病理生理学PBL教学案例的编写与实践

PBL教案是开展病理生理学PBL教学的关键环节,其优劣将直接影响到PBL教学效果。为进一步开展病理生理学PBL教学,提高教学效果,青海大学医学院病理生理教研室组织编写了适合于本校的病理生理学PBL教案。文章对教案的编写进行了总结,并提出了相关建议,为今后教学工作的进一步提高奠定了基础。

间歇性低压缺氧预处理对大鼠全脑缺血/再灌注海马CA1区Ngb和Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨间歇性低压缺氧预处理对大鼠全脑缺血/再灌注海马CA1区脑红蛋白(Ngb)和Bcl-2蛋白表达的影响。方法:将Wistar大鼠随机分为假手术组、低压缺氧预处理对照组、全脑缺血/再灌注组、低压缺氧预处理+全脑缺血/再灌注组4组,将间歇暴露于低压缺氧环境的大鼠作为低压缺氧预处理对照组。采用Pulsinelli四血管闭塞法复制大鼠全脑缺血/再灌注模型,夹闭颈总动脉造成全脑缺血8 min后再灌注。用硫堇染色法和免疫组织化学方法分别观察大鼠海马组织学改变和海马组织Ngb、Bcl-2蛋白表达变化。结果:低压缺氧预处理+全脑缺血/再灌注组大鼠海马CA1区存活细胞数较全脑缺血/再灌注组明显增加,其海马组织Ngb和Bcl-2蛋白表达量较全脑缺血/再灌注组显著升高。结论:间歇性低压缺氧预处理可能通过上调海马组织Ngb和Bcl-2蛋白的表达,减少全脑缺血再灌注后海马神经元的死亡而发挥神经保护作用。

低压低氧对SD大鼠肺动脉压及肺组织骨桥蛋白表达的影响

目的观察不同时间低压低氧刺激下SD大鼠肺动脉压及肺组织骨桥蛋白(OPN)表达的变化,探讨OPN在肺动脉高压发病机制中的作用。方法将30只SD大鼠随机分成5组:对照组(海拔2 260 m)、低压低氧(低压氧舱模拟5 000 m海拔)1天组、7天组、14天组、21天组,每组动物均测定平均肺动脉压(m PAP)和右心室肥厚指数[RV/(LV+S)];并分别采用RT-PCR法检测各组大鼠肺组织中OPN m RNA的水平,Western blot技术检测各组大鼠肺组织中OPN蛋白表达水平。结果低压低氧1天、7天、14天、21天组动物m PAP均高于对照组(P<0.05),1天、7天、14天组呈逐渐增高趋势、21天组m PAP下降,差异有显著性(P<0.05);低压低氧7天组、14天组、21天组动物呈现随低氧时间延长RV/(LV+S)逐渐增高的趋势、均高于对照组和1天组(P<0.05),但1天组、7天组和对照组间差异无显著性(P>0.05);RT-PCR法和Western blot法结果显示低压低氧1天、7天、14天、21天组动物肺组织中OPNm RNA、OPN蛋白表达水平与对照组比较均增高(P<0.05)。结论低压低氧刺激可使m PAP和RV/(LV+S)增高并促进大鼠肺组织OPN的表达增高,因此OPN可能参与高原性心脏病形成中肺动脉压的增高和右心室重塑。

氯化血红素对全脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡和caspase-3表达的影响

目的探讨氯化血红素(Hemin)对全脑缺血/再灌注(I/R)海马CA1区神经元的保护作用及机制。方法将138只Wistar雄性大鼠随机分为四组,对照组只凝闭双侧椎动脉,暴露但不夹闭双侧颈总动脉;I/R组凝闭双侧椎动脉,夹闭双侧颈总动脉8 min后恢复血液再灌流;预防组在全脑缺血前按药物不同剂量、时间、途径、次数给药,手术操作同I/R组;治疗组手术操作同I/R组,按全脑缺血8 min恢复血液再灌流后按药物不同剂量、时间、途径、次数给药。采用凋亡细胞原位标记法检测各组大鼠海马CA1区神经细胞凋亡阳性个数,采用免疫组化法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3表达变化。结果 I/R组、预防组、治疗组凋亡细胞及caspase-3阳性细胞数明显高于对照组,预防组、治疗组凋亡细胞及caspase-3阳性细胞数明显低于I/R组,P均<0.05。结论 Hemin在脑缺血前后的有效时间内对I/R大鼠海马CA1区神经有保护作用,其机制可能为抑制caspase-3表达,减少细胞凋亡。

胃癌患者血清P53蛋白与抗体检测的比较

目的比较胃癌患者血清P53蛋白与抗体检测的敏感性。方法采用间接ELISA法检测胃癌患者血清P53抗体,夹心ELISA法检测胃癌患者血清P53蛋白。结果胃癌患者血清P53蛋白阳性率为14.0%,抗体阳性率为32.0%,二者差异有统计学意义(P<0.05)。结论胃癌患者血清P53抗体的检测比P53蛋白的检测更敏感。

间歇性低压低氧预处理对大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区神经元DND及HSP70表达的影响

目的探讨间歇性低压低氧预处理(Hypobaric Hypoxia Preconditionin,HHP)对大鼠全脑缺血/再灌注(Global cerebral ischemia and reperfusion,GCIR)后海马CA1区神经元迟发性死亡(Delayed Neuron Death,DND)及热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法将Wistar大鼠48只随机分为四组:假手术组(Sham组)、低压低氧对照组(HHP组)、全脑缺血/再灌注组(GCIR组)、低压低氧预处理+全脑缺血/再灌注组(HHP+GCIR组)。采用吴穹改良的复制间歇性低压低氧环境模型,选用四血管闭塞法复制大鼠GCIR模型。硫堇染色下观察海马CAl区锥体神经元组织学分级(Histological grade,HG)和神经元密度(neuronal density,ND),反映锥体细胞DND程度;免疫组织化学方法观察神经细胞HSP70阳性细胞表达变化,将四组结果进行统计学比较。结果 Wistar大鼠HHP+GCIR组海马CA1区较GCIR组HG分级降低、ND明显增加(P<0.05),HSP70阳性表达明显增高(P<0.05)。结论推测间歇性HHP是通过上调神经细胞HSP70的表达,减少神经元DND,发挥对脑组织的保护作用。

高原低氧应激诱导大鼠海马CA1区神经元凋亡及其机制

目的探讨高原低氧应激诱导大鼠海马CA1区神经元凋亡及其机制。方法将48只Wistar大鼠随机分为低海拔组和高海拔组各24只,分别于海拔400m和4300m喂养30d后处死大鼠取海马组织:6只行硫堇染色及电镜观察CA1区神经细胞形态变化;6只行流式细胞仪检测神经元凋亡率;6只予比色法测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;6只采用免疫组织化学方法观察CA1区COX-2表达。结果硫堇染色示两组CA1区神经细胞形态基本一致;电镜显示高海拔组CA1区神经细胞形态、胞质内细胞器有明显损伤;高海拔组神经元凋亡率、MDA水平及COX-2表达均明显高于低海拔组(P均<0.05),SOD活性两组间相比无显著差异。结论高原低氧应激可诱导海马神经元凋亡,其机制可能为上调海马CA1区COX-2表达。

TRAF4在胃癌组织中的表达及意义

目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)在胃癌发生、发展中的作用.方法:应用组织芯片采用免疫组织化学法检测10例正常胃组织、45例胃癌及癌旁组织中TRAF4的表达,TUNEL法检测TRAF4阳性胃癌及正常胃组织中细胞凋亡.结果:TRAF4在正常胃组织中呈浆、核阳性表达.其浆阳性率在正常胃组织(80%)、不典型增生(93.3%)和胃癌(95.6%)中逐渐增高,但差异无统计学意义.而核阳性率在正常胃组织中高于胃癌(70.0%vs35.6%,P<0.05),在高分化胃癌中高于低分化胃癌(71.4%vs26.1%,P<0.05),在无淋巴转移胃癌中高于伴有淋巴转移(52.4%vs20.8%,P<0.05).TRAF4表达阳性正常胃组织细胞凋亡百分率高于胃癌组织(75vs37.2,P<0.05).结论:TRAF4在胃癌中具有较低核表达,且其核表达与胃癌分化程度呈正相关,与胃癌转移呈负相关,同时可能抑制胃癌凋亡.

九味牛黄散对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响

目的观察藏药九味牛黄散对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响。方法30只SD大鼠随机分为假手术对照组(6只)、HIRI模型组(缺血45min者6只、缺血-再灌注45min者6只)、九味牛黄散组(缺血45min者6只、缺血-再灌注45min者6只)。测定大鼠肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量及测血清谷丙转氨酶(SGPT)、谷草转氨酶(SGOT)活性。结果HIRI组和九味牛黄散组大鼠血清SGPT、SGOT无显著差异;九味牛黄散组,缺血45min时肝组织MDA含量较HIRI组显著升高(P<0.05),肝组织SOD活力较正常对照组降低(P<0.05);再灌注45min时肝组织SOD活力较HIRI组明显降低(P<0.05)。结论九味牛黄散对肝缺血再灌注损伤无明显保护作用,反而引起肝脏抗氧化能力降低。

体外传代培养对大鼠血管平滑肌细胞OPN mRNA表达的影响

目的探讨体外传代培养对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型标志分子骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)mRNA表达的影响。方法选择未经培养传代的VSMCs和体外传代一至五代的VSMCs作对比研究。用RT-PCR法检测VSMCs中OPN mRNA相对表达水平。结果体外培养至第一代时,VSMCs的OPN mRNA表达量较原代VSMCs显著增高(P<0.01),且随传代代数的增加有逐渐增高趋势。结论 OPN在原代VSMCs中表达甚微,体外培养可促使VSMCs多量表达OPN,OPN为VSMCs合成表型标志分子,即体外培养可促使VSMCs从收缩表型转为合成表型。

胃癌患者血清PCNA蛋白变化及意义

目的探讨胃癌患者血清PCNA蛋白水平与胃癌的相关关系。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胃癌患者血清PCNA蛋白水平并行相关分析。结果胃癌患者血清PCNA蛋白含量与正常者相比无显著性差异。结论血清PCNA蛋白水平与胃癌不存在相关性。*

老年低血糖误诊1404例文献分析

目的:探讨老年低血糖反应被误诊的情况和原因,提出减少老年低血糖被误诊的对策。方法:收集《中国期刊全文数据库》1984年1月至2006年2月报道的有关低血糖反应误诊相关文献,总结分析低血糖被误诊为其他疾病的种类及误诊原因。结果:共检索到相关文献618篇,最终纳入84篇文献及1 404个误诊病例;误诊病例最多的是脑血管意外、占76.64%,其次是癫痫和心脏病、分别占4.84%和2.85%;误诊原因归纳为11项原因,共206条,主要有病史采集及体检不仔细(21.36%)、诊断思维局限(18.45%)及临床表现复杂或不典型(16.50%)。结论:低血糖被误诊主要发生在患者临床表现以脑功能障碍为主时,误诊原因主要与医务人员专业素质欠缺、工作责任心不强和糖尿病患者教育管理不足有关。

高海拔少数民族地区胃溃疡穿孔96例分析

目的:探讨高海拔少数民族地区不同生活习惯和饮食结构对胃溃疡穿孔发病的影响。方法:对2000-2010年青海省海西地区96例胃穿孔患者的民族、饮食结构和生活习惯进行分析。结果:96例胃溃疡穿孔患者中蒙古族37例(38.5%),藏族29例(30.2%),回族19例(19.8%),汉族11例(11.5%),2005年后发病人数逐年下降。结论:高海拔少数民族地区胃溃疡穿孔发病率增加但受国家卫生政策影响。

组织芯片技术在检测胃癌组织中TRAF4表达中的应用

目的探讨组织芯片技术诊断胃癌的价值。方法采用免疫组化法检测胃癌组织芯片(胃正常组织10份、增生组织45份、胃癌组织45份)中肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)的表达。结果 TRAF4胞质阳性率在正常组织、增生组织和胃癌组织中逐渐增高,但差异无统计学意义。胞核阳性率逐渐降低,正常组织显著高于胃癌组织,P<0.05;胃癌组织中高分化者显著高于低分化者(P<0.05),无淋巴转移者显著高于有淋巴转移者,P<0.05。结论组织芯片可大规模、高效率检测胃癌组织样本,具有快速、方便、经济、准确等特点,可用于胃癌的早期诊断。

人骨肉瘤细胞系MG-63细胞球形成细胞干性特征

目的从人骨肉瘤细胞系MG-63中分离细胞球,鉴定其干性特征并探讨其与侵袭、转移的相关性及可能机制。方法无血清悬浮培养富集MG-63细胞球,PKH26染色确定细胞球中存在干细胞,Western blot检测细胞球干性相关蛋白表达。甲基纤维素半固体培养及Transwell小室检测细胞球自我更新及侵袭能力,并对上皮间质转化和侵袭、转移相关蛋白进行检测。结果 MG-63细胞无血清悬浮培养11 d后形成的细胞球中存在单个PKH26阳性细胞。与MG-63单层细胞相比,干细胞相关蛋白OCT-4、SOX2和Nanog表达显著提高(P<0. 05)。MG-63细胞球细胞成球数是单层细胞的1. 84倍(P<0. 01),侵袭能力较单层细胞提高1. 45倍(P<0. 01)。细胞球中E-cadherin低表达,snail及MMP2高表达(P<0. 05)。结论骨肉瘤细胞系MG-63细胞球形成细胞具有干性特征,通过上皮间质转化促进了细胞的侵袭与转移。

体外培养对家兔血管平滑肌细胞细胞周期和超微结构的影响

目的探讨体外传代培养对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)细胞周期和超微结构的影响,确认体外培养对VSMCs增殖和细胞表型的影响。方法选择以未经培养传代的VSMCs和体外培养的第四代VSMCs作对比研究,采用流式细胞术检测VSMC细胞周期,透射电镜观察VSMCs的形态学特征,确定其表型转换及增殖特征。结果电镜观察显示,未经培养传代的VSMCs胞浆中肌丝分布丰富、均匀,并可见到收缩表型VSMCs的典型结构——密斑,内质网、高尔基复合体等细胞器相对较少;而体外培养至第四代时VSMCs胞浆中肌丝明显减少,内质网、高尔基复合体明显增多。流式检测结果显示,体外培养至第四代时的VSMCs和原代细胞比较,细胞增值率增加;G0/G1期细胞减少,S期细胞增多。结论VSMCs体外培养至第四代,在细胞增殖的同时,即可从典型的收缩表型转化为合成表型,提示VSMCs是一种很容易去分化的细胞,体外培养可使VSMCs增殖并伴表型转化。

胃癌患者血清P53、PCNA抗体的检测及意义

目的:了解P53、PCNA抗体在胃癌血清学检测中的意义。方法:采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测胃癌患者血清P53、PCNA抗体。结果:胃癌患者血清P53、PCNA抗体阳性率均高于正常且具有显著性差异。结论:P53与PCNA抗体可用于胃癌血清学检测。

原发性干燥综合征患者唇腺组织γ-干扰素、Fas、FasL的表达及意义

目的通过检测原发性干燥征(PSS)患者唇腺组织中γ-干扰素(IFN-γ)、Fas、FasL的表达情况,探讨它们在PSS患者和对照者的表达是否有差异,以及γ-干扰素、Fas、FasL间的相互关系,进一步探讨γ-干扰素、Fas、FasL在PSS发病机制中的作用及意义。方法采用免疫组织化学法测定20例PSS患者及8例对照者唇腺γ-干扰素、Fas、FasL阳性细胞数。结果 PSS患者唇腺组织γ-干扰素、Fas、FasL高表达于导管、腺泡上皮细胞,高于对照组(P<0.05);PSS患者唇腺组织γ-干扰素、Fas、FasL的表达均呈正相关(P<0.05)。结论γ-干扰素、Fas、FasL在PSS患者唇腺组织中存在异常表达,提示γ-干扰素、Fas、FasL可能参与PSS的发病过程。

不同Hemin预处理条件对全脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区迟发性神经元死亡的影响

目的观察不同条件下氯化血红素(Hemin)预处理对全脑缺血/再灌注(I/R)大鼠海马CA1区迟发性神经元死亡(DND)的影响。方法将102只雄性Wistar大鼠随机分成17组,应用四血管闭塞法复制I/R模型,予不同时间、不同剂量、不同途径、不同次数的Hemin预处理,观察(硫堇染色下)大鼠海马CAl区神经元组织学分级(HG)和神经元密度(ND),对DND进行评价。结果所有Hemin预处理组大鼠海马CAl区HG和ND与Sham、I/R组比较,除I/R前48 h、20 mg/kg、1次灌胃预处理组外,结果存在差异(P<0.05);所有Hemin预处理组中I/R前24 h、80 mg/kg、3次灌胃预处理组ND值最高,HG最低(P<0.05);I/R前Hemin 50、80 mg/kg预处理组海马CAl区ND值高于20 mg/kg预处理组(P<0.05),Hemin 50、80 mg/kg预处理组间ND值差异无统计学意义(P>0.05);Hemin不同时间预处理ND值大小规律为I/R前24 h>0.5 h>48 h;Hemin灌胃给药效果好于腹腔注射(P<0.05);I/R前Hemin3次预处理ND值高于单次预处理(P<0.05)。结论 HeminI/R前24 h、80 mg/kg、3次灌胃预处理下,或最有效减少I/R大鼠海马CA1区DND,发挥对脑组织的保护作用。