地方高校“3+1”顶岗实习生物技术专业实践教学体系的探索与实践

对应用型地方高校生物技术专业学生实行“3+1”顶岗实习的实施方案、质量保障体系及意义进行了阐述,并对该实践教学体系进行探索与研究。实践表明,绝大部分的学生认可“3+1”顶岗实习模式。“3+1”顶岗实习提升了学生的专业技能和综合素质,真实对接了人才的“培养和需求”,有利于学生走向社会提升就业能力,有利于实现学校转型发展和地方经济发展的双赢。

福建省猪伪狂犬病病毒新流行株gD、gE基因遗传变异分析

为了解福建地区猪伪狂犬病病毒(PRV)流行毒株的分子生物学特性与变异规律。本试验分离了2011-2013年福建省不同地区的11株PRV,并对其gD、gE基因进行遗传变异分析。结果表明,福建地区被检测的规模化猪场均存在野毒感染,病料接种PK-15细胞均能出现典型的细胞病变,分离的毒株接种家兔能出现典型的伪狂犬病症状。PRVgD、gE基因序列分析表明,自2011年福建地区PRV同源性较高且处于一个独立的分支,表明福建地区流行的PRV可能存在一定的抗原变异。

肉鸡圆圈病毒3型和A型多杀性巴氏杆菌混合感染的检测与分析

为查明福建省龙岩市某鸡场肉鸡消瘦、呼吸困难、病死率升高原因,对发病鸡进行细菌分离鉴定、16S rDNA鉴定、荚膜分型检测、药物敏感试验等分析;以及进行病毒核酸PCR检测、遗传进化分析。结果显示,从病鸡中分离的细菌在血平板上形成圆形、微突起、表面光滑、奶油状的菌落;分离菌16S rDNA核苷酸序列与GenBank中公布的多杀性巴氏杆菌的同源性达到99.9%以上,菌株荚膜为A型;该菌对哌拉西林、头孢氨苄、庆大霉素等药物均表现为高度敏感;从病鸡中检测出圆圈病毒3型(GyV3)VP2基因,与GenBank(登录号MK089248)GyV3同源性最高(99.9%)。结果表明,该鸡场发生圆圈病毒3型和A型多杀性巴氏杆菌引起的混合感染病例。

微生物发酵饲料对断奶仔猪生长性能的影响

[目的]研究微生物发酵饲料对仔猪生长性能的影响,为其推广和应用提供依据。[方法]选用60头体重约8～10 kg的杜×长×大三元杂交断奶仔猪,随机分为6栏,10头/栏。对照组饲喂无抗浓缩料和金霉素70 mg/kg,试验组为微生物发酵饲料添加组,饲喂无抗浓缩料和微生物发酵料。[结果]饲用微生物发酵饲料组比常规饲料组平均日增重提高了5.56%,而料重比降低了3.53%。此外,试验组粪便中有益菌群增多,pH值下降,与对照组结果差异显著(P<0.05)。[结论]微生物发酵饲料可代替抗生素添加饲料,并可起到促进仔猪健康生长的功效。

福建地区PRRSV分离株Nsp2基因新变异序列鉴定

为了解福建省2009年以来猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株的现状、分子生物学特征和遗传演化规律,本研究收集了福建省不同地区的14株PRRSV分离株,并对其Nsp2基因进行遗传变异分析。结果表明与参考病毒株VR-2332相比共有4种类型氨基酸的缺失和1种类型的氨基酸插入,3株分离株在472位～520位和533位～561位发生了不连续的78个氨基酸缺失;2株分离株472位～520位、533位～561位和593位～595位发生了不连续的81个氨基酸缺失;1株分离株在593位～595位发生了3个氨基酸的缺失;其余8个分离株的Nsp2蛋白存在第481位和533位～561位共30个氨基酸的不连续缺失,其中有1个分离株在599位～603位插入了5个氨基酸,同时又在481位和533位～561位发生了不连续的30个氨基酸的缺失,这是国内首次发现有氨基酸插入的病毒株。这些新的缺失和插入与PRRSV致病性及其与生物学特性的关系有待于进一步研究。

猪瘟病毒福建野毒分离株FJ-1E2基因序列分析

应用RT-PCR技术对福建省某一猪场采集的疑似猪瘟样品进行猪瘟病毒E2基因扩增,并对其核苷酸序列进行分析。结果表明,猪瘟野毒与标准参考毒株及国内分离株的同源性为81%～98.1%;遗传进化树分析表明流行野毒与中国C株存在很大差异;预测的抗原表位表明该野毒株与中国C株相比发生了抗原漂移,该差异是否预示福建流行株正在向远离疫苗株的方向变异尚待进一步的研究。

福建地区猪繁殖与呼吸综合征ORF7基因遗传变异分析

为了解福建地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）流行毒株的分子生物学特性与变异规律,收集了福建省不同地区的12株PRRSV,并对其ORF7基因进行遗传变异分析。结果表明,福建地区存在欧洲型PRRS和美洲型PRRS,10株为美洲型PRRSV,与VR-2332、JXA1等美洲型参考毒株的氨基酸的同源性为89.5%-100%,与欧洲代表毒株LV的氨基酸的同源性分别为59.5%-63.6%。而FJ-11、FJ-12 2株分离株为欧洲型PRRSV,与欧洲代表毒株LV的氨基酸的同源性分别为91.4%、92.2%,而与VR-2332、CH-1a等美洲参考毒株的氨基酸的同源性为60.3%-64.5%。美洲型PRRSV ORF7编码N蛋白氨基酸虽然发生了变异,但相对保守。

微生物发酵饲料工艺条件优化的研究

生产工艺条件影响着微生物发酵饲料的产量和质量,试验对一种微生物饲料发酵的淀粉原料组成与含量、物料含水量、发酵菌液pH、发酵温度和发酵时间等工艺条件进行了优化。结果表明,接种酿酒酵母（Sacharomyces cerevisiae）和乳酸菌（唾液链球菌嗜热亚种Streptococcus salivarius subsp.thermophilus）的最优发酵工艺条件为玉米淀粉250 kg、豆粕4 000 kg、淀粉酶0.85 kg、糖化酶0.30 kg、物料含水量34%~36%、发酵菌液pH 5.0、发酵温度30℃和发酵时间90 h。

地方本科院校动物生理学实验教学改革与实践初探

以培养高级应用型人才为目的,从教学方法、教学手段和实验教学评价体系等方面介绍了龙岩学院动物生理学实验课教学改革的探索与实践,即让学生自主准备实验、采用师生互助式教学手段、合理利用实验动物和建立完善的实验教学评价体系等多方面措施激发学生的学习兴趣,以培养学生的实际动手能力、独立解决问题的能力、科学的思维方法、严谨的科学态度和创新能力。

猪增生性肠炎诊断技术研究进展

猪增生性肠炎是由胞内劳森氏菌引起的一种肠道传染病,临床表现以慢性型及亚临床型为主。猪增生性肠炎易造成猪饲料转化率低,生长速度慢。猪增生性肠炎在全球猪场流行,其发病率呈上升趋势,造成了重大经济损失。目前,国内对该病的研究较薄弱,应引起足够的重视。作者综述了猪增生性肠炎的诊断技术研究进展。

动物科学专业《分子生物学》教学改革的探索

通过教学改革寻求适合专业特点的教学方法,提高教学质量,可为学生就业打好坚实专业基础。从教材选择、教学模式、实验教学及考核方式等方面对动物科学专业《分子生物学》教学改革进行了探讨。

新形势下《动物组织学与胚胎学》实验教学改革与实践

以提高实验教学效果、培养学生的创新能力为目的,从实验教学学风、教学方法和教学环境及考核评价体系等6个方面对新形势下《动物组织学与胚胎学》实验教学模式进行了改革与实践,以为培养适应社会需求的高素质的复合型、应用性人才和创新人才打下坚实基础。

副猪嗜血杆菌的不同血清型分析与药敏实验

对闽西地区12个猪场送检的疑似猪传染性副猪嗜血杆菌(HPS)病例,采用改良TSA培养基进行细菌的分离,并对其进行细菌的形态观察、培养特性、生化试验鉴定、血清分型鉴定、药物敏感性分析。结果表明在闽西地区12个送检的猪场中流行副猪嗜血杆菌主要为4型;真空冷冻干燥法可以作为HPS长期保存的方法;药物敏感性分析表明HPS对氨苄西林钠(金头孢)、氟苯尼考(嗜血康)、头孢噻呋钠、环丙沙星等药物极敏感。

副猪嗜血杆菌血清型4、5的生物学特性及致病力

研究和比较了副猪嗜血杆菌血清型4、5的生物学特性及致病力,结果表明添加一定量胎牛血清和NAD的TSA培养基是Hps血清型4、5的良好培养基,两种菌的平板菌落形态和显微形态一致,且生理生化特征也一致;Hps血清型4、5 OmpP5的基因序列具有高度同源性,其氨基酸同源性达92.6%以上,核苷酸同源性达93.0%以上,但致病力不同,Hps血清型5的致病力要强于Hps血清型4。

一株鸡源沙门氏菌的分离鉴定及耐药性分析

从一例疑似沙门氏菌感染的发病鸡只中分离到一株细菌,对其进行培养特征、革兰氏染色、生化试验以及16S r DNA序列分析,并进一步对分离菌进行药敏试验。结果显示,该分离细菌在鲜血琼脂培养基中生长出灰白色、圆形、光滑、凸起的菌落,在SS琼脂培养基表现为中心黑色边缘半透明、圆形光滑菌落。革兰氏染色后可见革兰氏阴性短杆菌。生理生化试验结果符合沙门氏菌特征。PCR扩增出717 bp条带,经测序对比,与沙门氏菌基因同源性最高。药敏结果显示分离菌仅对头孢他啶表现敏感,对氨曲南表现中度敏感,对庆大霉素、新霉素等14种药物均表现为耐药。本研究为该地区沙门氏菌病的防治提供一定的参考。

猪伪狂犬病病毒福建株gB、gD基因的克隆和序列分析

参照已发表的扩增伪狂犬病毒（pseudorabiesvirus，PRV）gB和gD表位基因的PCR扩增引物合成2对引物，以福建分离株（LY株）提取的DNA为模板，得到目的片段gB、gD基因的长度分别为578和653hp，并进行了克隆和测序，然后与国内外其他分离株进行了核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性分析，并构建了遗传进化关系图。结果表明，LY株与GenBank中收录的国内外有代表性的标准参考分离株相比，gB、gD基因核苷酸序列的同源性分别为74．9％～98．8％、97．2％～98．1％；氨基酸序列的同源性分别为62．9％～96．4％、94．5％～96．8％。进化分析结果表明，LY株与目前国内流行的毒株在同一个进化分支内，和Ea株（湖北）、LA株（山东）亲缘关系最近，与国外分离株有一定差异。

微生物发酵饲料中乳酸含量的测定方法比较分析

通过比较分析羟基联苯比色法、EDTA定钙法、乳酸脱氢酶法3种检测方法的准确性、简便性、经济性,找到适合于测定微生物发酵饲料中乳酸含量的方法。试验结果表明,乳酸脱氢酶法检测的准确性最好、迅速,但成本高;EDTA定钙法检测虽然简便、迅速,但准确性最差;羟基联苯比色法检测效果居中,较为准确和方便。因此,乳酸脱氢酶法适合于高精度、高效率的检测;EDTA定钙法适合于迅速简便、精度要求不高的检测;羟基联苯比色法可作为企业或科研单位精度要求不高的常规检测。

Neurospora crassa LY03菌株在客家“红菌豆渣”营养物质转化中转录组及转化产物分析

分析接种Neurospora crassa菌株“红菌豆渣”不同发酵时间的营养成分,通过RNA-seq转录组学测序、实时聚合酶链反应技术和超高效液相色谱-串联质谱非靶标代谢组学联合分析方法寻找影响菌株发酵的主要差异表达基因、关键代谢物和代谢通路,探究其中重要基因cellulase(纤维酶基因)的转录表达情况。结果表明,发酵2 d是“红菌豆渣”营养物质转化的关键时期,基因表达最活跃,cellulase基因表达量也最高,发酵原料豆渣碳水化合物通过“淀粉和蔗糖代谢”、“碳代谢”途径代谢生成D-阿拉伯糖、山梨醇、D-木糖、岩藻糖、亚油酸、γ-亚麻酸和花生四烯酸等糖醇类和有机酸类化合物;发酵3 d,主要进行氨基酸代谢,豆渣原料中的蛋白质成分通过“氨基酸生物合成”途径生成谷氨酸、丙氨酸、缬氨酸等各类氨基酸;发酵4 d,主要进行次生代谢产物的生成,发酵原料豆渣中原有的大豆苷、染料木苷、染料木素等成分通过“次生代谢物的生物合成”生成新橙皮苷、番木鳖碱、角鲨烯等具有特殊生理活性的物质,产品菌丝开始老化,出现了一些指示食品腐败的油脂如溶血磷脂酰胆碱(18:4/18:1)、溶血磷脂酰胆碱(18:1)。总体上,“红菌豆渣”接种Neurospora crassa菌株发酵2 d是营养物质转化最活跃时期,发酵3 d样品成熟,发酵4 d样品开始老化、腐败。

圆圈病毒3型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

【目的】建立一种检测圆圈病毒3型(Gyrovirus 3,GyV3)的TaqMan荧光定量PCR方法,为GyV3提供快速便捷的检测技术手段。【方法】根据NCBI数据库中GyV3 VP2基因保守区序列,设计一对特异性检测引物和一条标记FAM荧光基团的探针,经过条件优化,建立用于检测GyV3的TaqMan实时荧光定量PCR快速检测方法,并进行特异性、敏感性、重复性以及模拟样品的检测试验。【结果】该方法灵敏性高,最低检测限度为1.585 copies·μL^(−1);特异性强,对其他常见禽病原不发生非特异性反应;重复性好,批内和批间变异系数均小于1%;对鸡肝脏组织DNA加入重组质粒制备的模拟样品同时进行TaqMan荧光定量PCR与SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测,均扩增出与预期相符的扩增曲线。【结论】首次建立用于检测GyV3的TaqMan实时荧光定量PCR快速检测方法,具有灵敏性高、特异性强、重复性好等优点,为GyV3的诊断和流行病学调查提供了技术支持。