者PBMCs中存在差异表达的circRNAs,它们在RA的发生发展过程中可能起调控作用,其中hsa_circ_0000396有成为RA诊断分子标志物的潜能。

白细胞介素16对动脉粥样硬化的影响及其机制研究

目的分析白细胞介素16(IL-16)在动脉粥样硬化(AS)中的表达,初步探讨其在AS发病机制中的作用。方法收集2015年8月至2016年8月在济宁医学院附属医院就诊并行冠状动脉造影检查确定为AS患者30例作为病例组,另选取同期该院29例体检健康者作为健康对照组。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血IL-16水平;逆转录聚合酶链式反应检测两组外周血单个核细胞IL-16的mRNA水平;免疫组化分析AS患者和ApoE-/-小鼠主动脉斑块组织IL-16表达情况;AS小鼠腹腔注射重组IL-16后检测主动脉斑块变化。结果病例组外周血IL-16和IL-16mRNA水平高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),人AS斑块中IL-16mRNA高表达。小鼠AS斑块表达IL-16,AS小鼠腹腔注射IL-16后主动脉斑块面积缩小且稳定性增加。结论 IL-16在AS患者外周血和AS小鼠斑块中均高表达,IL-16可能对AS具有保护作用。

Th17/Treg值在慢性乙型肝炎肝纤维化进展中的意义

目的测定慢性乙型肝炎(CHB)患者肝纤维化进展过程中外周血中Th17细胞和Treg细胞的频率及相关细胞因子的变化,以及肝组织中Th17细胞和Treg细胞数目的变化,探讨Th17/Treg平衡在纤维化进展中的作用。方法方便选取2017年6-12月青岛大学附属医院慢性乙型肝炎住院患者51例,其中F1期CHB患者(F1)5例,F2期CHB患者(F2)10例,F3期CHB患者(F3)15例,F4期CHB患者(F4)21例,同时选取10位健康体检者作为对照(HC),流式细胞术检测外周血中Th17和Treg的频数,双抗体夹心ELISA检测血清中IL-17和IL-10的表达水平,免疫组化检测CHB患者肝组织中Th17和Treg数量。结果在外周血中,Th17/Treg细胞频率比值在F2组(0.76±0.37)和F4组(2.23±0.67)中与HC组(1.33±0.67)相比,差异有统计学意义[P(HCvsF2)=0.022,P(HCvsF4)<0.001],IL-17/IL-10比值在F2组(0.11±0.19)、F3组(0.12±0.32)和F4组(0.12±0.32)中与HC组(0.72±0.22)相比,差异有统计学意义[P(HCvsF2)=0.008,P(HCvsF3)=0.001,P(HCvsF4)<0.001],肝组织中,Th17/Treg比值在F3组(1.07±0.86)和F4组(0.79±0.28)中与F1组(2.08±1.06)相比,差异有统计学意义[P(F1vsF3)=0.008, P(F1vsF4)=0.001],F2组(1.51±0.77)和F4组(0.79±0.28)相比,Th17/Treg值变化差异有统计学意义[P(F2vsF4)=0.011]。结论 Th17/Treg的失衡是造成慢性乙型肝炎肝纤维化进程演变的重要因素,检测Th17/Treg变化对预测肝纤维化发展有一定价值。

富血小板血浆在慢性难愈性创面治疗中的临床研究进展

随着人口老龄化和糖尿病等慢性疾病发病率增加,慢性难愈性创面成为持续增长的全球性健康负担。在自发性创面愈合过程中,生长因子(growth factors, GFs)发挥至关重要的作用,而富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)生长因子含量很高,故目前已越来越多的用于治疗慢性难愈性创面,包括糖尿病性溃疡、压力性溃疡、静脉溃疡、烧伤等,均已获得显著疗效。鉴于PRP单纯应用时在创面局部释放持续时间较短,因此已有研究将PRP与不同组织生物学材料联合,如透明质酸、壳聚糖以及壳聚糖衍生物等,以达到更好治疗效果。本文就PRP制备方法,生长因子作用机制,对创面修复的疗效,与修复材料的联合应用及PRP优缺点做一综述。

乙肝肝癌患者血清热休克转录因子1、热休克蛋白27表达及与预后相关性研究

目的探究乙肝肝癌患者血清热休克转录因子1(HSF1)、热休克蛋白27(HSP27)的表达水平及与预后的相关性。方法选取2017年1月至2018年6月在本院接受住院治疗的乙肝肝癌患者52例为研究组,同期选取乙肝非肝癌患者45例为对照A组,健康体检人群50例为对照B组。利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清HSP27水平;利用荧光定量PCR技术检测HSF1 mRNA水平,利用Pearson法分析血清HSF1、HSP27水平的相关性,采用Kaplan-Meier法绘制肝癌患者5年生存曲线,生存率比较采用Log-rank检验;利用多因素Logistic回归分析影响乙肝肝癌患者预后不良的危险因素。结果研究组乙肝肝癌患者血清HSF1 mRNA、HSP27水平均明显高于对照A组、对照B组(P<0.05),对照A组与对照B组之间差异无统计学意义(P>0.05);血清HSF1 mRNA、HSP27水平与TNM分期、分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05);血清HSF1水平与HSP27呈正相关(r=0.642,P<0.05);HSF1 mRNA高表达组和低表达组中位生存时间分别为32.0个月和47.0个月,差异有统计学意义(χ^2=4.377,P=0.042),HSP27高表达组和低表达组分别中位生存时间为29.0个月和38.0个月,差异有统计学意义(χ^2=6.286,P=0.012);多因素Logistic回归分析结果显示,TNM分期晚、分化程度低、淋巴结转移、血清HSF1水平高、HSP27水平高,是影响乙肝肝癌患者预后不良的危险因素。结论乙肝肝癌患者血清HSF1、HSP27均呈高表达,其水平高低与UITNM分期、分化程度及淋巴结转移有关,提示血清HSF1、HSP27可能成为预测乙肝肝癌患者病情发展及预后的潜在指标。

人肝源性干细胞腹腔移植抗刀豆蛋白A诱导小鼠急性肝损伤的机制研究

目的探讨人肝源性干细胞抗刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠急性肝损伤的作用机制。方法将72只雄性C57BL/6小鼠分成2组,ConA模型组和干细胞干预组,干预组腹腔注射人肝源性干细胞,模型组注射等量的磷酸盐缓冲液,干预12h后尾静脉注射ConA,注射ConA后分5个不同时间点(0h、3h、6h、12h、24h)分别处死小鼠,检测血清ALT、AST、TNF-α和IL-10的水平,检测肝组织TNF-α和IL-10的mRNA表达水平,观察肝组织病理改变及细胞凋亡程度。结果干预组小鼠(12h、24h)较模型组相比血清ALT、AST水平显著下降(P<0.05),肝组织坏死程度明显减轻;干预组小鼠(3h、6h、12h)血清TNF-α水平较模型组明显下降(P<0.05),而血清IL-10(6h)水平较模型组明显升高(P<0.05);肝组织TNF-α和IL-10的mRNA水平变化与血清基本一致;TUNEL染色显示干预组小鼠(12h、24h)肝组织凋亡程度较模型组明显减轻。结论人肝源性干细胞抑制促炎因子释放、促进抑炎因子表达及抗凋亡作用可能是其保护ConA诱导小鼠急性肝损伤的重要机制。

非传染性输血不良反应的发生机制分折

目的探讨非传染性输血不良反应的发生机制。方法以2016年12月至2017年6月于我院妊娠分娩输血发生非溶血性不良反应的34例住院患者为实验组,另择取同期于我院妊娠分娩输血未发生任何输血不良反应的34例住院患者为对照组。取患者外周血样,检测T淋巴细胞、HLA、IL-1、IL-6、TNF-α、IFN、IgG、IgA、IgE和HP,对比观察两组患者各指标差异变化。结果非溶血性发热患者血清IL-1、IL-6、TNF-α和IFN显著高于对照组,非溶血性过敏反应患者IgA、HP低于对照组,输血后紫癜患者PL阴性率高于对照组,TAGVHD患者T淋巴细胞和HLA阳性率高于对照组,差异比较有统计学意义(P<0.05)。结论输血可导致发热、过敏、紫癜等多种非溶血性不良反应,其发生与外周血液中多种因子的含量存在相关性且作用机制复杂,加强对相关指标的监测对减少或避免输血不良反应具有积极作用,具备临床研究价值。

肝癌组织和癌旁组织中CD8＋CD127＋T淋巴细胞的表达及意义

目的：研究乙肝相关性肝癌组织、癌旁慢乙肝肝组织和癌旁肝硬化肝组织中CD8＋T淋巴细胞表面CD127表达水平的变化及其意义.方法：流式细胞术检测30例乙肝相关性肝癌组织、15例癌旁慢乙肝肝组织、15例癌旁肝硬化肝组织和15例正常对照肝组织中CD8^＋T淋巴细胞CD127的表达.结果：肝癌组肝组织中CD8^＋CD127^＋T淋巴细胞显著低于正常对照组及慢乙肝组肝组织中的水平,差异有统计学意义（P均〈0.05）;CD8^＋CD127^＋T淋巴细胞水平在慢乙肝组、 肝硬化组和肝癌组依次减低,但肝硬化组和肝癌组差异均无统计学意义（P〉0.05）.结论：该研究表明肝癌中主要抗肿瘤效应细胞水平下降,并提示在慢乙肝-肝硬化-肝癌的动态进展过程中,肝组织中CD8^＋T淋巴细胞表面CD127表达逐渐下降.

乳腺癌患者血清hepcidin的表达及临床意义

目的本实验通过检测乳腺癌患者外周血中hepcidin的表达情况,探讨其在乳腺癌发病中的作用。方法收集2014年4月至2016年5月威海市中心医院58例乳腺癌术前患者及58例健康对照的血清标本,检测血清中铁调素(hepcidin)、膜转铁蛋白(ferroportin)、铁蛋白(ferritin)表达及全血中血红蛋白。结果hepcidin乳腺癌患者血清中的表达量明显高于正常对照组(Z=6.63,P<0.0001),ferritin乳腺癌患者血清中的表达量明显高于正常对照组(t=9.00,P<0.0001),ferroportin在乳腺癌患者血清中的表达量明显低于正常对照组(t=9.06,P<0.0001),hepcidin表达水平与乳腺癌患者血红蛋白水平无关(t=0.89,P=0.38)。结论乳腺癌患者血清中的hepcidin表达水平的升高可能与乳腺癌疾病的发生和发展有一定联系,因此,检测血清中hepcidin浓度对乳腺癌的治疗有一定临床指导意义。

辐照促进肿瘤细胞分泌cGAMP和NO增强Ⅰ型干扰素应答

目的揭示辐照诱导环鸟苷酸-腺苷酸(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate,c GAMP)和一氧化氮(nitric oxide,NO)调节抗肿瘤Ⅰ型干扰素表达的新机制。方法RT-qPCR技术检测Ifnb、Cxcl10、Il6和Nos2基因的表达。免疫印迹技术检测cGAS-STING信号通路激活和诱导型一氧化氮合酶(nitric oxide synthase 2 inducible,iNOS)的蛋白表达;液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS)和ELISA检测细胞内外cGAMP的含量。通过使用LRRC8 volume-regulated anion channel(LRRC8/VRAC)和iNOS抑制剂阻断cGAMP释放和NO产生。结果辐照处理肿瘤细胞MC38后,显著诱导了p-STING、p-TBK1和p-IRF3的表达;相应地,Ifnb、Cxcl10和Il6基因的表达也大幅度升高(P<0.001);辐照处理Cgas或Sting基因敲除的MC38细胞后,Ifnb、Cxcl10和Il6基因的表达明显下降(P<0.001)。此外,辐照处理MC38细胞后,在胞外上清中可以检测到细胞释放出来的免疫调节分子cGAMP(P<0.001)和NO(P<0.01);DCPIB抑制LRRC8/VRAC导致c GAMP释放减少(P<0.05),同时Ⅰ型干扰素应答降低(P<0.001)。辐照还可以诱导MC38细胞表达iNOS,用SMT抑制iNOS后,细胞NO产生减少(P<0.05),Ⅰ型干扰素应答也降低(P<0.05)。结论本文证实c GAS-STING信号通路在辐照诱导抗肿瘤的Ⅰ型干扰素应答中至关重要,并揭示肿瘤细胞通过外运或分泌具有免疫调节功能的小分子cGAMP和NO可以进一步放大Ⅰ型干扰素应答,因此发现了辐照诱导Ⅰ型干扰素表达的新机制。