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小干扰RNA沉默HIF-1α对缺氧状态下脉络膜黑色素瘤细胞中MMP-2表达的影响
被引量:
1
1
作者
苑伏香
张霆
+4 位作者
周占宇
王良雨
赵娟
王爽
卢发艳
《国际眼科杂志》
CAS
2015年第7期1139-1142,共4页
目的:以小干扰RNA沉默人眼脉络膜黑色素瘤细胞中的低氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)基因,在缺氧状态下观察其对人眼脉络膜黑色素瘤(human uveal melanoma cell,OCM-1)细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase...
目的:以小干扰RNA沉默人眼脉络膜黑色素瘤细胞中的低氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)基因,在缺氧状态下观察其对人眼脉络膜黑色素瘤(human uveal melanoma cell,OCM-1)细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)基因表达的影响。方法:将脉络膜黑色素瘤细胞分为正常组与缺氧组,其中将缺氧组再分成单纯缺氧组、干扰组、脂质体对照组、阳性对照组和阴性对照组;对正常组细胞用含有浓度为10%的胎牛血清和1%的双抗(青-链霉素混合液)的DMEM高糖培养基进行培养。在缺氧组人眼OCM-1细胞的培养瓶中加入100μmol/L CoC l2以构建肿瘤细胞内部的缺氧微环境。干扰组转染HIF-1αsiRNA,阴性对照组转染无义siRNA,阳性对照组转染β-actin siRNA,脂质体对照组转染空脂质体。RT-PCR检测细胞中HIF-1α和MMP-2 mRNA的表达,行Western-blot检测HIF-1α和MMP-2蛋白的表达。结果:与正常组相比,单纯缺氧组HIF-1α蛋白的表达增高(P<0.05),而其mRNA表达量无明显变化(P>0.05);MMP-2 mRNA及蛋白的表达升高(P<0.05)。缺氧培养的各组之间相比,阳性对照组β-actin mRNA表达下降(P<0.05),证实转染成功;干扰组HIF-1αmRNA和MMP-2mRNA和蛋白表达均下降(P<0.05),阴性对照组、脂质体对照组各检测因素均无明显差别(P>0.05)。结论:缺氧条件下可以提高人眼脉络膜黑色素瘤细胞中HIF-1α蛋白的表达,而且HIF-1α蛋白的表达水平可以影响MMP-2的转录与翻译,从而可能进一步影响人眼脉络膜瘤细胞的外周浸润和远处转移能力。
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关键词
脉络膜黑色素瘤
缺氧
HIF-1Α
MMP-2
小干扰RNA
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职称材料
题名
小干扰RNA沉默HIF-1α对缺氧状态下脉络膜黑色素瘤细胞中MMP-2表达的影响
被引量:
1
1
作者
苑伏香
张霆
周占宇
王良雨
赵娟
王爽
卢发艳
机构
中国山东省
青岛
市市立医院
苏州大学附属理想
眼科
医院
青岛眼科研究所
青岛
大学
出处
《国际眼科杂志》
CAS
2015年第7期1139-1142,共4页
文摘
目的:以小干扰RNA沉默人眼脉络膜黑色素瘤细胞中的低氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)基因,在缺氧状态下观察其对人眼脉络膜黑色素瘤(human uveal melanoma cell,OCM-1)细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)基因表达的影响。方法:将脉络膜黑色素瘤细胞分为正常组与缺氧组,其中将缺氧组再分成单纯缺氧组、干扰组、脂质体对照组、阳性对照组和阴性对照组;对正常组细胞用含有浓度为10%的胎牛血清和1%的双抗(青-链霉素混合液)的DMEM高糖培养基进行培养。在缺氧组人眼OCM-1细胞的培养瓶中加入100μmol/L CoC l2以构建肿瘤细胞内部的缺氧微环境。干扰组转染HIF-1αsiRNA,阴性对照组转染无义siRNA,阳性对照组转染β-actin siRNA,脂质体对照组转染空脂质体。RT-PCR检测细胞中HIF-1α和MMP-2 mRNA的表达,行Western-blot检测HIF-1α和MMP-2蛋白的表达。结果:与正常组相比,单纯缺氧组HIF-1α蛋白的表达增高(P<0.05),而其mRNA表达量无明显变化(P>0.05);MMP-2 mRNA及蛋白的表达升高(P<0.05)。缺氧培养的各组之间相比,阳性对照组β-actin mRNA表达下降(P<0.05),证实转染成功;干扰组HIF-1αmRNA和MMP-2mRNA和蛋白表达均下降(P<0.05),阴性对照组、脂质体对照组各检测因素均无明显差别(P>0.05)。结论:缺氧条件下可以提高人眼脉络膜黑色素瘤细胞中HIF-1α蛋白的表达,而且HIF-1α蛋白的表达水平可以影响MMP-2的转录与翻译,从而可能进一步影响人眼脉络膜瘤细胞的外周浸润和远处转移能力。
关键词
脉络膜黑色素瘤
缺氧
HIF-1Α
MMP-2
小干扰RNA
Keywords
uveal melanoma cell
hypoxia
hypoxia-inducible factor-1 alpha
m atrix m etalloproteinases-2
sm all interference RNA
分类号
R739.7 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小干扰RNA沉默HIF-1α对缺氧状态下脉络膜黑色素瘤细胞中MMP-2表达的影响
苑伏香
张霆
周占宇
王良雨
赵娟
王爽
卢发艳
《国际眼科杂志》
CAS
2015
1
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