靶向调控PTEN和PI3K对肾母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨靶向调控张力蛋白同源物(PTEN)和磷脂酰肌醇激酶(PI3K)对肾母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法选取15例肾母细胞瘤患儿的术后肿瘤组织及癌旁正常组织,采用免疫印迹实验及实时荧光定量PCR方法检测组织中PTEN和PI3K蛋白及mRNA的表达水平;将肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞分为对照组(A组,转染NC siRNA及Flag空载体)、PTEN过表达组(B组,转染NC siRNA及Flag-PTEN表达载体)、PI3K敲低组(C组,转染siPI3K及Flag空载体)、联合靶向组(D组,转染siPI3K及Flag-PTEN)。采用免疫印迹实验检测各组转染24 h后SK-NEP-1细胞中PI3K、蛋白激酶A(AKT)及磷酸化蛋白激酶A(p-AKT)的表达水平;采用CCK-8实验检测干预第24、48、72小时时SK-NEP-1细胞增殖情况;采用流式细胞术分析各组SK-NEP-1细胞转染24 h后细胞凋亡率及细胞周期。结果与癌旁正常组织相比,肾母细胞瘤肿瘤组织中PI3K蛋白及mRNA表达水平均显著升高(t=22.862、7.098,P<0.05),PTEN蛋白及mRNA表达水平均显著降低(t=25.634、8.379,P<0.05);体外细胞实验结果显示,B、C、D组SK-NEP-1细胞中p-AKT蛋白水平明显低于A组(t=8.386~11.900,P<0.05);CCK-8实验显示,干预第48、72小时时,B、C、D组SK-NEP-1细胞吸光度值明显低于A组(t=5.163~8.647,P<0.05),干预第72小时时,D组SK-NEP-1细胞吸光度值明显低于B、C组(t=3.982、4.021,P<0.05);B、C、D组SK-NEP-1细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均明显高于A组(t=4.673~9.563,P<0.05),D组SK-NEP-1细胞早期凋亡率和晚期凋亡率明显高于B、C组(t=5.829~8.075,P<0.05);B、C、D组SK-NEP-1细胞G 1期细胞比例明显高于A组(t=7.518~14.747,P<0.05),S期细胞比例明显低于A组(t=8.029~13.451,P<0.05),D组SK-NEP-1细胞G 1期细胞比例明显高于B、C组(t=9.930、9.732,P<0.05),S期细胞比例明显低于B、C组(t=10.281、9.927,P<0.05)。结论相比于单一靶向PTEN或PI3K,联合靶向调控PTEN和PI3K可更显著抑制肾母细胞瘤细胞生长,促进肾母细胞瘤细胞凋亡,其作用机制可能与其抑制PI3K/AKT信号通路、阻断细胞周期有关。

地榆皂苷Ⅱ逆转人神经母细胞瘤细胞对顺铂耐药的影响及机制研究

目的:观察地榆皂苷Ⅱ逆转人神经母细胞瘤细胞对顺铂耐药的作用并探讨其机制。方法:建立对顺铂耐药的人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y/DDP和KELLY/DDP,采用CCK-8法测定地榆皂苷Ⅱ对细胞增殖的直接抑制作用及对SH-SY5Y/DDP和KELLY/DDP耐药性的逆转作用,Transwell小室实验和划痕试验检测地榆皂苷Ⅱ对细胞侵袭和迁移能力的影响,流式细胞术测定地榆皂苷Ⅱ对细胞周期和细胞凋亡的影响,qRT-PCR和Western Blot测定地榆皂苷Ⅱ对细胞中Cdc2和AKT/PI3K信号通路mRNA和蛋白表达的影响。结果:地榆皂苷Ⅱ可浓度依赖性地抑制SH-SY5Y/DDP和KELLY/DDP增殖,改善顺铂对耐药人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y/DDP和KELLY/DDP增殖的抑制作用,并抑制其侵袭、迁移能力,促进其发生G_(2)/M期阻滞及凋亡,降低其p-Cdc2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白和Cdc2、PI3K、AKT、mTOR mRNA及蛋白表达。结论:地榆皂苷Ⅱ可逆转人神经母细胞瘤对顺铂的耐药,其作用机制可能与抑制细胞侵袭和迁移,促进G_(2)/M期阻滞和细胞凋亡,抑制调控细胞周期蛋白Cdc2和PI3K/AKT信号通路有关。