线粒体大麻素受体1在大鼠海马神经元缺氧复氧损伤中对线粒体分裂的影响

目的:探讨线粒体CB1受体(mitochondrial cannabinoid receptor1,mtCB1)在大鼠海马神经元缺氧复氧损伤中对线粒体分裂的影响。方法:原代培养新生的Wistar大鼠海马神经元,将培养至第8天的海马神经元采用随机数字表分为5组(n=60):正常组(N组):正常培养,不做任何处理;缺氧复氧组(H/R组):采用氧糖剥夺法构建海马神经元缺氧复氧损伤模型,缺氧6h,复氧20 h;缺氧复氧组+ACEA+AM251组(H/R+ACEA+AM251组):缺氧6 h结束后立即加入ACEA和AM251,终浓度分别为1μmol/L、10μmol/L,复氧20 h;缺氧复氧+ACEA+Hemopressin(H/R+ACEA+Hemo组):缺氧6h结束后立即加入ACEA和Hemopressin,终浓度分别为1μmol/L、10μmol/L,复氧20 h;缺氧复氧+赋形剂组(H/R+V组):同样于缺氧6h结束后立即加入二甲基亚砜(DMSO),终浓度<0.1%,复氧20 h。使用激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca^(2+)的浓度,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡诱导因子(AIF)、线粒体分裂相关蛋白Drp1、Fis1,细胞凋亡相关蛋白细胞色素C(Cytc)和Rho相关的卷曲蛋白激酶1(ROCK1)的表达。结果:与N组相比,H/R组、H/R+ACEA+AM251组、H/R+ACEA+Hemo组和H/R+V组的细胞内Ca^(2+)浓度、细胞凋亡率、以及AIF、Drp1、Fis1、Cytc、ROCK1蛋白的表达水平均明显增加(P<0.05);与H/R组相比,H/R+ACEA+Hem组上述各检测指标明显降低(P<0.05),H/R+ACEA+AM251组和H/R+V组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:线粒体CB1受体(mtCB1受体)可能通过降低细胞内ROS的含量来减少细胞内Ca^(2+)浓度和ROCK1的表达,进而抑制线粒体分裂,并最终减轻海马神经元缺氧复氧损伤。

线粒体分裂在大鼠海马神经元缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价线粒体分裂在大鼠海马神经元缺氧复氧损伤中的作用.方法 原代培养Wistar大鼠海马神经元,采用随机数字表法分为5组（n=60）：正常组（N组）不进行任何处理;赋形剂组（V组）加入二甲基亚砜（DMSO）孵育40 min,终浓度＜0.1％;缺氧复氧组（H/R组）采用氧糖剥夺法制备大鼠海马神经元缺氧复氧损伤模型,缺氧6h,复氧20 h.缺氧复氧＋赋形剂组（H/R＋V组）于缺氧前40 min加入DMSO,终浓度＜0.1％;线粒体分裂抑制剂组（M组）于缺氧前40 min加入50mmol/L线粒体分裂抑制剂Mdivi-1（溶于DMSO,DMSO浓度＜0.1％）.采用Mito Tracker染色法观察线粒体形态,Western blot法检测线粒体分裂蛋白（Drp1）、线粒体融合蛋白（Mfn2）、过氧化物酶体增殖物受体γ辅激活因子（PGC-1α）、核呼吸因子-1（NRF-1）和线粒体转录因子A（TFAM）的表达水平,多功能酶标仪和荧光显微镜检测线粒体活性氧（ROS）水平,用流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果 与N组比较,H/R组Drp1、PGC-1α、NRF-1及TFAM表达水平、ROS含量和细胞凋亡率升高,Mfn2表达下调（P＜0.05）;与H/R组比较,M组Drp1表达水平、ROS含量和细胞凋亡率降低,Mfn2、PGC-1α 、NRF-1和TFAM表达上调（P＜0.05）.结论 线粒体分裂参与了大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的过程.