二陈汤通过调控SCF/C-kit通路介导的痰湿型脑出血急性期胃肠功能障碍的研究

目的通过观察二陈汤对痰湿证脑出血急性期大鼠胃肠组织干细胞因子(stemcellfactor,SCF)/干细胞因子受体(C-kit)信号通路的动态变化的影响,探讨痰湿型体质与脑出血急性期胃肠功能障碍的关系及二陈汤的作用机制。方法将60只SD大鼠随机均分为空白组、假手术组、模型组、莫沙必利组(0.27 mg/d)、二陈汤低剂量组和二陈汤高剂量组(217、434 mg/d),每组10只。除空白组、假手术组外其余各组均采用自体血注入法制备大鼠脑出血模型,各组按剂量给予灌胃,空白组、假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,每天2次,于给药7天处死大鼠,采用苏木精—伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察大鼠胃肠黏膜细胞形态变化,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)法和蛋白印迹(Western blot,WB)法检测大鼠胃、小肠组织中的SCF、C-kit蛋白及mRNA的表达水平。结果光镜下见空白组、假手术组大鼠胃肠黏膜细胞结构完整、形态规则,偶见轻微充血现象;模型组见组织细胞充血、水肿、炎性细胞浸润明显、组织糜烂;莫沙必利组及二陈汤低、高剂量组胃肠黏膜各层次欠清晰、排列不规则,部分组织可见组织细胞充血、水肿、炎性细胞浸润,此3组中以二陈汤低剂量组胃肠黏膜表现最为严重。模型组大鼠胃肠组织中SCF、C-kit mRNA表达水平较空白组、假手术组显著降低(P<0.05),莫沙必利组、二陈汤低剂量组、二陈汤高剂量组的表达增加(P<0.05),莫沙必利组和二陈汤高剂量组大鼠胃组织中的SCF mRNA表达显著增加(P<0.05),二陈汤高剂量组C-kit mRNA表达显著增加(P<0.05);小肠组织中的SCF、C-kit mRNA含量随二陈汤浓度提高而增加(P<0.05)。与模型组相比,莫沙必利组、二陈汤低、高剂量组大鼠胃肠组织中SCF、C-kit蛋白表达水平较模型组显著升高(P<0.05),三组中以莫沙必利及高剂量二陈汤效果更佳(P<0.05)。结论脑出血急性期痰湿型胃肠黏膜损伤及功能障碍的作用机制与SCF/C-kit信号通路相关蛋白及mRNA的表达降低有关,二陈汤可通过此机制进行有效干预,上调相关蛋白及mRNA的表达,有利于脑出血急性期胃肠功能障碍恢复。

老年类风湿关节炎患者免疫球蛋白、类风湿因子、MBL、LncRNA MEG3水平及意义

目的探讨老年类风湿关节炎患者免疫球蛋白、类风湿因子、甘露糖凝集素(MBL)、长链非编码RNA(Ln-cRNA)MEG3水平及意义。方法选取老年类风湿关节炎患者54例为类风湿关节炎组,同期志愿者36例为健康对照组。采集空腹外周静脉血5 ml,免疫比浊法检测血清免疫球蛋白(Ig)G、IgM、IgA水平;乳胶凝集法检测血清类风湿因子表达水平,根据试剂盒说明书将类风湿因子浓度>20 IU/ml判断为阳性;酶联免疫吸附试验检测血清MBL水平;实时荧光-聚合酶链反应(RT-PCR)检测血清LncRNA MEG3表达水平。根据治疗预后分为:活动期组(DAS28>2.6分),缓解期组(DAS28≤2.6分)。结果类风湿关节炎组血清IgG、IgM、IgA水平明显高于健康对照组,类风湿因子阳性率明显高于健康对照组,血清MBL、LncRNA MEG3水平明显低于健康对照组(P<0.01)。老年类风湿关节炎患者治疗后活动期组血清IgG、IgM、IgA水平明显高于缓解期组,类风湿因子阳性率明显高于缓解期组,血清MBL、LncRNA MEG3水平明显低于缓解期组(P<0.01)。多因素Logistic回归性分析显示,IgG、IgM、IgA及类风湿因子阳性率、MBL、LncRNA MEG3表达水平是老年类风湿关节炎患者预后的独立影响因素。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,IgG、IgM、IgA及类风湿因子阳性率、MBL、LncRNA MEG3表达水平对老年类风湿关节炎患者预后均具有较高的评估价值(P<0.01);各指标联合检测的评估价值最高[曲线下面积(AUC)=0.940],敏感度、阳性预测值均明显高于各指标单独检测。结论老年类风湿关节炎患者IgG、IgM、IgA浓度及类风湿因子阳性率明显升高,MBL、LncRNA MEG3表达水平明显降低,联合检测可用于治疗预后的评估。

一株太子参内生真菌Aspergillus terreus TZS-201607中抗肿瘤活性代谢产物研究

为研究太子参内生真菌Aspergillus terreus TZS-201607所产的次级代谢产物,利用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、反相柱层析及半制备高效液相色谱等技术,从其PDB培养基发酵产物的乙酸乙酯萃取物中分离纯化得到16个单体化合物。利用波谱学方法结合文献数据分析分别鉴定为柄曲霉素(1)、5-甲氧基柄曲霉素(2)、variecoxanthone A(3)、chryxanthone A(4)、6,8-di-O-methylaverufin(5)、6,8-di-O-methylnidurufin(6)、6,8,1′-tri-O-methyl averantin(7)、(22E,24R)-ergosta-7,9(11),22-trien-3β-ol(8)、(22E,24R)-ergosta-4,6,8(14),22-trtraen-3-one(9)、(22E,24R)-3β,5α-dihydroxy-ergosta-7,22-dien-6-one(10)、(22E,24R)-3β,5α,9α-trihydroxy-ergosta-7,22-diene-6-one(11)、(22E,24R)-3α-ureido-ergosta-4,6,8(14),22-tetraene(12)、(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-3β,5α,6β-triol(13)、(22E,24R)-5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol(14)、demethylincisterol A3(15)和(17R)-17-methylincisterol(16)。化合物1~7、12、14~16为首次从A.terreus中分离得到。体外抗肿瘤活性测试显示,化合物6、7和14对人肿瘤细胞株A549、BT-549、HeLa和THP-1表现出较强的细胞毒活性(IC50<10μM)。

中药活性成分抗脑胶质瘤的作用机制及相应新剂型研究进展

目的:总结中药活性成分抗脑胶质瘤的作用机制及相应新剂型的研究进展,以期为抗脑胶质瘤的新剂型开发提供参考。方法:以“脑胶质瘤”“机制”“中药活性成分”“剂型”“glioma”“mechanism”“active components of traditional Chinese medicine”“dosage form”等为关键词在中国知网、维普网、万方数据库、Web of Science中组合检索2010年1月-2021年4月发表的相关文献,对中药活性成分抗脑胶质瘤的作用机制及相应新剂型进行归纳总结。结果与结论:中药活性成分(如木犀草素、没食子酸、黄芩苷元、槲皮素、山柰素等)可通过诱导自噬、调控细胞周期、抑制肿瘤相关细胞因子活性等作用机制,发挥抗脑胶质瘤的作用。目前中药活性成分已被设计成多种靶向制剂,如基于生物特异性的靶向制剂(包括纳米粒靶向制剂、微乳制剂、水凝胶制剂、以内源性细胞为载体的靶向制剂等)、基于肿瘤微环境的靶向制剂(包括靶向肿瘤细胞内活性氧升高效应的制剂、靶向肿瘤内环境谷胱甘肽过表达的制剂、靶向肿瘤弱酸性环境的制剂等)等,提高了药物的滞留时间以及生物利用度,增强了药物的靶向性,延迟了药物的多药耐药,进而提高了药物疗效。目前中药活性成分抗脑胶质瘤的剂型研究多是基于紫杉醇、山柰素等常规药物成分,较为单一,后续应开发更多中药活性成分抗脑胶质瘤的新剂型。

丹参酮ⅡA通过抑制信号通路延缓膝骨关节炎大鼠软骨退变及抑制局部炎症的研究

目的探究丹参酮ⅡA(TanⅡA)通过抑制相关信号通路延缓膝骨关节炎(KOA)大鼠模型软骨退变和抑制局部炎症的作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为假手术组、KOA组、阳性药物塞来昔布20 mg·kg^(-1)组、TanⅡA不同剂量处理组(TanⅡA10、20、50 mg·kg^(-1)),每组各12只。采用前交叉韧带切断术(ACLT)建立KOA大鼠模型,造模成功次日,各实验组腹腔注射不同剂量TanⅡA,假手术组和KOA组给予等体积生理盐水,共给药28 d。通过步态行为分析、机械刺激缩足反应阈值(PWMT)和热刺激缩足反应潜伏期(PWTL)来评价大鼠疼痛行为;改良的Mankin's评分和OARSI评分评价软骨病理损伤程度;酶联免疫吸附测定法检测关节组织和血清中炎症因子、骨代谢生化指标水平;免疫组化法检测软骨组织中核因子κB p65(NF-κB p65)和Ⅱ型胶原(COL2A1)蛋白表达;Western blot法检测TLR4/Myd88/NF-κB信号通路相关蛋白Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白(Myd88)及NF-κB p65表达水平;分离胞核和胞浆蛋白,检测NF-κB p65核转位。结果实验结束时,与假手术组相比,KOA组和各实验组大鼠步态行为评分、PWTL、软骨组织COL2A1蛋白表达MOD值降低,同时PWMT、Mankin's评分和OARSI评分、关节组织和外周血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Ⅰ型胶原交联C-末端肽(CTX-Ⅰ)、Ⅱ型胶原交联C-末端肽(CTX-Ⅱ)水平升高,软骨组织中TLR4、Myd88和NF-κB p65蛋白表达上调,同时NF-κB p65核转位明显(均P<0.05)。此外,与KOA组相比,塞来昔布组和TanⅡA不同剂量处理组大鼠步态行为评分、PWTL、软骨组织COL2A1蛋白表达MOD值升高,同时PWMT、Mankin's评分和OARSI评分、关节组织和外周血清IL-1β、IL-6、TNF-α、CTX-Ⅰ、CTX-Ⅱ水平降低,软骨组织中TLR4、Myd88和NF-κB p65蛋白表达下调,同时NF-κB p65核转位被抑制(均P<0.05)。尤其是TanⅡA 50 mg·kg^(-1)组上述指标改善更显著。结论TanⅡA通过抑制TLR4/Myd88/NF-κB信号通路相关蛋白表达,减少细胞炎症因子释放,进而抑制关节软骨退变,达到改善KOA大鼠膝关节功能的目的。

太子参内生真菌草酸青霉中1个新的香豆酮类化合物

目的研究太子参Pseudostellaria heterophylla内生真菌草酸青霉Penicillium oxalicum的次级代谢产物。方法采用正、反相硅胶柱色谱,葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱色谱以及制备薄层色谱(pTLC)等色谱技术进行系统分离纯化,采用质谱(MS)、核磁共振(NMR)等波谱学手段对单体化合物进行结构鉴定。结果从草酸青霉发酵产物的醋酸乙酯萃取液中分离鉴定了12个化合物,包括1个香豆酮类化合物5,7-二羟基-2-甲基苯并呋喃-3-羧酸(1)、5个异香豆素类化合物(3R,4R)-(-)-4-hydroxymellein(2)、O-methylmellein(3)、acremonone G(4)、decarboxycitrinone(5)和decarboxyhydroxycitrinone(6),4个没药烷型倍半萜类化合物(7S,11S)-(+)-12-acetoxysydonic acid(7)、(S)-(+)-11-dehydrosydonic acid(8)、sydonic acid(9)和1-hydroxy-boivinianinA(10),2个混源萜类化合物decaturin D(11)和decaturin C(12)。结论化合物1为新化合物,命名为草酸苯并呋喃酸A,化合物2~6、10为首次从草酸青霉中分离得到。

探讨延胡索乙素调控miR-22介导NLRP3/Caspase-1/GSDMD细胞焦亡通路对老年急性胃炎大鼠炎症及胃黏膜的影响

目的研究延胡索乙素(THP)调控微小RNA(miR)-22介导NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白(NLRP)3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-1/消皮素(GSDM)D细胞焦亡通路对老年急性胃炎大鼠炎症及胃黏膜的影响。方法将40只大鼠随机分为空白对照(NC)组、模型(Model)组、THP(20 mg/kg THP)组、THP+miR-22 inhibitor组,每组10只。除NC组外,其余各组采用乙醇、水杨酸混合液灌胃法构建急性胃炎模型。记录胃炎发生计分及溃疡指数;苏木素-伊红(HE)染色法观察胃组织病理学状态;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、表皮生长因子(EGF)水平;硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)水平;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-qPCR)检测miR-22 mRNA表达水平;荧光原位杂交(FISH)检测miR-22表达水平;Western印迹检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达水平。结果NC组胃组织结构正常;与NC组相比,Model组可见胃黏膜部分上皮坏死脱落、固有层腺体部分消失、炎性细胞浸润等病理损伤、胃炎发生计分、溃疡指数、炎症分子TNF-α、IL-1β水平及氧化应激因子MDA、EGF含量、NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白表达水平明显升高,SOD、NO含量及miR-22表达水平明显降低(P<0.05);与Model组相比,THP组胃组织病理损伤程度均减轻、胃炎发生计分、溃疡指数、TNF-α、IL-1β水平及MDA、EGF含量、NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白表达水平明显降低,SOD、NO含量及miR-22表达水平明显升高(P<0.05);与THP组相比,THP+miR-22 inhibitor组MDA、EGF含量、NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白表达水平明显升高,SOD、NO含量明显降低(P<0.05)。结论THP能够减轻急性胃炎老年大鼠的胃黏膜损伤,抑制炎症反应和氧化应激反应,可能与其调控miR-22介导NLRP3/Caspase-1/GSDMD细胞焦亡通路有关。