四君子汤治疗酒精性肝损伤的效果及其机制

目的探讨四君子汤治疗酒精性肝损伤的效果及其机制。方法将雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组(A组)、酒精模型组(B组)、四君子汤低剂量组(C组)及四君子汤高剂量组(D组),B~D组小鼠每天灌胃体积分数0.56的乙醇溶液(6 g/kg),A组小鼠每天灌胃等剂量的生理盐水;同时C、D组小鼠再分别每天灌胃5、10 g/kg的四君子汤,每5 d测1次小鼠体质量,实验持续18 d。灌胃结束后,采集小鼠新鲜粪便进行16S rDNA基因测序分析小鼠肠道菌群的变化;麻醉后,眼眦取血,收集血清进行肠道通透性检测;收集小鼠血液和肝脏、脾脏组织样本,测定各组小鼠的肝、脾指数以及血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(T-BIL)、碱性磷酸酶(ALP)、三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)的含量,利用苏木精-伊红(HE)和油红O染色观察各组小鼠肝、脾组织形态学变化。结果D组与B组相比,小鼠体质量及肝指数、脾指数差异有显著性(t=3.53~4.41,P<0.05),血清中ALP、T-BIL、TG水平显著降低(t=3.51~5.60,P<0.05);C、D组与B组相比,小鼠血清中ALT、AST、TC水平显著下降(t=2.19~7.62,P<0.05)。病理结果显示C、D组与B组比较,肝组织中肝索形态恢复正常,肝脏脂肪蓄积减轻;脾组织中红髓白髓分界清晰。肠道通透性结果显示,D组与B组比较,肠道通透性显著降低(t=3.19,P<0.05);肠道菌群检测结果显示,C、D组较B组,小鼠肠道菌群多样性增加,Dubosiella、Bifidobacterium、Allobaculum等有益菌含量增多,Prevotellaceae_UCG-001、Alloprevotella等致病菌含量降低。结论四君子汤可有效改善酒精诱导的小鼠肝损伤,其机制可能是通过调节肠道菌群变化实现的。

隐丹参酮对肝癌细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨隐丹参酮(CPT)对HepG2细胞凋亡的影响及其机制。方法采用MTT试验检测终浓度为0、1、5、10、20、40、100μmol/L的CPT对HepG2细胞活性的影响,并计算出CPT对HepG2细胞的半数致死浓度(IC 50)。将HepG2细胞分为A~D组,分别使用终浓度0、1、5、10μmol/L的CPT培养48 h,分别通过划痕实验、JC-1染色和流式细胞术检测各组HepG2细胞的迁移能力、线粒体膜电位以及细胞凋亡率。将HepG2细胞分为E~H组,分别使用含有0μmol/L CPT+20μmol/L Spautin-1、1μmol/L CPT+20μmol/L Spautin-1、5μmol/L CPT+20μmol/L Spautin-1、10μmol/L CPT+20μmol/L Spautin-1的培养液培养。采用MTT实验检测E~H组处理48 h时的细胞活性,Western blot方法检测A、D、H组处理48 h时HepG2细胞中LC3B-Ⅱ蛋白的表达情况,JC-1染色检测A、D、E、H组处理48 h时的细胞线粒体膜电位,流式细胞术检测A、D、E、H组处理24 h时的细胞凋亡情况。结果随着CPT浓度的递增,HepG2细胞活性明显下降,处理48 h时的IC 50值为3.9μmol/L。随着CPT浓度的升高,抑制HepG2细胞迁移的能力逐渐增强(t=5.96~29.63,P<0.05);绿色荧光与红色荧光比值也逐渐升高(t=4.24~23.36,P<0.05);HepG2细胞的细胞凋亡率逐渐增高(t=7.30~18.15,P<0.05)。A~H组间比较,细胞活性均有显著性差异(F=231.15,P<0.05),E~H与A~D组相比,细胞活性增高(t=3.96~18.80,P<0.05)。H组与D组相比,自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ蛋白表达显著降低(t=3.52,P<0.05)。JC-1染色结果显示,E组、H组与D组比较绿色荧光与红色荧光比值均有显著差异(t=3.58、14.76,P<0.05)。流式细胞术检测细胞凋亡的结果显示,E组、H组与D组比较绿色荧光与红色荧光比值均有显著差异(t=12.38、4.99,P<0.05)。结论CPT可能通过诱导自噬从而促进HepG2细胞的凋亡,达到对HepG2细胞活性的抑制作用。

隐丹参酮对肝癌细胞凋亡和内质网应激的影响

目的探讨隐丹参酮(CPT)对肝癌细胞凋亡和内质网应激的影响。方法HepG2细胞分别用不同浓度的CPT处理48h,采用MTT法、乳酸脱氢酶释放法和细胞划痕法检测细胞的生长和迁移能力,Annexin V FITC-PI染色后流式细胞分析术检测细胞凋亡率,Western blot法检测caspase3、重链结合蛋白(BIP)和蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)的表达水平。结果与阴性对照组相比,CPT作用后HepG2细胞的生长和迁移能力减弱(F=41.10~126.40,P<0.01),凋亡蛋白caspase3的活化水平升高(F=156.90,P<0.01)。15μmol/LCPT可以使HepG2细胞中内质网应激蛋白BIP和p-PERK的表达水平明显下降(F=57.20、49.92,P<0.01)。结论CPT对肝癌细胞的生长和迁移有抑制作用,并且能抑制内质网应激和促进凋亡。

葛根素对急性肾损伤的改善作用及相关机制

目的探讨葛根素对脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肾损伤的改善作用及其相关机制。方法将24只BALB/C小鼠随机分为4组,葛根素组以50 mg/kg葛根素灌胃,地塞米松组(阳性对照)腹腔注射5 mg/kg的地塞米松,模型组和对照组灌胃给予同等容量的生理盐水。葛根素组和地塞米松组小鼠预防性给药1 h后,腹腔注射10 mg/kg LPS刺激12 h。采用苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠肾组织形态学改变,同时检测肾功能指标血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测小鼠血清中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量,Western blotting法检测肾组织中炎症蛋白诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶2(COX2)的表达。结果与对照组比较,LPS诱导急性肾损伤小鼠肾组织中可见肾小管坏死中心的产生,血清中BUN和Cr的水平显著升高(F=51.55、102.75,P<0.01),血清中炎症因子TNF-α和IL-6的含量显著增加(F=3338.15、1226.85,P<0.01),肾组织中炎症蛋白iNOS和COX2的表达显著升高(F=21682.77、4497.00,P<0.01);葛根素预防给药1 h能显著改善LPS引发的上述变化(P<0.01)。结论葛根素对LPS诱导的急性肾损伤具有明显的改善作用,同时可明显减少炎症因子的释放及降低炎症蛋白的表达,提示抗炎可能是葛根素治疗急性肾损伤的药理学基础。