miR-15b靶向LPAR3对食管癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-15b靶向LPAR3调控食管癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法取对数生长期的人食管癌Eca109细胞分为对照组、miR-15b mimic组、miR-NC组、miR-15b mimic+pcDNA3.1组、miR-15b mimic+pcDNA-LPAR3组;另设对数期生长的人食管上皮细胞HEEpiC为空白组。采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-15b和LPAR3 mRNA的表达;应用MTT法、划痕实验和Transwell小室实验分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭情况;Western blot检测Eca109细胞中LPAR3和增殖、迁移、侵袭相关蛋白(Cyclin D1、MMP-2、MMP-9)的表达。结果与空白组相比,对照组Eca109细胞中miR-15b水平明显降低(1.00±0 vs 0.42±0.03,t=33.486,P<0.01),LPAR3 mRNA水平显著升高(1.00±0 vs 2.33±0.15,t=15.358,P<0.01);与对照组相比,miR-15b mimic组细胞miR-15b水平显著升高(0.42±0.03 vs 4.61±0.38,t=19.039,P<0.01),LPAR3 mRNA(2.33±0.15 vs 1.29±0.13)和蛋白(1.12±0.13 vs 0.35±0.03)水平、细胞增殖率(100.00±0 vs 64.57±6.11)、划痕愈合率(63.45±7.20 vs 36.52±4.29)、Eca109细胞进入Transwell小室下层的数量(155.31±14.23 vs 101.33±11.45)、Cyclin D1(0.85±0.10 vs 0.38±0.05)、MMP-2(0.76±0.08 vs 0.33±0.04)、MMP-9(0.94±0.10 vs 0.41±0.05)蛋白表达均显著降低(t=9.075、9.996、10.044、5.565、5.119、7.281、8.327、8.211,P<0.01);使用pcDNA-LPAR3过表达LPAR3能明显逆转miR-15b mimic对细胞增殖、迁移和侵袭的抑制能力。结论食管癌中过表达miR-15b可能通过下调LPAR3表达,抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。

大黄素通过上调miR-1301抑制胰腺癌SW1990细胞的增殖迁移和侵袭

目的:探讨大黄素对胰腺癌SW1990细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法:体外培养人胰腺正常导管上皮细胞HPDE6和胰腺癌Panc-1、SW1990细胞,将SW1990分为对照组、低剂量大黄素组、中剂量大黄素组、高剂量大黄素组、miR-NC组、miR-1301组、高剂量大黄素+anti-miR-NC组、高剂量大黄素+anti-miR-1301组;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-1301的表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活力;Western blot法检测蛋白表达;Transwell检测细胞的迁移和侵袭。结果:与人胰腺正常导管上皮细胞HPDE6比较,胰腺癌Panc-1、SW1990细胞中miR-1301的表达水平显著降低(P<0.05);与对照组比较,中、高剂量大黄素显著降低胰腺癌SW1990细胞的活力、迁移侵袭能力以及CyclinD1、MMP-2、MMP-9水平,升高p21水平(P<0.05);与对照组比较,中、高剂量大黄素组miR-1301的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-1301显著降低胰腺癌SW1990细胞的活力、迁移侵袭能力以及CyclinD1、MMP-2、MMP-9水平,升高p21水平(P<0.05);下调miR-1301逆转了大黄素对胰腺癌SW1990细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论:大黄素可能通过上调SW1990细胞中miR-1301的表达抑制细胞增殖、迁移和侵袭。

结肠腺癌组织中Keap1的表达及其与Ki67增殖指数的相关性

目的:检测结肠腺癌组织中Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)的表达,分析其与Ki67增殖指数(Ki67)的相关性。方法:本实验以93例结肠腺癌术后的肿瘤组织作为观察组,选择距肿物边缘>3 cm经病理证实的正常结肠黏膜组织作为对照组。应用免疫组化法和荧光PCR法检测两组中Keap1蛋白和mRNA的表达。应用相关分析法分析Keap1与Ki67增殖指数的相关性。结果:免疫组化方法显示两组中Keap1蛋白的阳性率差异有统计学意义。观察组中Keap1的阳性率与肿物最大径、淋巴结转移、脉管癌栓、浸润深度和TNM分期相关,而与性别、年龄、分化程度、是否有癌结节无关。观察组中Keap1的表达与预后相关。观察组中Keap1的表达与Ki67增殖指数呈负相关。荧光PCR法显示两组中Keap1 mRNA的表达差异有统计学意义。结论:Keap1在结肠腺癌组织中低表达,可能与更大的肿瘤直径、更多的淋巴结转移、脉管癌栓的出现、更深的肿瘤浸润及更晚的TNM分期相关。Keap1可能通过抑制细胞增殖起作用,术后检测Keap1的表达对判断预后有一定价值。