人神经营养因子3基因的分子克隆、表达及其产物的生物活性鉴定

以正常中国人血淋巴细胞染色体DNA为模板 ,PCR扩增出神经营养因子 3(NT3)编码基因。将所得基因片段重组于M 13噬菌体载体 ,筛选得到含中国人NT3基因的克隆。采用单链末端终止法测出其全部的核苷酸序列 ,该序列与国外文献所报道的完全一致。将NT3编码基因亚克隆于杆状病毒表达载体 ,以在大肠杆菌内转座后的重组Bacmid大分子DNA转染悬浮培养的昆虫细胞后 ,在培养上清中检测到大量成熟型的NT3 ,后者对人神经母细胞瘤SH -SY5Y -T3具有较强的促进神经突起生长的作用 ,其生物学效应可被抗人NT3多克隆抗体所阻断。

中国人β神经生长因子基因的分子克隆、序列分析及其在哺乳动物细胞中的分泌表达

以正常人血淋巴细胞染色体ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增出短体前β神经生长因子（ｐｒｅ－ｐｒｏ－β－ＮＧＦ）编码基因。将所得基因片段重组于Ｍ１３噬菌体载体，筛选得到含中国人ｐｒｅｐｒｏ－β－ＮＧＦ基因的克隆。采用Ｓａｎｇｅｒ单链末端终止法测出其全部的核苷酸序列，该序列与国外文献所报道的仅有一个碱基不同。将该基因亚克隆于真核表达载体ｐＥＶ１，经转染哺乳动物细胞ＢＨＫ后，在培养上清中检测到了成熟型β－ＮＧＦ。