三氧化二砷对腺样囊性癌ACC-2细胞TNF-α基因表达的影响

研究目的:本实验旨在通过研究As2O3对体外培养的ACC-2细胞增殖、凋亡的影响,从而探讨其对ACC-2细胞诱导凋亡的具体机制。研究方法:将ACC-2细胞进行体外培养并分为实验组和对照组,于细胞指数生长期向实验组加入不同浓度梯度(2.0、4.0、6.0、8.0 μmol/L)的含As2O3细胞培养液,对照组则给予等量全细胞培养液,加入As2O3后分别培养不同时间(12、24、36、48 h),密切观察各时间点不同浓度As2O3对腺样囊性癌ACC-2细胞的生长抑制作用和细胞凋亡的形态变化,并应用荧光定量RT-PCR和免疫细胞化学技术检测TNF-α基因和蛋白的表达变化。研究结果:1) 随着加入As2O3浓度及时间增加,显微镜下可见胞体缩小变圆,细胞接触减少,细胞间隙变大,胞浆内颗粒样物质增多,胞核固缩,贴壁细胞减少,漂浮坏死的细胞逐渐增多。表示As2O3对ACC-2细胞的生长具有抑制作用,且随着药物浓度的升高,细胞的生长抑制作用逐渐加强。2) 免疫细胞化学检测结果示在细胞核和细胞浆均有TNF-α蛋白表达,以细胞核为主,不同浓度As2O3作用于ACC-2细胞后,阳性颗粒随浓度及作用时间增加逐渐向细胞核聚集并增强,测得的平均光密度值(IOD/area)逐渐增大,不同浓度总体比较TNF-α蛋白表达量差异有统计学意义,但不同处理时间总体比较TNF-α蛋白表达量差异无统计学意义;两两比较,不同浓度除0 μmol/L与2 μmol/L及6 μmol/L与8 μmol/L外其余均有统计学意义(P 0.05)。3) RT-PCR结果显示在空白对照组和实验组ACC-2细胞中TNF-α mRNA均存在表达,其表达量随着As2O3浓度的增加和作用时间的延长略有下降,但不同浓度及时间点总体比较差异均无统计学意义(P >0.05),不同浓度两两比较均无统计学差异(P >0.05),不同时间两两比较均无统计学差异(P >0.05),这与免疫组化结果不同。结论:As2O3对体外培养的ACC-2细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用,能够上调腺样囊性癌ACC-2细胞中TNF-α蛋白的表达及分泌,使TNF-α在蛋白水平参与As2O3诱导ACC-2细胞的凋亡。