樟树不同器官中多糖抗氧化、免疫调节活性的研究

采用先喷雾干燥后醇沉的方法制备樟树根多糖(CCRP)、樟树茎多糖(CCSP)、樟树叶多糖(CCLP)以及樟树果实多糖(CCFP),并用苯酚硫酸法检测各多糖的含量,通过测定多糖清除DPPH自由基、ABTS自由基的能力以及还原能力评价抗氧化活性。然后通过体外实验评估其对RAW 264.7巨噬细胞免疫调节活性。研究发现:CCRP、CCSP、CCLP和CCFP多糖的含量依次为52.35%、58.56%、56.62%和62.36%,果实多糖含量最高,抗氧化能力评价中,相同器官中粗多糖比精制多糖抗氧化活性能力强。同一浓度下,果实多糖对DPPH自由基清除能力最强,当多糖提取物浓度为2 mg/mL,清除率达到87.65%,其次是根多糖,清除率为79.63%;多糖提取物还原能力较强的部位是果实和根,在多糖浓度为2 mg/mL时还原能力分别达到最大0.98和0.85;但是各器官多糖对ABTS自由基的清除能力较弱。另一方面,CCRP、CCLP、CCFP和CCSP均可显著提高RAW 264.7细胞内一氧化氮(NO)的浓度和细胞因子如前列腺素E2(PGE2)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的分泌。免疫调节活性大小顺序为樟树果实多糖>樟树叶多糖>樟树根多糖>樟树茎多糖。CCRP、CCSP、CCLP和CCFP均具有抗氧化活性并可以提高免疫力,在功能食品的开发中,可以作为一个潜在的抗氧化、免疫调节剂。

樟树抗炎活性及作用机制研究

以樟树提取香料后的残渣为研究对象,探讨其对脂多糖(LPS)刺激RAW 264. 7细胞的体外抗炎作用及其机制。采用95%乙醇提取,然后进行萃取分为正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水5部分,采用噻唑蓝(MTT)法检测不同萃取相对RAW 264. 7细胞活性的影响;采用Griess法检测各萃取相对LPS刺激RAW 264. 7细胞的一氧化氮(NO)释放量;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中PGE2和TNF-α的分泌量;采用反转录PCR(RT-PCR)和实时定量PCR(real time RT-PCR)检测环氧合酶-2 (COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA的表达。樟树乙酸乙酯萃取相能明显抑制LPS诱导的RAW264. 7巨噬细胞NO、PGE2、和TNF-α的分泌而且无细胞毒性,从转录水平不同程度地抑制COX-2、i NOS和TNF-α的表达。证实了樟树乙酸乙酯萃取相具有抗炎作用,其作用机制与在转录水平上抑制COX-2、i NOS和TNF-α有关。

樟树果实多糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用

樟树被证明具有许多生物活性,包括抗真菌、抗氧化、抗菌、抗过敏、抗炎活性。然而,很少有研究报道樟树果实多糖(CCFP)。本研究的目的首先从樟树果实中分离出CCFP,然后通过体外实验评估其对RAW264.7巨噬细胞免疫调节活性。结果表明,CCFP可显著提高RAW 264.7细胞内一氧化氮(NO)的浓度和细胞因子如前列腺素E_2(PGE_2)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的分泌,在给药浓度为100μg/m L时,NO、TNF-α和PGE2的分泌量达到最大,分别为53.53±4.25μM、1008.32±35.23 pg/mL和434.56±25.23pg/m L。反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析结果表明,CCFP也能够提高诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)和TNF-α的表达。进一步的分析表明,CCFP通过与Toll样受体4(TLR4)蛋白结合,迅速激活细胞外信号调节激酶(ERK)、转录激活因子激活蛋白-1(AP-1)和核因子(NF)-κB。这些结果表明,CCFP可以提高免疫力,在功能食品的开发中,可以作为一个潜在的免疫调节剂。