青岛市280例高危新生儿遗传代谢性病例分析

目的:分析青岛市280例高危新生儿遗传代谢性疾病(inherited metabolic disease,IMD)病例。方法:选取2014年5月至2018年9月青岛市妇女儿童医院应用串联质谱技术进行遗传代谢疾病筛查的高危新生儿280例,采用液相色谱-串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)技术进行血液、尿液化学分析,并对初筛可疑阳性病例进行尿气相色谱检测及基因分析。结果:280例IMD高危新生儿经串联质谱初筛阳性17例(6.07%),其中脂肪酸代谢病8例(2.86%),氨基酸代谢病5例(1.78%),有机酸代谢病4例(1.42%),且甲基丙二酸血症发病率最高,占1.42%(4/280),最终确诊4例,总发病率1.42%(4/280);17例质谱初筛阳性患儿主要表现为黄疸、肝脾肿大、代谢性酸中毒、肌张力异常、喂养困难、反应力较差、惊厥或间歇性抽搐、昏迷等,实验室检查见肝功能异常、血氨升高、代谢性酸中毒、空腹低血糖;串联质谱检测中,除鸟胺酸氨甲酰基转移酶缺乏症、原发性肉碱缺乏症异常指标表现降低外,大多数指标均显著高于参考值上限。结论:青岛市具有高危因素的新生儿人群中,IMD存在一定发病率,对其进行质谱筛查意义重大。

新生儿短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症4例临床特征及基因突变分析

目的探讨青岛地区新生儿短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(SCADD)患儿的临床特征及基因突变特点。方法利用串联质谱技术检测283 104名新生儿干血滤纸片中酰基肉碱水平,对筛查出的疑似SCADD患儿通过尿有机酸检测、短链酰基辅酶A脱氢酶(ACADS)突变检测进行确诊。结果共确诊4例短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症患儿,患病率1.4/10万(1/70 776)。患儿临床表现无明显异常,串联质谱检测显示血丁酰基肉碱(C4)及其与乙酰肉碱(C2)、丙酰肉碱(C3)比值均增高。对4例患儿进行尿有机酸分析,乙基丙二酸均增高[8.41~36.34 mg/g肌酐(正常值0~6.20 mg/g肌酐)],还有2例伴乳酸增高,1例伴丙酮酸增高。基因测序共发现7种ACADS突变,4种为已知突变,3种未报道突变,均为错义突变。4例患儿均为复合杂合突变,分别为:c.1031A>G/c.989G>A;c.1186G>A/c.1195C>T;c.1031A>G/c.445A>T;c.1130C>T/c.1157G>A。常见突变为c.1031A>G(25%),ACADS基因型与乙基丙二酸以及C4浓度水平无明显相关。对患儿进行饮食指导,随访均未出现临床症状,体格及智力发育正常。结论通过血串联质谱筛查配合基因测序可以对SCADD明确诊断,早期确诊的新生儿无临床症状,预后较好。

一例新生儿瓜氨酸血症Ⅰ型ASS1基因突变分析

目的对一例新生儿筛查出的疑似瓜氨酸血症(citrullinemia)的患儿进行串联质谱和基因检测,并对其父母进行基因突变检测,以明确其诊断并进行随访。方法用串联质谱检测技术(MS/MS),对新生儿进行遗传代谢病筛查,对筛查出的疑似瓜氨酸血症的患儿采集外周血检测遗传代谢病产物,采集患儿及其父母外周血进行高通量测序和Sanger测序,对患儿及其父母的血样进行测序验证,进而对基因异常进行分析。结果该患儿瓜氨酸显著升高,为1043μmol/L,立即召回,复查瓜氨酸数值升高到2072μmol/L。检测到患儿ASS1基因有c.256C>T和c.577G>A两个杂合突变,分别遗传自父亲和母亲,确诊为瓜氨酸血症Ⅰ型。结论对新生儿进行串联质谱分析筛查,及对疑似患儿进一步基因测序分析,有助于瓜氨酸血症的诊断。

青岛地区新生儿甲基丙二酸血症和Wilson病致病基因携带者筛查

目的调查青岛地区新生儿中甲基丙二酸血症和Wilson病致病基因的携带情况。方法采用横断面研究,计算机随机抽取2016年6月至2018年12月青岛地区新生儿筛查中心的5020名新生儿,其中5012名新生儿纳入携带者筛查研究,收集新生儿筛查足跟血滤纸干血斑提取DNA,多重PCR联合二代测序技术对MMACHC基因、MUT基因和ATP7B基因进行检测,通过直接计数计算各基因热点位点的携带率,二项分布法计算致病基因携带率95%置信区间。结果共5012名新生儿完成致病基因携带者筛查,其中5006名完成两病筛查,另6名仅完成Wilson病筛查。针对ATP7B基因,筛查的12个热点变异携带率为1.46%(73/5012),95%置信区间为1.16%~1.83%;针对MMACHC基因和MUT基因,筛查的18个热点变异携带率为2.50%(125/5006),95%置信区间为2.10%~2.97%,其中cblC型占87.2%,MUT致病基因占12.8%。结论青岛地区新生儿中甲基丙二酸血症和Wilson病的致病基因携带率高。

新生儿中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症筛查和基因突变分析

目的了解青岛地区新生儿中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MCADD)的患病率、临床特征及基因突变特点。方法2015年1月-2018年8月利用串联质谱技术检测278180例在青岛地区出生的新生儿干血滤纸片中酰基肉碱水平,对筛查出的疑似MCADD患儿通过尿有机酸检测,中链酰基辅酶A脱氢酶编码基因(ACADM)基因突变检测进行确诊。结果共确诊4例中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症患儿,患病率0.0014%(1/69545)。患儿临床表现无明显异常,串联质谱检测均有中链酰基肉碱(C6~C10)升高。4例患儿共检测到7种ACADM基因突变,其中1例患儿为纯合突变,为c.1040G>T(p.G347V)/c.1040G>T(p.G347V),其它3例为复合杂合突变,分别为:c.157C>T(p.R53C)/c.709-1G>A;c.1085G>A(p.G362E)/c.461T>G(p.L154W);c.587G>A(p.G196E)/c.387+1delG。尿有机酸检测1例患儿4-羟基-苯乙酸和4-羟基苯丙酮酸指标升高,肝功能异常。对患儿进行饮食指导,随访均未出现临床症状,体格及智力发育正常。结论串联质谱新生儿筛查配合基因检测可以对MCADD早诊断,对预防疾病发作和提高患儿生活质量有重要意义。

新生儿筛查3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症可疑患儿临床及基因突变分析

目的了解新生儿疾病筛查中疑诊为3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症(MCCD)患儿的临床表现;分析3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶(MCC)基因突变类型。方法2015年8月至2020年3月将在青岛市新生儿疾病筛查中心接受新生儿筛查,并疑诊为MCCD的11例患儿(男9例,女2例)纳入本研究,对所有患儿的生长发育等随访资料进行回顾分析;对部分可疑患儿进行MCC基因突变及尿气相色谱-质谱(GS/MS)检测,通过分析结果,预测青岛地区MCC基因突变谱。结果(1)11例可疑患儿均无MCCD相关临床表现。11例可疑患儿中1例确诊为MCCD,有3例为母源性MCCD患儿,1例患儿排除MCCD。(2)本次共检出10种基因突变类型,其中MCCC1突变8种,分别为c.639+2T>A、c.1225C>T/p.R409X、c.945T>C/p.Y315Y、c.626G>T/p.G209V、c.863A>G/p.E288G、c.227228delTG/p.V76Gfs*4、c.1690delA和c.1075C>A。MCCC2突变2种,为c.281+1G>A和c.592C>T/p.Q198*。经预测,本次检出的三种新突变c.626G>T c.1075C>A和c.281+1G>A可能致病。结论11例可疑患儿均无MCCD相关临床表现,本研究MCCC1突变多见,c.639+2T>A突变可能为热点突变。

2012年-2016年青岛地区串联质谱检测结果分析

目的对2012年-2016年青岛地区串联质谱检测情况进行总结分析。方法对2012年1月-2016年12月青岛地区出生的新生儿足跟血进行氨基酸代谢异常、有机酸代谢异常、脂肪酸代谢异常等26种遗传代谢病串联质谱检测,总结目前青岛地区新生儿串联质谱筛查工作现状,分析筛查情况的逐年变化,比较青岛地区与国内外其他地区遗传代谢病发病率及种类分布,同时分析临床样本遗传代谢病的发病情况。结果青岛地区2012年串联质谱筛查5 904例,确诊1例;2016年串联质谱筛查115 791例,确诊58例,疾病种类为15种,其中以高苯丙氨酸血症和甲基丙二酸血症为主;临床可疑阳性遗传代谢病样本呈下降趋势,2016年临床样本中确诊3例遗传代谢病患者。结论青岛地区随着串联质谱筛查量的增加,遗传代谢病确诊人数和疾病种类不断增加,及时的诊疗避免了临床损害。因此,新生儿遗传代谢病串联质谱筛查非常必要,是三级预防的重要手段,对于提高人口质量意义重大。

新生儿原发性肉碱缺乏症诊治与基因突变分析

目的分析青岛地区新生儿原发性肉碱缺乏症患儿的SLC22A5基因突变特点,探讨原发性肉碱缺乏症的诊断和治疗。方法 2015年1月-2018年8月对278 180例新生儿利用串联质谱技术检测游离肉碱及酰基肉碱,并且利用肉碱转运蛋白基因突变检测对游离肉碱降低的患儿进行确诊。结果共确诊5例原发性肉碱缺乏症患儿,发病率0.001 8%(1/55 636)。对确诊患儿给予左旋肉碱治疗,100~300 mg/(kg·d),分3次口服,随访治疗1个月后,血游离肉碱均升至正常。5例患儿均检测到基因突变。其中1例患儿为纯合突变,为c.1400C>G(p.S467C)/c.1400C>G(p.S467C),其它4例为复合杂合突变,分别为:c.1400C>G(p.S467C)/c.1433C>T(p.P478L);c.1400C>G(p.S467C)/c.760C>T(p.R254X);c.1400C>G(p.S467C)/c.428C>T(p.P143L);c.1400C>G(p.S467C)/c.393+1G>A(错误剪接)。结论 c.1 400C>G(p.S467C)为青岛地区新生儿原发性肉碱缺乏症患儿SLC22A5基因主要突变(60%)类型,基因检测分析有助于原发性肉碱缺乏症的诊断。左旋肉碱治疗效果好,预后良好。

青岛地区一例单纯性高甲硫氨酸血症MAT1A基因突变分析

目的对1例在新生儿疾病筛查中利用串联质谱技术发现的可疑单纯性高甲硫氨酸血症患儿进行致病基因突变检测,为临床诊断和遗传咨询提供依据。方法从可疑单纯性高甲硫氨酸血症患儿外周血提取DNA,通过测序技术对可疑基因进行直接测序,对可疑突变进行Sanger验证。结果患儿只有足跟血甲硫氨酸指标升高,无其他临床症状。Ion Torrent半导体测序结果显示患儿携带MAT1A基因c.895C>T和c.1067G>C位点杂合突变,患儿父亲为c.895C>T突变携带者,母亲为c.1067G>C突变携带者。结论 MAT1A基因c.895C>T和c.1067G>C位点杂合突变为这例单纯性高甲硫氨酸血症患儿的致病原因,新一代半导体测序技术是遗传代谢病诊断的重要手段。

HepG2细胞表达蛋白HCVC体外活化肝星状细胞的研究

目的观察HCV核心蛋白对肝星状细胞活化及合成细胞外基质的影响,为进一步研究HCV核心蛋白的致肝纤维化机制提供实验依据。方法采用双抗体夹心ELISA检测HepG2-HCV-C细胞株培养液中TGF-β1的表达。用HepG2-HCV-C和HepG2两株细胞培养5d的上清液培养人肝星状细胞系LX-2细胞,同时用DMEM培养LX-2细胞作对照,分别制备细胞爬片,采用免疫细胞化学染色(ICC)法检测LX-2细胞中人α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)、结缔组织生长因子(CTGF)和纤维连接蛋白(FN)的表达;采用双抗体夹心ELISA检测LX-2细胞1~6d培养上清液中人ColⅣ、Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)、透明质酸(HA)和人层粘连蛋白(LN)的表达。所有数据采用SPSS11.0统计软件进行统计分析。结果双抗体夹心ELISA检测HepG2-HCV-C细胞1~6d培养液中的TGF-β1量为(110.00±11.45)pg/ml^(935.00±21.36)pg/ml,HepG2细胞为0^(124.16±11.81)pg/ml,差异有统计学意义(F=21984.81,P<0.01)。ICC检测用HepG2-HCV-C上清液培养的LX-2细胞α-SMA、ColⅣ、CTGF和FN均为弥漫阳性,细胞染成深褐色;用HepG2培养的LX-2细胞呈局灶性棕黄色,DMEM培养的LX-2细胞染色阴性。ELISA检测LX-2(HepG2-HCV-C)组ColⅣ、HA、LN和PⅢNP的值均显著高于LX-2(HepG2)组和LX-2(DMEM)组(均P<0.05或P<0.01)。结论 HCV C蛋白能上调TGF-βl的表达,表达C蛋白的细胞系能促进LX-2细胞多种细胞外基质(ECM)的合成。提示HCV C蛋白可能通过活化肝星状细胞,参与肝纤维化形成中多种ECM合成的调控。