分子生物学方法在儿童流行性感冒监测中的应用

目的 建立一种能够快速、特异、有效地直接从临床标本中检测流行性感冒 (流感 )病毒并进行病毒型和亚型鉴别的方法 ,同时了解近年来北京地区A3型流感病毒血凝素重链 (HA1)区基因的变异特点。方法 根据编码A、B型流感病毒膜蛋白M基因的核苷酸序列设计两对引物 ,用于同一逆转录 (RT) PCR反应中 (多重RT PCR) ,根据A、B型毒株扩增产物的大小 (分别为 5 0 6bp和2 61bp)鉴别A、B型流感病毒。另根据编码A1 和A3型流感病毒糖蛋白HA基因的核苷酸序列设计两对引物 ,与B型M基因引物用于同一RT PCR反应中 ,可区分A1 、A3或B型流感病毒 (扩增产物分别为 944bp、10 72bp和 2 61bp)。为提高检测临床标本的敏感性 ,针对A1 和A3型病毒HA基因和B型病毒M基因又设计了 3对引物作为外侧引物 ,进行巢式 PCR反应。根据第二次PCR的扩增产物在 1.2 %的琼脂糖凝胶电泳中的大小即可确定型别。经PCR扩增 1996～ 2 0 0 2年间分离的北京地区A3型流感病毒株HA1区基因 ,测序并进行序列分析。结果 用上述多重RT PCR鉴定流感病毒分离株 15 6株 ,与血凝抑制试验阳性符合率为 10 0 %。用多重巢式 PCR检测 92份已经病毒分离确定为流感的儿科临床呼吸道标本 ,与病毒分离和血凝抑制试验阳性符合率分别为 76.9% (A1 型 )、5 7.1%(A3型 )、