基于SPR-MS联合法鉴定Mas的互作蛋白

目的基于表面等离子共振(SPR)和质谱(MS)的联用技术从细胞裂解液中鉴定Mas互作蛋白。方法将重组蛋白GST-Mas-CT和GST分别高水平固定在2张CM5芯片的4个通道上,将细胞裂解液(总蛋白质量浓度0.5 mg·mL-1)注入芯片表面,回收蛋白经超滤辅助样品制备(FASP)后,进行MS鉴定。使用韦恩图分析Mas-CT和GST的差异互作蛋白,利用DAVID数据库对Mas-CT的差异互作蛋白进行GO和KEGG分析。结果回收蛋白中共有785个Mas-CT的差异互作蛋白;生物信息学分析显示Mas互作蛋白主要富集在免疫反应、钙离子应答、感染、血小板激活等生物学过程或通路。结论SPR-MS联合法适用于从细胞裂解液等复杂体系中捕获和鉴定靶蛋白的互作蛋白。

基于SPR技术高通量检测YEATS与组蛋白多肽相互作用的研究

目的采用Biacore T200分析系统建立高通量检测蛋白与组蛋白多肽相互作用的表面等离子共振(SPR)方法。方法将生物素标记的牛血清白蛋白BSA和YEATS2蛋白分别固定在SA芯片的参比和样品通道上,将不同修饰的组蛋白多肽H3K27cr(巴豆酰化)、H3K27ac(乙酰化)和H3K27(未修饰)稀释成3.9,7.8,15.6,31.2,62.4,125,250μmol/L,依次注入芯片表面,所得数据经Biacore T200分析软件处理,计算YEATS2蛋白与多肽相互作用的亲和力。结果参比通道固定BSA有效地降低了H3K27cr多肽与芯片基质的非特异性吸附。BSA与H3K27cr无特异性结合。YEATS2与组蛋白多肽的亲和力为H3K27cr>H3K27ac>H3K27,与等温滴定微量热(ITC)技术所得结果相吻合。结论优化的SPR方法适用于高通量筛选与特定蛋白相互作用的组蛋白多肽,并可进行亲和力的检测。