LncRNA FZD10-AS1通过调控miR-337-3p/GPD1分子轴抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移

目的探讨长链非编码RNA(long⁃chain non⁃coding RNA,lncRNA)FZD10⁃AS1通过调控miR⁃337⁃3p上调甘油-3-磷酸脱氢酶1(glycerol⁃3⁃phosphate dehydrogenase 1,GPD1)基因的表达抑制骨肉瘤增殖和迁移的分子机制。方法收集青岛大学附属青岛妇女儿童医院儿童骨科2016年9月至2018年12月47例行骨肉瘤根治术切除的癌组织及相应癌旁组织,qRT⁃PCR检测FZD10⁃AS1在骨肉瘤组织及癌旁组织、骨肉瘤细胞株和正常成骨细胞中的表达量。选择FZD10⁃AS1表达量最低的细胞株为研究对象,Lipofectamine 2000转染试剂分别转染表达FZD10⁃AS1的质粒(观察组)和阴性对照质粒(对照组)至骨肉瘤细胞,CCK⁃8法和细胞划痕实验检测分别FZD10⁃AS1过表达对细胞增殖和迁移能力的影响。生物信息学预测FZD10⁃AS1的作用机制。qRT⁃PCR检测FZD10⁃AS1过表达对下游基因表达的影响,Western Blot检测有关蛋白的表达量。结果骨肉瘤组织中FZD10⁃AS1的表达明显少于癌旁组织(P<0.01)。骨肉瘤细胞株中FZD10⁃AS1的表达明显少于正常成骨细胞(P<0.01),在U⁃2OS细胞中表达量最少(P<0.01)。过表达FZD10⁃AS1明显抑制U⁃2OS细胞的增殖能力和迁移能力(P<0.05)。生物信息学显示,FZD10⁃AS1可互补结合miR⁃337⁃3p,miR⁃337⁃3p可进一步互补结合GPD1 mRNA。过表达FZD10⁃AS1后U⁃2OS细胞中miR⁃337⁃3p表达量明显下降(P<0.01),GPD1 mRNA和蛋白的表达量增加(P<0.01)。结论FZD10⁃AS1在骨肉瘤组织和细胞株中表达明显降低,FZD10⁃AS1通过调控miR⁃337⁃3p促进GPD1基因的表达,从而抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移能力,FZD10⁃AS1可能成为骨肉瘤治疗及诊断的靶点。

lncRNA DLGAP1-AS1吸附miR-744-3p抑制骨肉瘤细胞侵袭和细胞周期的机制

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)DLGAP1-AS1对骨肉瘤细胞侵袭和细胞周期的影响及可能的机制。方法采用基因表达谱交互式分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)数据库分析DLGAP1-AS1表达水平与骨肉瘤患者生存率的关系。qRT-PCR检测骨肉瘤细胞Saos2、HOS、U-2OS、MG-63、143B及正常成骨细胞hFOB1.19中DLGAP1-AS1的表达。将HOS细胞分为DLGAP1-AS1组和control组,分别转染DLGAP1-AS1过表达载体和对照空载体。Transwell实验和流式细胞术检测骨肉瘤细胞侵袭和细胞周期。双荧光素酶报告基因系统验证DLGAP1-AS1与miR-744-3p的靶向关系。qRT-PCR检测miR-744-3p表达。qRT-PCR和Western blotting检测第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10,PTEN)表达。结果与DLGAP1-AS1表达水平较低的患者相比,DLGAP1-AS1表达水平较高的患者生存率较高(P<0.01)。与hFOB1.19细胞相比,骨肉瘤细胞Saos2、HOS、U-2OS、MG-63、143B中DLGAP1-AS1表达水平均下降(P<0.05)。与control组相比,DLGAP1-AS1组HOS细胞侵袭能力明显降低(P<0.01),细胞周期被抑制(P<0.01)。DLGAP1-AS1靶向吸附miR-744-3p(P<0.01)。与control组相比,DLGAP1-AS1组HOS细胞中miR-744-3p的表达明显降低(P<0.01),PTEN基因的表达明显增加(P<0.01)。结论DLGAP1-AS1在骨肉瘤细胞系中呈现低表达,DLGAP1-AS1通过吸附miR-744-3p促进PTEN基因表达,抑制骨肉瘤HOS细胞的侵袭和细胞周期,DLGAP1-AS1可能是骨肉瘤的潜在分子靶点。