青海大学医学院本科实验教学改革探索与实践

生物化学是生物学领域各专业学生必修的一门重要专业基础课，是学习其他相关专业课的基础。生物化学实验是学好本课程的关键环节。结合生物化学实验教学的现状，从培养适应社会发展所需要的高素质人才角度出发，在生物化学实验课教学改革上进行了一些初步的尝试。实践证明，这样的改革可提高生物化学实验课的教学质量。

医学生物化学实验教学改革的思考和探索

生物化学是医学相关专业的基础课程之一,搞好生物化学实验教学是学好本课程的关键环节,为了满足社会高素质人才的需求,对生物化学实验教学进行了探索和尝试,多种实验教学方式相结合能更好地适应新时期医学教育的要求和发展。

联合“对分易”及“学堂在线”平台进行医学生物化学辅助 教学与过程性评价的实践与探索

混合式教学是E时代背景下现代教学模式的发展产物,我校教务处高度重视发展新的教育手段和模式,并鼓励教师进行教学改革,因此医学生物化学作为一门重要的专业基础课,率先进行了混合式教学的课程建设,我们在充分利用了“学堂在线”慕课平台作为学生自主辅助学习的工具,同时以“对分易”软件作为课堂教学的辅助工具,进行课堂教学管理及过程性评价的混合式教学,取得了较好的效果。

医学生物化学课程思政的实践与探索

培养高质量医学人才是国家卫生事业发展的重要内容之一,“十四五”规划将围绕“新医科,大健康”主题,加快推进医学教育改革创新。而高等医学教育内涵式发展的核心问题是培养医德高尚、医术精湛的人民健康守护者。同时,课程思政是学校“三全育人”的重要内容之一,而作为基础医学重要课程之一的医学生物化学在医学教育中课时占比高、地位举足轻重,因此,应立足本学科特点,在课程学习中通过深入挖掘科学发展史,讲述科学家精神,融汇中国科学故事,发挥教师在思政中的主观能动性,培养爱国、敬业、仁心、技术过硬的医学创新人才。

基础医学混合式教学模式的探索与发展

基础医学是医学教育的基石,为了夯实基础医学教育,培养全面发展的医学人才,近年来进行了一系列的教学改革和创新,来适应新的要求。特别是在E时代全面到来之际,教育模式发生了翻天覆地的变化,教师可以根据专业特点以及从校情、学情的实际出发,选择合适的网络平台和软件进行立体交互的混合式教学,这将为促进医学生知识、能力、素质的全面发展起到重要作用。

姜黄素对高脂饮食诱发的代谢紊乱和脂肪组织炎症因子表达的影响

目的:观察姜黄素对肥胖SD大鼠体质量、血糖、血脂、葡萄糖耐量和脂肪组织炎症因子巨噬细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达和分泌的影响。方法:将雄性SD大鼠分别用对照饲料(control diet,CD)和高脂饲料(high fat diet,HFD)喂养9周,HFD组每天给予低、中和高剂量姜黄素(10、30、100 mg/kg),共计3周。观察姜黄素对葡萄糖耐量、体质量和血清生化参数的影响。采用实时荧光定量PCR检测脂肪组织MCP-1及TNF-αmRNA的表达。结果:高剂量的姜黄素能明显改善HFD诱发的糖耐量受损(GTT实验15 min和30 min血糖,HFD对照组分别为:(19.4±1.7)mmol/L和(16.2±1.3)mmol/L;HFD高剂量姜黄素组分别为:(13.8±1.4)mmol/L和(12.1±0.9)mmol/L;P均小于0.05。中和高剂量姜黄素处理能降低HFD动物的体质量(F=13.219,P<0.001),3个剂量组姜黄素均能降低脂肪组织MCP-1(F=7.024,P=0.001)和TNF-αmRNA(F=5.537,P=0.004)表达,血脂成分和血糖有不同程度的改善,改善程度与使用的剂量有关。结论:姜黄素能降低肥胖SD大鼠脂肪组织MCP-1和TNF-α的基因表达,从而降低脂肪组织炎症因子的产生,可能是姜黄素改善高脂饮食诱发的代谢紊乱的作用机理之一,且高和中剂量组的改善作用优于低剂量组。

三七总皂苷对肥胖小鼠代谢紊乱及脂肪组织炎性因子表达的改善作用

目的:观察三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PnS)对肥胖小鼠代谢紊乱和脂肪组织炎性细胞因子表达的影响,探讨PnS改善肥胖的作用机制。方法:将C57BL/6小鼠分别用标准饮食(Standard diet,SD)和高脂饮食(High fat diet,HFD)喂养10周,HFD组每天处以低和高剂量PnS(100、200 mg/kg),SD组每天处以200 mg/kg的PnS,对照组处以等体积的生理盐水。观察进食量、体脂、给药前后体重的变化,全自动生化仪检测血清脂质含量,采用ELISA法测定血清胰岛素和炎症因子肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor,TNF-α)的水平,实时荧光定量PCR检测巨噬细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)及TNFαmRNA的表达。结果:低和高剂量PnS处理2周能降低HFD小鼠的体脂量,降低血清胰岛素和TNF-α的水平,使脂肪组织MCP-1和TNF-αmRNA表达明显降低,血脂成分有不同程度的改善且高剂量组优于低剂量组。结论:PnS对高脂饮食诱发的代谢紊乱有一定程度的改善作用,高剂量组的改善作用优于低剂量。

GATA-1对高原红细胞增多症模型大鼠骨髓CD71^+细胞EpoR表达的影响

目的:探讨GATA-1对高原红细胞增多症(high altitude polycythemia,HAPC)模型大鼠骨髓CD71+细胞促红细胞生成素受体(EpoR)表达的影响。方法:选用雄性SD大鼠48只,随机分为对照和HAPC模型2组。在海拔4 300米自然环境下复制HAPC模型并采用骨髓细胞分类计数和血液学参数检测进行验证。应用密度梯度离心和免疫磁珠分选相结合的方法分选大鼠骨髓CD71+细胞后,应用流式细胞术和细胞免疫荧光观察其EpoR的细胞表面表达水平,Q-PCR和Western blot检测其GATA-1、EpoR mRNA和蛋白的表达变化。分别在常氧和低氧下培养CD71+细胞,筛选最佳干扰序列GATA-1 shRNA1后,转染96 h,Q-PCR和Western blot检测GATA-1、EpoR mRNA和蛋白的表达水平。结果:血液学参数和骨髓细胞分类计数结果显示,HAPC大鼠模型复制成功。与对照组比较,HAPC模型组骨髓CD71+细胞膜表面EpoR的表达增高(P<0.05),GATA-1、EpoR mRNA和蛋白的表达也明显增高(P<0.05)。相关性分析显示,两组GATA-1、EpoR mRNA和蛋白的表达均呈正相关(对照组,r=0.929,P<0.01,r=0.802,P<0.05;HAPC模型组,r=0.822,P<0.05,r=0.839,P<0.01)。GATA-1 shRNA1干扰两组骨髓CD71+细胞96 h后,EpoR mRNA和蛋白的表达低于阴性对照组(P<0.05),且在低氧条件下GATA-1和EpoR的表达仍高于相应的常氧状态。结论:GATA-1对EpoR表达的影响可能与HAPC的发生发展相关联。

锦灯笼高效液相色谱指纹图谱研究

目的:建立锦灯笼高效液相色谱(HPLC)指纹图谱。方法:采用HPLC法,Hypersil ODS2C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.6%冰乙酸(40∶60,v∶v)(三乙胺调pH6.5)为流动相进行梯度洗脱,紫外检测波长为290 nm,流速:1.0 mL/min。结果:锦灯笼药材共有12个共有峰。结论:本分析方法具有稳定、可靠和重现性好等优点,为锦灯笼药材质量控制标准提供参考。

木兰花碱对HERG钾通道蛋白表达的影响

目的探讨木兰花碱抗心律失常的作用及机制。方法将低浓度(1、3μmol/L)及高浓度(10、30μmol/L)木兰花碱分别作用于转染HERG基因重组载体的HEK-293细胞,采用Western blot法、免疫荧光化学染色法分别定量、定性检测HEK-293细胞中HERG钾通道蛋白(以下简称HERG蛋白)表达。结果低浓度木兰花碱对HERG蛋白表达无明显影响;高浓度木兰花碱作用后HERG蛋白表达明显受抑。结论高浓度木兰花碱能够抑制HERG蛋白表达,此可能为木兰花碱抗心律失常的作用机制。

高原红细胞增多症模型大鼠骨髓CD71^+细胞GATA-1和GATA-2表达的相关性

目的:探讨高原红细胞增多症(HAPC)模型大鼠骨髓CD71+细胞转录因子GATA-1和GATA-2表达的相关性。方法:雄性SD大鼠48只,随机分为对照组和HAPC模型组。在海拔4 300 m自然环境下复制HAPC模型并采用骨髓涂片、骨髓细胞分类计数和血液学参数检测进行验证。流式细胞术检测骨髓CD71^+细胞数量相对变化趋势;RT-q PCR和Western blot法检测GATA-1和GATA-2的mRNA和蛋白表达变化,低氧培养CD71^+细胞,筛选最佳干扰序列GATA-1 shRNA1后,转染96 h,RT-q PCR和Western blot法检测GATA-1和GATA-2的mRNA和蛋白表达水平。结果:骨髓细胞分类计数、涂片及血液学参数检测结果显示,HAPC大鼠模型复制成功。与对照组比较,HAPC模型组骨髓CD71^+细胞明显增多,骨髓CD71^+细胞GATA-1的mRNA和蛋白表达增高,GATA-2的mRNA和蛋白表达差异无统计学显著性。对照组GATA-1和GATA-2的mRNA和蛋白表达呈负相关,HAPC模型组GATA-1和GATA-2的mRNA和蛋白表达无显著相关性。GATA-1 shRNA1干扰96 h后,GATA-1的mRNA和蛋白表达低于对照组,但是GATA-2的mRNA和蛋白表达变化差异无统计学显著性。结论:HAPC大鼠骨髓CD71+细胞GATA-1和GATA-2表达异常,两者的负相关关系改变可能是导致HAPC发生的机制之一。

17β-雌二醇影响人精子顶体反应机制的初步研究

目的:探讨雌激素影响人精子顶体反应的可能机制。方法:应用异硫氰酸荧光素标记豌豆凝集素荧光染色法(FITC-PSA)分析精子顶体反应(AR)、以分光光度比色法测定顶体酶(ACE)活性。结果:17β-雌二醇(17β-E2)可促进精子发生AR,并增强精子顶体酶的活性;去除培养液中的Ca2+后,17β-E2不能诱导精子发生AR;PKC抑制剂能明显降低17β-E2所诱导的AR;E2-BSA亦能够促进精子发生AR,其作用与17β-E2无显著差异。结论:雌激素对人精子顶体反应有一定的促进作用,增强精子顶体酶活性可能是其作用途径之一,此过程涉及了胞外Ca2+、PKC及精子膜上的ER或雌激素结合位点的参与。

大鼠血浆中紫丁香苷的高效液相色谱法测定及药动学研究

目的建立大鼠血浆中紫丁香苷的高效液相色谱法分析方法,对其静脉给药在大鼠体内药动学过程进行研究。方法采用乙腈沉淀蛋白。色谱柱Agilent C18柱(4.6mm×250mm,5μm,USA);流动相:甲醇-1%磷酸二氢钾(40∶60,V∶V);流速:0.8ml/min;柱温:25℃;检测波长:265nm;进样量:20μl。结果大鼠血浆内源性物质对紫丁香苷药物测定无干扰,血药浓度在0.50～30.00μg/ml范围内,浓度对峰面积有良好的线性关系,r=0.9998,提取回收率大于89%,方法回收率在98.3%～100.5%之间;日内、日间精密度RSD均小于10%(n=6)。紫丁香苷在大鼠体内的血药浓度-时间曲线符合二室模型。结论该方法准确、简便、灵敏,可用于紫丁香苷在大鼠体内的药动学研究。

葛根素对兔心肌缺血再灌注损伤时SOD、ANF含量的变化

目的观察葛根素对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护效果。方法20只兔随机分为生理盐水组(A组)、葛根素治疗组(B组)。采用放免法检测血清超氧化物岐化酶(SOD)、血浆心钠素(ANF)。结果与A组比较,B组血清SOD活性、血浆ANF含量明显增高(P<0.01)。结论葛根素可明显减轻家兔心肌缺血再灌注损伤。

乳腺癌患者血清转化生长因子β_1与白细胞介素6和白细胞介素2水平及临床意义

目的:探讨乳腺癌患者血清中转化生长因子β1(TGFβ1)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素2(IL-2)的变化及其临床意义。方法:采用放射免疫分析(RIA)法测定28例乳腺癌患者、11例乳腺良性疾病患者和30例健康妇女血清TGFβ1、IL-6和IL-2的水平。结果:乳腺癌患者血清TGFβ1和IL-6活性水平均高于乳腺良性病变组及对照组(P<0.05),而IL-2活性水平则明显降低(P<0.05)。结论:乳腺癌患者血清中TGFβ1和IL-6活性水平升高及IL-2活性水平降低可能与乳腺癌发生、发展有关,测定其水平可作为临床病情观察和评估疗效的辅助手段。

不同浓度藏红花酸对HERG钾通道蛋白表达的影响

目的了解不同浓度藏红花酸对HERG钾通道蛋白的影响。方法采用Western blotting法、免疫荧光化学染色法和激光共聚焦显微镜检测法,检测不同浓度藏红花酸对稳定转染有HERG通道的HEK-293细胞中HERG钾通道蛋白表达的影响。结果1、3、10和30μmol.L-1藏红花酸对HERG钾通道蛋白的表达均无明显影响。结论藏红花酸对HERG钾通道蛋白的表达无明显影响,作为抗心律失常药物成分具有较好的安全性。

内源性一氧化氮提高TRAIL诱导的细胞凋亡率

目的探讨内源性一氧化氮在TRAIL诱导的细胞凋亡中的作用,以期了解许多肿瘤组织表达诱导性一氧化氮合成酶的分子和细胞学机制。方法用短暂转染、稳定转染方法在人胚胎肾细胞HEK293中进行重组质粒载体转染,并对可诱导表达一氧化氮合成酶NOS2载体筛选稳定可被诱导的细胞克隆。一氧化氮表达通过ponastrone A试剂进行诱导表达实现。Caspase活性通过相应试剂盒进行检测,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果成功构建了稳定可诱导表达一氧化氮合成酶的细胞克隆;内源性一氧化氮可提高TRAIL诱导的细胞凋亡率,与凋亡相关的caspase-8激酶活性亦显增加。结论内源性一氧化氮可提高由TRAIL诱导的细胞凋亡率。*

微波消解ICP-AES法同时测定藏药二十五味松石丸中的四种金属元素

目的：建立藏药二十五味松石丸中汞、金、铜和铅4种金属元素的含量测定方法。方法：采用微波消解ICP-AES法同时测定藏药二十五味松石丸中汞、金、铜和铅4种金属元素。结果：藏药二十五味松石丸中的汞的含量较高,为1.54%,金含量〈0.0001%,铜和铅的含量分别为0.38%和0.001%。加样回收率为96.40%~100.60%,精密度RSD为1.36%~2.55%。结论：本法简便、灵敏、准确,可用于藏药二十五味松石丸的质量控制。

HPLC法测定大鼠血浆中葛根素含量

目的:建立反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中的葛根素浓度。方法:取大鼠血浆,加入乙腈沉淀蛋白,吸取上清液N2吹干,残渣用20μL流动相溶解后进行HPLC分析。DiamonsilODSC18色谱柱,流动相为甲醇:水:磷酸盐缓冲液(20:78:2,v:v:v),流速:1.0mL/min,荧光检测器激发波长470nm,发射波长350nm。结果:葛根素标准曲线在(50～600)ng/mL内线性关系良好(r=0.9992,n=7)。日内和日间精密度RSD均在10%内,低、中、高3种浓度下样品的回收率均>95%。结论:该方法准确,无干扰,可用于药代动力学研究。

0微波消解ICP—AES法同时测定藏药二十五味松石丸中的四种金属元素

目的：建立藏药二十五味松石丸中汞、金、铜和铅4种金属元素的含量测定方法。方法：采用微波消解ICP—AES法同时测定藏药二十五味松石丸中汞、金、铜和铅4种金属元素。结果：藏药二十五味松石丸中的汞的含量较高，为1．54％，金含量〈0．0001％，铜和铅的含量分别为0．38％和0．001％。加样回收率为96．40％～100．60％，精密度RSD为1．36％～2．55％。结论：本法简便、灵敏、准确，可用于藏药二十五味松石丸的质量控制。