Mesothelin对乳腺癌细胞MDA-MB-231生物学行为的影响

目的探讨间皮素(Mesothelin)对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。方法免疫化学染色检测TNBC组织、癌旁组织及乳腺癌细胞系中Mesothelin的表达。将过表达Mesothelin慢病毒质粒(Mesothelin组)及对照Scramble质粒(Scramble组)转染TNBC细胞系MDA-MB-231细胞,未感染细胞作为Control组。流式细胞术检测病毒感染效率;实时荧光定量PCR、流式细胞术及Western blot检测Mesothelin表达;CCK-8检测细胞增殖情况;利用Annexin V-APC/PI检测细胞凋亡;Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞的侵袭能力。结果Mesothelin在TNBC肿瘤组织中表达高于癌旁组织(P<0.05),在乳腺癌细胞系中有表达。流式细胞术验证发现慢病毒感染效率达到90%以上。与Scramble组相比,Mesothelin组Mesothelin mRNA和蛋白表达水平升高,细胞增殖率升高,细胞凋亡率降低,Bax、E-cadherin蛋白表达减少,Bcl-2、Ncadherin和Vimentin蛋白表达增加,细胞的迁移及侵袭能力增强(P<0.05)。结论Mesothelin能够促进乳腺癌细胞增殖,抑制细胞凋亡,增加细胞的迁移及侵袭能力。

靶向MTH1抑制多发性骨髓瘤细胞增殖和诱导凋亡的作用研究

目的:检测MTH1在多发性骨髓瘤(MM)患者CD138阴性细胞(CD138^-)及CD138阳性细胞(CD138^+)中的表达,探讨MTH1抑制剂对MM细胞株U266细胞的形态、增殖和凋亡等细胞生物学特性的影响。方法:分离MM患者CD138^-及CD138^+并提取RNA,应用Q-PCR分别检测NUDT家族的表达情况。利用MM细胞系U266观察白细胞介素-6(IL-6)对MTH1表达变化的影响。在荧光显微镜下观察TH588作用于U266细胞48 h后的形态变化,用DAPI染色法观察细胞核的变化。应用荧光素酶活性检测TH588对U266细胞增殖的影响,应用流式细胞术检测TH588对U266细胞凋亡的影响。结果:MM患者CD138^+中MTH1、NUDT2、NUDT5及NUDT21表达较CD138^-高(P<0.05)。荧光素酶报告显示TH588处理U266细胞后,与对照组相比,荧光强度值明显降低,且药物浓度越大,荧光强度值越低(r=-0.91);应用IL-6能使MTH1表达水平增高,荧光显微镜下观察,TH588处理U266细胞48 h后,细胞出现皱缩、变小以及形状不规则等表现,DAPI染色后,TH588处理过的细胞呈现细胞核缩小、染色不均、花瓣状和放射状等凋亡特征;流式细胞术分析结果显示,TH588处理U266细胞48 h后,存活细胞比例明显降低(P<0.05)。结论:MTH1在部分MM患者的CD138^+中高表达,U266细胞在IL-6的作用下可见MTH1表达增高,MTH1抑制剂TH588对MM U266细胞株具有明显地抑制增殖和诱导细胞凋亡的作用。