祁连山东段高寒草甸高原鼢鼠和白牦牛营养生态位及其种间关系

了解同域分布的高原鼢鼠和家畜的营养生态位关系,对于正确认识高原鼢鼠在草地生态系统中的功能和位置,以及科学界定其危害具有重要意义。本研究选择祁连山东段高寒草甸同域分布的高原鼢鼠与白牦牛作为研究对象,通过稳定性同位素(13C和15N)技术研究二者的营养生态位及其种间关系。结果表明,高原鼢鼠食物源中的15N和13C稳定同位素在其肌肉中富集的时间最短,在毛发和骨骼中富集的时间最长,而白牦牛食物源中的15N和13C稳定同位素在其毛发中富集的时间最短,在肌肉和骨骼中富集的时间最长;白牦牛各组织中,肌肉组织的营养层次(NR)、摄食来源的多样性水平(CR)、δ13C/δ15N围成的总面积(TA)和校正后的总面积(SEAC)最高,其次是骨骼组织,在毛发中最低,而在高原鼢鼠各组织中,骨骼组织的上述4种生态位指标最高,其次是肌肉组织,在毛发中最低;2种食草动物只有在肌肉组织中有生态位重叠,重叠面积为0.192‰2,分别占白牦牛和高原鼢鼠生态位面积的10.15%和31.32%,毛发和骨胶原组织中无生态位重叠。综上所述,同域分布的高原鼢鼠和白牦牛的营养生态位在短时间尺度上存在重叠,而在长时间尺度上存在明显分化现象。

不同灭鼠饵剂对青海田鼠的防治效果评价

本研究选择“新贝奥”、C型肉毒梭菌颗粒剂和C型肉毒梭菌水剂3种灭鼠剂,对果洛藏族自治州玛沁县高寒草甸栖息的青海田鼠进行防控实验,观察不同类型灭鼠饵剂及其剂量对青海田鼠的防治效果。结果表明,饵剂投放7 d和10 d后,C型肉毒梭菌颗粒剂的防效分别为71.02%和76.41%,显著优于“新贝奥”和C型肉毒梭菌水剂;饵剂投放第15 d, C型肉毒梭菌水剂的防效为87.78%,显著优于其他两种饵剂;在投饵4个月后,“新贝奥”饵剂的防效显著大于其余两种灭鼠饵剂。C型肉毒梭菌颗粒剂在短期内对青海田鼠的控制作用相对较好。

血清浓度对共培养条件下牛原代肌肉卫星细胞及前体脂肪细胞活性影响

为探索添加血清浓度对共培养条件下细胞活性的影响,本研究采集新生秦川犊牛背最长肌和肾周脂肪,分离提取前体脂肪细胞和肌卫星细胞,建立以DMEM/F12培养基,不同细胞混合比例(肌肉细胞:脂肪细胞=10:1、5:1、2:1)的多种共培养体系,通过调整各共培养体系培养基中的胎牛血清比例(5%、10%、15%、20%的胎牛血清,FBS),来研究血清浓度对各共培养体系中细胞活性的影响。共培养14d,每两天更换对应培养基,并采用MTT染色法测定共培养细胞的细胞活性。统计分析后发现:共培养细胞活性随着血清浓度的上升而增加;15%FBS和20%FBS浓度下细胞活性均显著高于5%FBS组和10%FBS组(P<0.05);虽20%FBS组细胞活性高于15%组,但差异不显著(P>0.05)。综上,为了获得最好的牛肌卫星细胞和前体脂肪细胞共培养效果,达到较高的细胞培养活性,建议采用15%(v/v)以上的FBS进行共培养。

牛原代肌肉卫星细胞和前体脂肪细胞不同混合比例共培养细胞活性的比较

为探索不同细胞混合比例对牛原代肌肉卫星细胞和前体脂肪细胞共培养体系细胞活性的影响,本研究采集新生秦川犊牛背最长肌和肾周脂肪,分离提取肌卫星细胞和前体脂肪细胞,采用DMEM/F12培养基,建立不同血清浓度(5%、10%、15%、20%的胎牛血清,FBS)的牛原代肌肉卫星细胞和前体脂肪细胞的共培养体系,然后通过分别调整各共培养体系中肌卫星细胞和前体脂肪细胞的混合比例(肌肉细胞∶脂肪细胞=10∶1、5∶1、2∶1),来研究细胞混合比例对各共培养体系的影响。共培养14d,每两天更换培养基,并采用MTT染色法测定细胞活性。统计分析后发现∶随着共培养体系中前体脂肪细胞比例增加,共培养细胞活性增加;共培养10d以后不同混合比例细胞活性有着显著差异(P<0.05);混合比例为2∶1时共培养细胞活性最高。综上,为了获得最好的牛肌卫星细胞和前体脂肪细胞共培养效果,达到较高的细胞培养活性,建议牛肌卫星细胞和前体脂肪细胞按5∶1或2∶1的混合比例进行共培养。

青海天峻地区人和羊源细粒棘球蚴流行株基因分型及基因多态性研究

目的解析青海天峻地区人和绵羊细粒棘球蚴流行株的基因型及基因多态性。方法根据Gen Bank公布的细粒棘球绦虫线粒体基因组序列,分别针对cox1和nad1基因设计特异性引物,对16份绵羊源和2份人源细粒棘球蚴分离株样品进行PCR扩增、测序及cox1和nad1基因核苷酸序列多态性和单倍型分析。结果 18株细粒棘球蚴分离株均属于G1型。其中cox1基因单倍型共有9种,变异位点16个,单倍型序列之间碱基差异0~5个,变异率达0.31%;nad1基因单倍型共有7种,涉及变异位点共15个,单倍型序列之间碱基差异1~8个,变异率达0.89%。结论青海天峻地区人和绵羊细粒棘球蚴流行株为G1型,其cox1基因多态性较nad1基因多态性丰富;cox1基因用于细粒棘球蚴分离株间核苷酸多态性分析的分辨率较高。

春季休牧时间对藏嵩草型草甸植物种群生态位的影响

【目的】探究春季休牧对藏嵩草型草甸植物生态位的影响,为草地恢复以及生物多样性保护提供数据支撑和理论指导。【方法】在返青期设置放牧和4个休牧时间处理(20,30,40,50 d),于控制试验第2年7月中旬对植物群落进行调查,并将休牧时间作为环境梯度,研究藏嵩草草甸植物种群生态位特征。【结果】休牧30,40,50 d莎草科的重要值和地上总生物量比放牧显著增加,但毒害草的重要值呈相反趋势;莎草科、禾本科、阔叶型可食草的地上生物量在休牧50 d增加最显著,分别增加了220.99%、69.73%和139.37%;藏嵩草、藏异燕麦、垂穗披碱草和紫羊茅的生态位宽度值(N_(B))最大(0.999),而圆叶毛茛的NB最小(0.889);生态位重叠值(N_(O))大于0.990的有55对,占总数的26.10%,N_(O)小于0.75的有3对,占总数的1.43%。【结论】春季较长的休牧时间促进莎草科和禾本科植物的生长,抑制毒害草的生长;从生态位角度分析,藏嵩草草甸物种的重要值越高,其生态位宽度越大,更有利于优良牧草的生长,可有效促进草地恢复。

腹泻羔羊中大肠杆菌的分离鉴定及耐药基因检测分析

为了解我省羔羊腹泻性大肠杆菌的耐药性并检测其相关耐药基因的分布,本研究从患腹泻的不同羔羊中分离到14株大肠杆菌,经过分离培养鉴定后,对六大类抗菌药物的耐药基因进行PCR扩增鉴定分析。结果显示,14株大肠杆菌对喹诺酮类和β-内酰胺类抗生素的耐药基因携带率较高,分别为100.00%和71.43%,GyrA/GyrB/ParC喹诺酮类耐药基因是抗生素耐药基因中最为流行的基因型,β-内酰胺类耐药基因型TEM/SHV(71.43%)的检出率较高,四环素类耐药基因型TetC(71.43%)、TetA(57.14%)的检出率较高,氯霉素类耐药基因型Cat(57.14%)检出率较高,磺胺类耐药基因型Sul1/Sul2/Sul3(42.86%)中等检出率;氨基糖苷类耐药基因型aphA3/aadA/aacC2(28.57%)和aacC4(0.00)的检出率较低。结果表明,本次分离的羔羊腹泻性大肠杆菌的耐药性非常严重,同时存在多重耐药现象,提示养殖场应合理使用抗生素。

宠物园犬腹泻病原的分子鉴定分析

通过对西宁地区宠物园18例犬腹泻病直肠粪便拭子采样,进行病原的DNA(RNA)基因组的提取,运用PCR进行分子鉴定分析,确诊引起临床症状的主要病原,以期为临床上有效防治犬腹泻提供参考。结果表明,18例样本均为犬细小病毒阳性,犬瘟热病毒阴性; 4例为隐孢子虫阳性,均为犬隐孢子虫(Cryptosporidium canis); 6例为贾第鞭毛虫阳性,基因型包括Giardia intestinalis assemblage B、C和D。这个宠物园的18只患犬主要是病原感染引起的腹泻,包括病毒性感染(100. 0%)和寄生虫性感染(44. 4%),可见犬只均为带毒带虫的隐性感染状态。经过分子鉴定病原后,针对性地对病毒性和寄生虫性病原,合理采用对症治疗、对因治疗和辅助支持治疗方法进行全面有效的救治预防。

不同双低菜籽油水平饲粮对牦牛体外瘤胃发酵特征及甲烷产量的影响

本试验旨在探讨不同水平双低菜籽油对牦牛瘤胃发酵特征及甲烷(CH4)产量的影响,为合理利用双低菜籽油调控牦牛瘤胃发酵提供理论依据。试验采用单因素试验设计,发酵底物为配制的4种精料和青贮燕麦风干草按照精粗比50∶50混匀得到的4组不同双低菜籽油水平饲粮,各组双低菜籽油水平分别为3.26%(Ⅰ组)、4.58%(Ⅱ组)、5.45%(Ⅲ组)和6.27%(Ⅳ组)。体外模拟瘤胃发酵培养48 h,分别在3、6、9、12、24、36和48 h时记录产气量,计算体外产气参数;并测定体外干物质消失率(IVDMD)及发酵液CH4产量、pH和氨态氮(NH3-N)、微生物蛋白(MCP)、挥发性脂肪酸(VFA)含量。结果表明:1)Ⅳ组48 h产气量和慢速降解部分的产气量显著低于其他各组(P<0.05),Ⅰ组理论总产气量显著高于其他各组(P<0.05)。2)Ⅳ组发酵液的乙酸和总挥发性脂肪酸(TVFA)含量显著高于Ⅰ、Ⅱ组(P<0.05),Ⅲ组发酵液的异丁酸和异戊酸含量均极显著高于其他各组(P<0.01),Ⅳ组发酵液的丁酸含量极显著高于其他各组(P <0.01)。3)Ⅳ组24 h IVDMD显著低于其他各组(P<0.05)。4)Ⅲ组发酵液的12 h CH4产量极显著低于其他各组(P<0.01),Ⅳ组发酵液的24 h CH4产量极显著低于Ⅰ、Ⅱ组(P<0.01),Ⅳ组发酵液的48 h CH4产量极显著低于其他各组(P<0.01)。5) CH4产量与饲粮粗脂肪(EE)含量呈极显著负相关关系(P<0.01),利用饲粮EE含量(x)预测其体外CH4产量(y)的方程为:y=-0.53x+13.52(R2=0.962 7)。由此可见,不同水平双低菜籽油饲粮中油脂含量的提高对产气动力学参数及动态变化有一定影响,会改善瘤胃发酵并有效降低CH4产量。当饲粮双低菜子油水平达到6.27%时,会抑制产气量及IVDMD。饲粮EE含量可作为预测牦牛体外CH4产量的有效指标。

一例羔羊腹泻疾病中沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验

从送检的死亡羔羊中分离到1株病原菌,经病原菌的分离、生化试验、动物致死试验、药物敏感性试验,对该菌株进行了鉴定。结果表明:该病原菌为沙门氏菌。药敏试验表明在检测的17种抗生素中该菌株仅对头孢吡亏和诺氟沙星药物敏感,对多粘菌素E、环丙沙星和氧氟沙星等药物中敏,对杆菌肽、氯霉素和青霉素等药物耐药。

放牧家畜采食量及其影响因素研究进展

放牧家畜采食量是家畜生产力的主要限制因子,同时也是决定放牧季节内的最适饲养管理标准。然而,近年来对放牧家畜采食量的研究主要集中于测定方法和放牧强度对家畜采食量的影响,没有系统的研究影响放牧家畜采食量的因素。本文通过分析不同放牧方式、不同放牧季节、不同放牧家畜和不同放牧草地状况对放牧家畜采食量的影响,以及不同放牧管理对家畜采食量的影响。从而为放牧家畜的科学管理和放牧草地的合理利用提供参考依据,同时提出了放牧家畜采食量研究今后需要进一步解决的问题。

犬细小病毒西宁分离株的分子鉴定及VP2基因序列分析

本研究首次对地处青藏高原地区的西宁的犬细小病毒分离株(命名为CPV-XN1)进行了VP2基因的克隆、测序,并与我国以及我国周边国家地区的流行株,以及参考株进行了核苷酸同源性比对和进化分析。VP2基因分子鉴定结果显示,该分离株为CPV-2b亚型株,VP2基因核苷酸序列全长1755bp,蛋白长度为584个氨基酸,分子量大小约为64.58 k Da,VP2蛋白为稳定蛋白,总体亲水性较高,可溶于水,VP2蛋白的二级结构以无规则卷曲为主;VP2基因的T-B细胞共同表位为序列的97-105位点,其序列为ALDDTHAQI,位点286-294,序列为GLPPFLNSL。西宁分离株与我国各地区流行株的核苷酸序列同源性和氨基酸同源性均在99%以上;CPV-XN1分离株VP2基因氨基酸序列中的非同义突变位点有1处,在78位氨基酸处;VP2基因进化树分析发现:CPV-XN1分离株与CPV-2b北京分离株(KT162024)和CPV-2b兰州分离株(JQ268284)组成一个微小分支,并与其它CPV-2b分离株处于同一个大支上,从进化角度上鉴定此研究分离株应属CPV-2b株。因此,本实验对青海西宁CPV-XN1分离株的VP2基因抗原表位分析和系统进化的探讨结果,有望为我国CPV分子流行病学调查提供一定的数据参考依据。

鸡毒支原体的分子鉴定及其脂蛋白基因的生物信息学分析

为了对鸡集约化养殖场的疑似鸡毒支原体病死鸡样品进行检测,基于crmA基因和lipoprotein基因通过PCR方法进行分子鉴定,并对脂蛋白(Lipoprotein,LP)进行生物信息学分析,探索该蛋白的结构并预测其功能,为其蛋白功能的研究提供一定的理论基础。通过PCR方法获得了预期片段并进行测序分析,通过生物信息学软件对脂蛋白进行预测分析。结果显示,经测序鉴定为鸡毒支原体,预测LP蛋白总体亲水性较低,为疏水蛋白,二级结构包括α螺旋、β转角、无规则卷曲和延伸链,并具有5个潜在的优势抗原表位,可作为一种候选疫苗抗原。表明对本地区分离株病原进行分子鉴定研究,对诊断预防该病的发生都具有重要的现实意义;提示控制此病的发生流行,坚持预防为主,加强饲养管理,积极防治鸡毒支原体感染的发生。

兔瘟病毒西宁分离株的分子鉴定及进化分析

本研究首次对处于青藏高原的西宁的兔瘟病毒分离株(命名为RHDV-QHXN1)进行了VP60基因克隆、测序,并与参考株、我国各地区流行株和其他国家流行株进行了基因非同义置换氨基酸分析,以及基因同源性的比较和进化树分析。兔子解剖病理学显示为典型的兔瘟临床症状;并进行了PCR分子鉴定,获得了预期大小的基因片段,测序分析比对分析后确定为兔瘟病毒,命名为RHDV-QHXN1分离株。该分离株与其他参考毒株AY269825(中国江苏南京)和DQ530363(中国陕西杨凌)的核苷酸同源性分别为97.41%和97.13%,氨基酸同源性达99.14和99.31%。进化树分析显示,RHDV-QHXN1与AY269825(中国江苏南京)株聚成微小分支。对RHDV-QHXN1分离株VP60基因的非同义置换的氨基酸分析结果显示,突变位点共有6处,分别位于第351位、359位、370位、432位、508位和573位的氨基酸处。

猪鼻支原体的分子鉴定及进化分析

本研究对青藏高原地区青海猪鼻支原体分离株(Mhr-QH1)进行了Mhr-p37基因的克隆鉴定及测序分析,并利用Mhr-16S rRNA基因与Gen Bank中相关菌株基因进行了基因同源性比较和遗传进化分析。Mhr-p37基因和16S基因PCR扩增测序结果显示,获得核苷酸序列长度分别为346bp和1500bp,Mhr-QH1-p37基因核苷酸序列与中国株、法国株和美国株的同源性达到100%;同样16S rRNA基因与巴西分离株的16S rRNA基因同源性也为100%,与日本、瑞典和美国分离株的同源性为99%。进化树分析发现:Mhr-QH1分离株与巴西株聚为组成一个微小分支,与美国株和巴西株共聚为同一个大支上,并与其他Mycoplasma spp.种系进化距离较远。因此,本研究对青海猪鼻支原体菌株的Mhr-p37基因序列和蛋白氨基酸序列分析,及16S rRNA基因系统进化研究的结果,有望为我国猪鼻支原体病的分子流行病学调查提供一定的数据参考,同时提示猪场搞好饲养管理是预防本病的关键。

“农牧一体化”生产下的农田植株营养价值及载畜量

通过对比方法对"玉米田养鹅"处理(RGICF)农田植株营养价值及营养输出量进行分析。结果表明,RGICF处理地上部植株干物质含量和粗纤维含量分别低于对照,粗蛋白、粗脂肪、灰分含量分别高于对照,除灰分指标处理间差异显著(P<0.05)外,其他指标处理间差异不显著(P>0.05)。RGICF处理碳氮营养比明显低于对照,处理间差异不显著(P>0.05);RGICF处理田间植株干物质含量、粗纤维、钙和磷输出量分别低于对照,粗蛋白、粗脂肪、灰分输出量分别高于对照,上述指标处理间差异均不显著(P>0.05)。RGICF处理每公顷地上植株数量载畜量为8.62个牛单位,低于对照0.64个牛单位;地上植株粗蛋白载畜量为3.96个牛单位,高于对照0.09个牛单位。因此,RGICF处理明显提高田间地上植株的饲用营养价值,增加CP载畜量。

高寒草地青藏苔草拮抗内生细菌筛选、鉴定及其促生作用测定

为从青藏苔草Carex moorcroftii内生细菌中开发优势拮抗菌种资源,采用对峙培养法测定其叶片内生细菌对黄瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum、马铃薯炭疽病菌Colletotrichum coccodes、孜然根腐病菌F. solani等9种病原真菌的拮抗作用,对所筛选的优良拮抗内生细菌进行形态学及16S rDNA和gyr-B基因序列分析鉴定,并将其经固体发酵制成菌剂,采用生防菌剂接种方法测定其对黄瓜和辣椒的促生作用。结果显示,从青藏苔草叶片中共分离得到14株内生细菌;以黄瓜枯萎病菌作为指示菌初筛得到8株具有拮抗作用的菌株,其中菌株1Y4、1Y5、和1Y7的抑菌率均为57.53%,菌株1Y11的抑菌率为58.44%,均高于平均抑菌率56.73%;菌株1Y4具有广谱抑菌活性,对孜然根腐病和马铃薯炭疽病菌的抑菌率分别达73.33%和71.43%,且具有固氮作用;结合形态学和分子生物学鉴定,确定菌株1Y4为西姆芽胞杆菌Bacillus siamensis;以0.5%1Y4发酵菌剂处理黄瓜和辣椒,株高分别增加153.06%和117.33%,促生效果显著。表明青藏苔草内生细菌1Y4的防病促生作用良好,有开发为微生物菌剂的潜力。