Bcl-2蛋白及caspase-3基因表达与暴发性肝衰竭肝细胞凋亡关系的研究

目的:研究Bcl-2蛋白与caspase-3基因表达在实验性暴发性肝衰竭(FHF)中对肝细胞凋亡的作用。方法:用脂多糖和D-氨基半乳糖制备FHF小鼠模型;免疫组化法检测肝组织内Bcl-2蛋白表达;原位杂交法检测肝组织内caspase-3基因表达;缺口原位末端标记技术检测肝细胞凋亡。结果:模型组用药后2 h Bcl-2有较多表达,4 h表达最多,以后逐渐减少,4 h与2 h比较差别显著(P<0.05),与8 h、12 h比较差别十分显著(P<0.01)。模型组用药后2 h caspase-3开始少量表达,8 h达最高峰,并出现典型的肝细胞凋亡改变,12 h表达下降,且同时存在肝细胞凋亡和坏死。。Bcl-2与caspase-3表达及肝细胞凋亡均呈负相关。结论:在FHF中,肝细胞凋亡与caspase-3的激活有关;Bcl-2可能通过抑制caspase-3的活性而抑制肝细胞凋亡。

暴发性肝衰竭中Fas及caspase-3与肝细胞凋亡的关系

目的研究在暴发性肝衰竭(fulminant hepatic failure,FHF)中Fas及caspase-3表达与肝细胞凋亡的关系。方法联合应用脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)制备FHF小鼠模型;采用免疫组化方法检测肝组织Fas表达,原位杂交方法检测肝组织caspase-3表达,TUNEL法检测肝组织肝细胞凋亡;在用药后2、4、8和12h动态观察Fas、caspase-3表达及肝细胞凋亡变化。结果在FHF模型小鼠中,用药后8h可出现典型的肝细胞凋亡表现,12h仍存在肝细胞凋亡。用药后2h开始Fas有少量表达,至8h和12h表达均很多,二者比较差异无显著,与2h组比较P<0.01,与4h组比较P<0.05。用药后2h caspase-3少量表达,8h达最高峰,12h较8h减少,8h与2h比较,P<0.01,与4h和12h比较P<0.05。Fas和caspase-3表达相一致。结论在FHF中,肝细胞凋亡的发生与Fas及caspase-3的表达增加有关,且Fas介导肝细胞凋亡的过程与caspase-3的激活有关。

小鼠暴发性肝衰竭肝细胞凋亡形态学及其调控机制

目的:研究在实验性暴发性肝衰竭(fulminant hepatic failure,FHF)中肝细胞凋亡的形态学变化以及一氧化氮(nitric oxide,NO)、Fas和Bcl-2对肝细胞凋亡的调控作用．方法:脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)联合应用制备FHF小鼠模型;采用免疫组化方法检测肝组织Fas 及Bcl-2表达,分别采用硝酸还原酶法和RT-PCR法检测血清NO水平及肝组织iNOS mRNA表达;TUNEL法检测肝细胞凋亡;在用药后动态观察Fas及Bcl-2表达、血清NO水平及肝组织iNOS mRNA表达及肝细胞凋亡的变化,并对模型鼠给予iNOS的抑制剂L-NMMA,动态观察上述指标的变化．结果:在FHF模型小鼠中,用药后2 h开始血清NO水平及iNOs mRNA的表达即升高,于4 h达高峰;用药后2 h 开始Fas有少量表达,至8 h和12 h表达均明显增多,与 2 h组比较差异显著(100％ vs 20％,P<0．01),与4 h组比较差异也比较显著(100％ vs 40％,P<0．05)．模型组2 h Bcl-2有较多表达,4 h表达最多,4 h与2 h比较差异显著 (90％ vs 60％,P<0．05),与8,12h比较差异非常显著(90％ vs 20%,均P<0．01)．8 h可出现典型的肝细胞凋亡表现．与模型组各时间点比较,给予iNOS的抑制剂L-NMMA 后血清NO水平及iNOs mRNA的表达均为正常水平, Fas及Bcl-2表达均无显著差异(P>0．05),阻断后8 h亦可见典型的肝细胞凋亡表现,阻断NO可使病变较模型组更为严重．结论:在FHF中,Fas及Bcl-2的表达均增加,Fas的表达与肝细胞凋亡相一致,而Bcl-2的表达与肝细胞凋亡呈负相关．单纯应用NO拮抗剂对肝细胞凋亡及肝损伤无保护作用．