层粘连蛋白α3在膝关节纤维化发生发展中的作用研究

目的:观察层粘连蛋白α3(LAMA3)在膝关节纤维化发生发展中的作用并探讨其作用机制。方法:制备兔膝关节纤维化动物模型,HE染色和Masson染色观察术区标本纤维化发展情况,免疫组化检测标本中LAMA3的表达。体外培养成纤维细胞,进行慢病毒转染,构建LAMA3过表达稳定细胞株。EdU染色观察LAMA3对成纤维细胞增殖的影响,Western blot检测LAMA3对细胞增殖相关蛋白的作用;Tunel染色观察LAMA3对成纤维细胞凋亡的影响,Western blot检测LAMA3对细胞凋亡相关蛋白的作用;Western blot检测成纤维细胞过表达LAMA3基因后,Wnt/β-catenin信号通路蛋白Wnt3a、p-GSK、β-catenin的表达;EdU染色观察Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV-939处理后细胞增殖能力的变化。结果:动物实验结果显示,随着术后时间的延长,膝关节纤维化程度加重,LAMA3表达随之增加。细胞实验结果显示,成纤维细胞过表达LAMA3后,细胞增殖能力增强,增殖相关蛋白PCNA和Cyclin D1表达增加。Tunel染色显示,成纤维细胞过表达LAMA3后细胞凋亡数量减少,且凋亡相关蛋白cleaved-PARP、Bax表达下调,而凋亡抑制蛋白Bcl-2表达上调。成纤维细胞过表达LAMA3后,Wnt3a、p-GSK、β-catenin蛋白表达上调,Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV-939处理后,LAMA3促进成纤维细胞增殖的作用明显减弱。结论:LAMA3可以促进成纤维细胞增殖,抑制其凋亡,从而促进膝关节纤维化,Wnt3a/β-catenin信号通路参与成纤维细胞增殖调控过程。