转基因羊对体表吸血蜱的生物学特性影响

本文对转基因动物养殖基地的3种不同的转基因山羊(转人β-干扰素、人抗凝血酶Ⅲ和乙肝表面抗原基因)与野生型山羊体表吸血蜱的生物学特性进行比较研究,分析了蜱的种类、感染率、感染强度、饱血雌蜱的产卵量和幼蜱孵化率,以及第二代蜱实验条件下生长发育数据,从而探索转基因羊对环境生物的安全评估。结果发现,与野生型羊群比较,转基因羊群对体表吸血蜱的侵袭能力和吸血后各项生长发育的生物学特征无显著影响。

转基因克隆奶山羊大量生产重组人的抗凝血酶Ⅲ蛋白质(rhATⅢ)

利用转基因克隆奶山羊乳腺生物反应器大量生产重组人的抗凝血酶Ⅲ(rhATⅢ)蛋白质。其中包括:筛选出人的抗凝血酶Ⅲ蛋白基因的cDNA序列;利用山羊的β-酪蛋白基因的启动区,终止信号和Enterokinase蛋白酶酶切DNA序列,构建在乳腺中特异表达rhATⅢ的表达载体。同时在转基因载体的末端连接一个新酶素筛选基因(Neomycin)。再以细胞转染、G418筛选和体细胞核移植(动物克隆)等过程,最后获得含有人的抗凝血酶Ⅲ基因的转基因克隆奶山羊。我们共获得了5个原代转基因公羊。第一只克隆羊在出生后78 d死亡,解剖表明:羊的肺部和肾脏等器官有异常。其它克隆公羊经过与崂山种母羊交配,得到转基因后代,其中两个原代转基因羊的后代母羊已成熟、所获得的奶经蛋白质电泳证明:转基因克隆羊后代奶中含有约60 kD大小的rhATⅢ糖蛋白;经Elisa检测表明:在奶中含有大量活性的rhATⅢ,在来源于两个不同克隆公羊的后代母羊奶中的rhATⅢ含量分别为0.4mg/L和3 g/L。此研究证明:转基因奶山羊可以大量地生产具有很高活性的rhATⅢ。用这种方法生产的rhATⅢ通过蛋白质提纯,制成注射针剂,将可用于人的抗凝血酶Ⅲ缺乏症的治疗、预防血栓和重大手术过程中的止血的作用等。

转基因山羊精液品质、血常规和血清及精浆生化指标的分析

以转抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)、β-干扰素(IFN-β)、乙肝表面抗原(HBsAg)基因奶山羊为实验材料,非转基因山羊为对照组,运用常规镜检、酶联免疫分析、全自动生化分析仪等方法,从精液品质、精浆生化指标、血常规、血清生化指标等方面系统评价转基因公羊的繁殖能力与健康状况。结果表明:常规镜检精子活力、精子密度、活精子百分数、精子质膜完整率、精子顶体完整率及精子呼吸强度各项指标与对照组相比均无显著性差异(P>0.05);精浆锌、中性α-葡萄糖糖苷酶、酸性磷酸酶、果糖含量差异均不显著(P>0.05);血常规指及血清生化指标均差异不显著(P>0.05)。初步证实,外源基因抗凝血酶Ⅲ、β-干扰素、乙肝表面抗原的导入对转基因山羊的繁殖性能及健康状况均未产生不良影响。

转基因山羊抑制口蹄疫病毒3D基因

利用shRNA与高效的"睡美人"(sleeping beauty,SB)转座子系统生产抑制口蹄疫病毒3D基因复制的山羊.对口蹄疫病毒基因(2B,3D)shRNA抑制靶点进行筛选,构建了3条含靶基因shRNA的pLL3.7表达载体,与含靶基因的psiCheck2载体(双荧光素标记)共转染293FT细胞,对合成的shRNA进行筛选.获得的抑制效果好的3D1shRNA(干扰3D基因)插入到SB转座子载体上,将含3D1shRNA的SB转座子与转座酶(2:1,5:1,10:1)通过原核显微注射生产转基因山羊.出生羔羊进行Southern blot与整合位点鉴定,对阳性个体耳成纤维细胞转染含3D基因的pisCheck2载体,观察其抑制率.结果共获得了7只阳性山羊.SB转座子与转座酶的比例为10:1时,生产转基因山羊的效率为21.05%.阳性个体耳成纤维细胞对口蹄疫病毒3D基因有显著抑制效果.

人抗凝血酶Ⅲ转基因羊的外源基因漂移风险分析

目的:研究转基因羊发生基因漂移的可能性。方法:利用实时荧光定量PCR技术检测人抗凝血酶Ⅲ转基因羊及与其密切接触的野生型山羊、转乙肝表面抗原基因羊、转β-干扰素转基因羊、狗、鸡和鹅的血样中人抗凝血酶Ⅲ基因的含量。结果:人抗凝血酶Ⅲ转基因只在人抗凝血酶Ⅲ转基因羊血液中检测呈阳性。结论:人抗凝血酶Ⅲ基因没有在转基因羊和非转基因羊及其它动物间发生漂移,提示转基因羊对于环境是安全的。