仿刺参糖胺聚糖对肺癌患者外周血体外细胞免疫调节功能研究

目的探讨仿刺参糖胺聚糖(HGAG)对肺癌患者外周血体外细胞免疫功能影响。方法选取健康人群40名(健康组)和肺癌患者30例(肺癌组)抗凝外周血4mL,应用淋巴细胞分离液采用Ficoll密度梯度离心法分离PBMC,体外与不同浓度HGAG共培养24h。流式细胞仪检测CD45RA及CD45RO,以及CD1a、CD83分子的表达。结果健康组和肺癌组CD45RA和CD45RO培养前表达差异有统计学意义(P<0.05),培养24h后差异明显(P<0.001)。培养后肺癌组CD45RA和CD45RO在10和50μg·mL^(-1)间表达无差异(P>0.05),而健康组在50μg·mL^(-1)时CD45RO表达有差异性(P<0.001),CD45RA表达无差异性(P>0.05)。健康组与肺癌组在与50μg·mL^(-1) HGAG培养前、后CD1a表达无差异性(P>0.05);CD83表达在肺癌组有差异性(P<0.001),健康组无差异(P>0.05)。结论 HGAG在一定浓度范围内可以下调CD45RA分子表达和上调CD45RO分子表达,以及促进肺癌患者DC成熟,体外调节肺癌患者的细胞免疫功能。

放射性125I粒子植入对人肺腺癌裸鼠移植瘤微血管生成的影响

目的 探讨放射性125I粒子植入对人肺腺癌裸鼠移植瘤微血管生成的影响及其作用机制。方法 制备人肺腺癌细胞A549裸鼠皮下移植瘤模型24只，采用随机数字表法分为4组，每组6只，0、22.2、29.6 MBq组和对照组。用18 G植入针在各组裸鼠瘤体内分别植入放射活度为0、22.2和29.6 MBq 125I粒子，每个移植瘤内植入一枚，对照组不予处理。观察肿瘤生长情况，每4天测量肿瘤大小。30 d后处死裸鼠，绘制肿瘤生长曲线。瘤组织免疫组织化学S-P法检测微血管密度（microvascular density，MVD），并分别用RT-PCR、Western blot法检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）的mRNA及蛋白的表达。结果 粒子植入治疗后54 d，22.2、29.6 MBq组移植瘤体积明显小于对照组（q=14.117、17.075，P〈0.05），但0 MBq组与对照组、22.2与29.6 MBq组瘤体积差异均无统计学意义（P〉0.05）。CD34阳性染色结果显示，22.2 MBq组的MVD为522±119，29.6 MBq组为491±121，明显低于对照组的922±260（q=4.826、5.197，P〈0.05），但0 MBq组与对照组、22.2 MBq组与29.6 MBq组差异均无统计学意义（P〉0.05）。RT-PCR检测表明，22.2 MBq组的VEGF和HIF-1α mRNA相对表达量分别为0.279±0.0659和0.370±0.0857，29.6 MBq组为0.215±0.0620、0.278±0.0651，均低于对照组（q=18.881、17.211和15.376、14.733，P〈0.05），但0 MBq组与对照组、22.2 MBq组与29.6 MBq组之间差异均无统计学意义（P〉0.05）。Western blot结果显示，22.2 MBq组与29.6 MBq组瘤组织VEGF和HIF-1α蛋白表达均明显减少，与对照组相比，差异有统计学意义（q=5.848、6.263和6.560、7.576，P〈0.05），但0 MBq组与对照组以及22.2 MBq组与29.6 MBq组差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 放射性125I粒子植入能有效抑制人肺腺癌裸鼠移植瘤微血管生成。

放射性^125I粒子对人肺腺癌细胞株A549裸鼠移植瘤生长抑制及细胞凋亡机制研究

目的 探讨放射性125I粒子对人肺腺癌细胞株A549裸鼠移植瘤生长抑制及细胞凋亡机制。方法 体外培养人肺腺癌A549细胞，构建BALA/c裸鼠皮下移植瘤模型，待移植瘤长到（300±50）mm3时，将40只荷瘤小鼠采用随机数表法分成4组，分别为空源粒子组（0 mCi组）、0.6和0.8 mCi（1 Ci=3.7×1010 Bq）组和空白对照组，每组10只。将放射性活度为0、0.6和0.8 mCi的125I粒子分别植入裸鼠移植瘤内，空白对照组不作任何处理。每4天定期测量裸鼠体重，共观察32 d。粒子植入移植瘤32 d后处死裸鼠，称量移植瘤质量，绘制裸鼠体重增长曲线。切取瘤组织采用苏木素-伊红（HE）染色观察肿瘤组织病理学变化；末端脱氧核苷酸转移酶-生物素dUTP切口末端标记法（TUNEL）检测肿瘤细胞凋亡；用免疫组织化学法检测凋亡因子P21、Caspase-9、Survivin、Livin蛋白的表达。结果 各组裸鼠无死亡。在放射性粒子植入的第28和32天，0.6和0.8 mCi组裸鼠体重明显小于空白对照组，差异有统计学意义（q=4.26、9.19、4.11、11.59，P〈0.05）。0.6和0.8 mCi组瘤体质量均小于空白对照组（q=5.021、5.692，P〈0.05），抑瘤率依次约为49%和62%，而0 mCi组瘤体重与空白对照组比较，差异无统计学意义（P〉0.05）。0.6和0.8 mCi组瘤细胞大量变性坏死，0 mCi组与空白对照组的瘤细胞排列紧密，未见明显坏死。0.6和0.8 mCi组的凋亡指数明显增加，分别为（50.00±2.58）%和（62.33±4.51）%，与空白对照组（27.00±4.69）%比较，差异均有统计学意义（q=14.957、10.918，P〈0.05）。P21和Caspase-9蛋白在0.6和0.8 mCi组的表达比空白对照组明显增加，差异有统计学意义（χ^2=11.380、24.310、11.380、20.376，P〈0.05）。Survivin和Livin蛋白在0.6和0.8 mCi组的表达比空白对照组明显减少（χ^2=9.643、23.254、15.429、26.667，P〈0.05）。结论 放射性125I粒子可以抑制肿瘤细胞的增殖，并可能通过上调P21和Caspase-9表达、下调Survivin和Livin表达促进A549细胞的凋亡。

海参糖胺聚糖联合顺铂对肺腺癌A549细胞的增殖抑制及化疗增敏的作用机制

目的探讨海参糖胺聚糖（hGAG）与顺铂（DDP）单独或联合应用对人肺腺癌A549细胞株的增殖抑制作用及hGAG对DDP化疗的增敏机制。方法将对数生长期的A549细胞分为hGAG组、DDP组、hGAG和DDP联合组（联合组）以及对照组。倒置相差显微镜观察细胞的生长状态和形态变化，CCK-8法检测各组细胞的增殖抑制率，Hoeehst33258染色、annexinV-FITC和PI双染法检测细胞的凋亡情况，Westernblot检测各组凋亡蛋白Bel-2、Bax、survivin和easpase-3的表达。结果CCK-8检测结果显示，处理24h后，hGAG组、DDP组、联合组和对照组A549细胞的增殖抑制率分别为（19．74±5．39）％、（42．01±2．57）％、（53．89±4．58）％和0；处理48h后，分别为（23．17±4．78）％、（54．00±7．64）％、（77．58±4．26）％和0；处理72h后，分别为（29．17±4．21）％、（59．35±7．31）％、（79．94±4．58）％和0;同一时间hGAG组、DDP组和联合组A549细胞的增殖抑制率均高于对照组（均P〈0．05）．联合组A549细胞的增殖抑制率均高于DDP组（均P〈0．05）。Hoehest33258染色结果显示，对照组未见凋亡细胞，hGAG组、DDP组和联合组均可见凋亡细胞，其中联合组凋亡细胞数最多，且细胞密度最低。流式细胞术检测结果显示，hGAG组、DDP组、联合组和对照组细胞中早、中期细胞凋亡率分别为（12．59±4．22）％、（16．36±3．63）％、（44．60±5．45）％和（2．38±0．59）％，hGAG组、DDP组和联合组的细胞凋亡率均高于对照组（均P〈0．05），联合组高于DDP组（P〈0．05）。Westernblot检测显示．与对照组比较，hGAG组、DDP组和联合组细胞中Bax和easpase．3蛋白的表达均增高（均P〈0．05），联合组细胞中Bax和easpase-3蛋白的表达均高于DDP组（均P〈0．05）；而Bel-2和survivin蛋白的表达均降低（均P〈0．05），且联合组中Bel-2和survivin蛋白的表达均低于DDP组（均P〈0．05）。结论hGAG对人肺腺癌A549细胞的增殖具有抑制作用，且可增强A549细胞对DDP化疗的敏感性，其作用机制可能与上调Bax和caspase．3蛋白的表达以及下调Bcl-2和survivin蛋白的表达有关。

光动力治疗肿瘤分子机制研究进展

光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)是利用光敏剂高浓度聚集分布于肿瘤组织中的特性,经特定波长激光照射光敏剂处理后的肿瘤细胞,产生氧化反应破坏肿瘤细胞及其生长环境,从而治疗肿瘤的一种新型微创治疗方法。它的治疗机制主要包括:诱导肿瘤细胞凋亡和(或)坏死;阻断肿瘤组织血供,使其缺血、缺氧及导致血栓形成;调节免疫反应等。光动力疗法不仅可以在一定程度上改善肿瘤患者的生存质量,并且可以延长肿瘤患者的生存时间。随着光敏剂的不断研制及实验方法的不断改进,关于光动力在肿瘤治疗方面的分子机制进行了深入研究。本文就光动力治疗肿瘤分子机制方面作一综述。

溶瘤病毒H101联合照射对人肺腺癌细胞系A549凋亡及毒性的研究

目的 探讨溶瘤病毒（H101）与射线对人肺腺癌细胞系A549凋亡及毒性的影响。方法 体外培养人肺癌细胞系A549，取对数生长期的肺癌细胞，分为对照组（PBS）、单纯照射组（IR组）、溶瘤病毒组（H101组）、照射联合溶瘤病毒组（IR＋H101组）。采用膜联蛋白异硫氰酸荧光素/碘化丙锭（Annexin V-FITC/PI）进行双染，流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况；采用乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测各组细胞毒性；用实时荧光定量RT-PCR检测H101表面衣壳蛋白Hexon mRNA表达并比较病毒复制情况。结果 H101组细胞凋亡率（55.37%）与对照组细胞凋亡率（1.03%）比较，差异有统计学意义（t=36.51，P〈0.05）；IR＋H101组细胞凋亡率（93.06%）与H101组（55.37%）、IR组（12.67%）以及对照组（1.03%）比较，差异均有统计学（t=13.51、24.14、38.99，P〈0.05）；与对照组比较，IR组和H101组在各个时间段的细胞LDH释放百分比差异有统计学意义（t=25.84、39.38、32.51、78.18，P〈0.05；t=31.40、2.68、23.43、60.98，P〈0.05）；IR＋H101组细胞LDH释放百分比与对照组比较（t=80.71、119.74、109.80、123.94，P〈0.05）、IR组（t=28.80、54.34、72.34、61.91，P〈0.05）和H101组（t=42.02、57.45、57.01、58.83，P〈0.05），差异均有统计学意义；与H101组比较，IR ＋ H101组Hexon的mRNA表达量在24、48和72 h分别增长了16.26、28.37和39.58倍，差异有统计学意义（t=54.50、33.73、29.28，P〈0.05）。结论 H101对肿瘤细胞具有放射增敏作用，同时射线也增强了H101的溶瘤作用，两者联合协同互补对肿瘤细胞起到杀伤作用。